小檗堿含量測定方法的研究進(jìn)展

蔣紅艷，楊元娟，劉曉穎，鄧慶華，顧群

（重慶醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 藥學(xué)院，重慶 400030）

小檗堿含量測定方法的研究進(jìn)展

蔣紅艷，楊元娟Δ，劉曉穎，鄧慶華，顧群

（重慶醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 藥學(xué)院，重慶 400030）

小檗堿是中藥黃連中的主要有效成分，測定小檗堿含量可以為其質(zhì)量評價提供依據(jù)。通過查閱相關(guān)專業(yè)文獻(xiàn)，對測定小檗堿含量的方法進(jìn)行了歸納，主要有薄層掃描法（thin layer chromatography，TLC）、紫外分光光度法（ultraviolet specterphotometry，UV）、高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）、高效毛細(xì)管電泳法（high performance capillary electrophoresis，HPEC）和熒光法等。其中高效液相色譜法分離效率高，專屬性好，靈敏度高，在質(zhì)量控制中應(yīng)用較廣泛。

小檗堿；薄層掃描法；紫外分光光度法；高效液相色譜法；高效毛細(xì)管電泳法；熒光法

2 紫外分光光度法

紫外分光光度法（ultraviolet specterphotometry，UV）靈敏度高、實驗操作簡單，易于普及。徐寧［5］測定黃柏中鹽酸小檗堿含量，檢測波長λ＝420 nm。結(jié)果顯示：鹽酸小檗堿濃度在2.0～10.0mg／mL與吸光度線性關(guān)系良好，平均回收率為97.62%，RSD＝2.90%（n＝5）。匡菊香等［6］測定了自制的苦柏痔瘺栓中小檗堿含量。以鹽酸小檗堿為對照品，在420 nm處測定其吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取3批自制的復(fù)方苦柏痔瘺栓樣品，制備樣品溶液，按擬定的實驗方法測定、記錄、計算。3批栓劑中小檗堿平均含量分別為 26.078mg／g，27.479mg／g，26.851mg／g，且 RSD＝2.6%（n＝3），說明制劑工藝和檢測方法比較穩(wěn)定。羅國平等［7］采用V-160A型紫外可見分光光度計測定了自制的小陷胸顆粒中鹽酸小檗堿的含量，檢測波長為345 nm，結(jié)果表明，在此波長處，鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度在2～10μg／mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。王麗峰等［8］采用紫外可見分光光度計測定自制的鹽酸小檗堿鼻用凝膠中小檗堿的含量，檢測波長為344 nm，結(jié)果表明鹽酸小檗堿在1.96～15.68μg／mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

3 高效液相色譜法

因其具有高效、靈敏、快速等優(yōu)點，高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）廣泛應(yīng)用于各個科學(xué)領(lǐng)域［9］。黃燕萍［10］測定炎可寧片中鹽酸小檗堿的含量，色譜柱為shimpack VP-ODS（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為甲醇 －乙腈－0.1%磷酸溶液（三乙胺 pH 3.0），梯度洗脫；流速為0.8m L／min，檢測波長為265 nm。結(jié)果顯示，鹽酸小檗堿的線性范圍為 3.838～115.1 mg／L（r＝0.9998），方法回收率均為101.29%，RSD為2.34。測定小檗堿含量常用的色譜條件見表 1、表 2。

表1 以乙腈－磷酸系統(tǒng)為流動相的色譜條件Tab.1 Acetonitrile-phosphoric acid system

表2 以甲醇－水系統(tǒng)為流動相的色譜條件Tab.2 Methanol-water system

4 高效毛細(xì)管電泳法

高效毛細(xì)管電泳法（high performance capillary electrophoresis，HPEC）具有高效、快速，操作簡便，毛細(xì)管柱不易被污染等優(yōu)點，可用于藥品中小檗堿的質(zhì)量控制。蔡梅超等［22］測定黃柏不同部位中鹽酸小檗堿的含量，電泳條件如下，緩沖液為50mmol／L硼砂（醋酸調(diào) pH＝7.0）－甲醇（85∶15）；毛細(xì)管（內(nèi)徑75μm，長度57 cm，有效長度50 cm）為分離通道，壓力進(jìn)樣，溫度為25℃，分離電壓為14 kV，檢測波長為254 nm，小檗堿為內(nèi)標(biāo)。結(jié)果顯示，鹽酸小檗堿在0.03328～0.1664 g／L之間線性良好，r＝0.99973，樣品回收率為98.79%，RSD為1.93%。黃玉芝等［23］利用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法，采用熔融石英毛細(xì)管柱（47 cm×75μm），有效長度40 cm，緩沖溶液為pH 3.0的60mmol／L磷酸鹽溶液－甲醇（65∶35），分離電壓為30 kV，進(jìn)樣時間為5 s，毛細(xì)管柱溫為25℃，紫外檢測波長為200 nm，建立了測定清胃黃連丸中鹽酸小檗堿含量的高效毛細(xì)管電泳法。房娟娟等［24］采用毛細(xì)管電泳法測定清胃黃連丸、黃連上清丸、清熱化毒丸、一清軟膠囊等含黃連成藥中鹽酸小檗堿的含量，電泳條件如下：緩沖液為60mmol／L磷酸二氫鈉∶甲醇（65∶35），用磷酸調(diào)pH值為3.5；分離電壓30 kV，檢測波長為200 nm。毛細(xì)管電泳法測定含黃連成藥中鹽酸小檗堿含快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)。王曉可等［25］采用用未涂層彈性融硅石英毛細(xì)管柱毛細(xì)管（60 cm×75μm ID，有效長度52 cm），緩沖液為0.2mol／L磷酸二氫鈉溶液＋無水乙醇（50∶50，pH5.5），分離電壓為21 kV，重力進(jìn)樣10 s，檢測波長為265 nm，建立了測定梔子金花丸中鹽酸小檗堿含量的毛細(xì)管電泳法。

5 熒光法

熒光分光光度法具有設(shè)備簡單，操作方便的特點，可用于藥品中小檗堿的質(zhì)量控制。施群等［26］測定了鹽酸小檗堿片中小檗堿的含量，條件如下，激發(fā)波長Ex＝365 nm，發(fā)射波長Em＝409 nm。

6 小結(jié)

目前，檢測小檗堿含量已有較為成熟的測量方法，如薄層掃描法、紫外分光光度法、高效液相色譜法、高效毛細(xì)管電泳法等，由于高效液相色譜法具有高效、靈敏、快速等優(yōu)點，其應(yīng)用最為廣泛。而高效毛細(xì)管電泳既可結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)建立復(fù)方制劑的指紋圖譜又可進(jìn)行多種有效成分的定量分析，還可用于體內(nèi)藥物分析開展有效成分研究，在分析藥用植物成分的領(lǐng)域具有較廣的發(fā)展前景。因此，在檢測不同藥品中的小檗堿含量時，可根據(jù)檢測的要求采取適宜的方法，達(dá)到簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏的分析目的。

［1］余海，鄭娜，盧芙蓉，等.小檗堿改善胰島素抵抗機(jī)制研究新進(jìn)展［J］.中西醫(yī)結(jié)合研究，2012，4（4）：203-205，209.

［2］張劍，張珩，焦韻蘋.薄層掃描法測定肝毒清膠囊中小檗堿含量的方法學(xué)研究［J］.醫(yī)藥前沿，2012，2（11）：148-149.

［3］彭小冰，梁光義，李智龍.薄層掃描法測定梔子柏皮湯不同劑型中鹽酸小檗堿的含量［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2012，18（7）：48-50.

［4］雷嵐芬，霍慧君，張朔生.炮制對二妙湯中鹽酸小檗堿含量的影響［J］.藥物分析雜志，2012，32（2）：330-332.

［5］徐寧.紫外分光光度法測定黃柏中鹽酸小檗堿含量［J］.中國藥業(yè)，2010，19（12）：64-65.

［6］匡菊香，葉凌飛，楊建文，等.苦柏痔瘺栓的制備及其中小檗堿的含量測定［J］.淮海醫(yī)藥，2013，3（1）：64-65.

［7］羅國平，孟會寧，張云龍，等.小陷胸顆粒中鹽酸小檗堿的含量測定［J］.河北醫(yī)藥，2012，34（10）：1568-1569.

［8］王麗峰，張思培，曹穎，等.鹽酸小檗堿鼻用凝膠的研究.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2014，33（1）：36-38.

［9］孫毓慶.現(xiàn)代色譜法及其在醫(yī)藥中的應(yīng)用［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社.2000：253.

［10］黃燕萍.HPLC測定炎可寧片中鹽酸小檗堿、黃芩苷和漢黃芩素的含量［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18（20）：97-99.

［11］邱剛，芮亞培，白曲，等.HPLC法測定暗紅小檗中小檗堿含量［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（5）：299-300.

［12］孫奇，劉芳.HPLC法測定九圣散中小檗堿的含量［J］.中國醫(yī)藥指南，2013，11（19）：484-485.

［13］孟蕾，沈圣民，張海鳴，等.效液相色譜法測定姜連止瀉片中鹽酸小檗堿的含量［J］.時珍國醫(yī)國藥，2010，21（2）：303-304.

［14］李顯峰，畢雪艷，李曉菊，等.高效液相色譜法測定金梔潔齦含漱液中鹽酸小檗堿的含量［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報，2011，27（4）：344-345.

［15］蘭青，王海濤，劉剛.高效液相色譜法測定九圣散中鹽酸小檗堿的含量［J］.中國醫(yī)藥，2011，6（2）：222-223.

［16］彭宣灝，吳和珍，馮海清，等.高效液相色譜法測定痛風(fēng)舒寧片中鹽酸小檗堿的含量［J］.湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，15（2）：31-32.

［17］子巴，熱增才旦，扎西東主，等.HPLC法測定藏藥吉堪明目藥中鹽酸小檗堿含量［J］.青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，31（1）：53-55.

［18］楊連榮，張哲鋒，齊樂輝，等.HPLC法測定孕婦金花片中小檗堿的含量［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2010，38（6）：60-62.

［19］張永創(chuàng).HPLC法測定三顆針提取物中鹽酸小檗堿含量［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2010，19（17）：32-33.

［20］周萍，周濃，張海珠.HPLC同時測定明目上清片中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量［J］.大理學(xué)院學(xué)報，2012，11（6）：12-15.

［21］張榮，段美美.雙波長高效液相色譜法測定三黃顆粒中黃芩苷、小檗堿的含量［J］.中藥新藥與臨床藥理，2013，24（2）：183-185.

［22］蔡梅超，周洪雷，王真，等.高效毛細(xì)管電泳法測定黃柏干皮和枝皮中鹽酸小檗堿的含量［J］.西北藥學(xué)雜志，2010，25（4）：270-271.

［23］黃玉芝，房娟娟，李金，等.高效毛細(xì)管電泳法測定清胃黃連丸中鹽酸小檗堿含量［J］.中國藥業(yè)，2011，2（19）：20-21.

［24］房娟娟，翟慧磊閆濱.毛細(xì)管電泳法測定含黃連成藥中鹽酸小檗堿的含量［J］.山東中 醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012，36（1）：63-66.

［25］王曉可，毋福海.毛細(xì)管電泳法測定梔子金花丸中鹽酸小檗堿和綠原酸［J］.中國實驗方 劑學(xué)雜志，2011，17（3）：86-89.

［26］施群，施淑琴.熒光分光光度法測定鹽酸小檗堿片中小檗堿的含量［J］.浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2008，32（l）：101-102.

（編校：吳茜）

Research on the progress of Berberine determ ination

JIANG Hong-yan，YANG Yuan-juanΔ，LIU Xiao-ying，DENG Qing-hua，GU Qun

（College of Pharmacy，Pharmacy of Chongqing Medical and，Chongqing 400030，China）

Berberine is the main active ingredients in Coptis.The content determination of berberine can provide the basis for its quality evaluation.Relevant provessinal literatures about determination methods of berberine were summarized，and the main methods included TLC，UV，HPLC，HPEC，fluorescence，and so on.HPLC was themostwidely used method because of its high separation efficiency，specificity and sensitivity.

Berberine；thin layer chromatography；ultraviolet specterphotometry；high performance liquid chromatography；high performance capillary electrophoresis；fluorescence

TN248.1

A

1005－1678（2014）03－0178－03

小檗堿（Berberine，Ber.）是一種異喹啉類生物堿，主要存在于小檗科等4科10屬的植物中。小檗堿的抗菌譜廣，對多種革蘭陽性菌和革蘭陰性菌有抑制作用，對阿米巴原蟲也有抑制作用。臨床上主要用于治療細(xì)菌性痢疾、胃腸炎等［1］。本文對小檗堿的含量測定方法進(jìn)行了綜述，以期為其質(zhì)量評價提供理論依據(jù)。

1 薄層掃描法

薄層掃描法（thin layer chromatography，TLC）方法簡便快速，試驗結(jié)果靈敏準(zhǔn)確，專屬性好。張劍等［2］測定了肝毒清膠囊中小檗堿含量，薄層色譜條件及掃描條件如下，薄層板為硅膠G板，厚500μm，粘合劑為0.5%的羧甲基纖維素鈉溶液；展開劑為正丁醇∶乙酸∶水（7∶1∶5）；檢測波長λ＝366 nm。彭小冰等［3］采用薄層掃描法測定梔子柏皮湯不同劑型中鹽酸小檗堿的含量，在實驗過程中考查了多種色譜條件，分別有正丁醇∶冰醋酸∶水（7∶1∶2，5∶1∶1，6∶6∶10，7∶3∶3），苯 －乙酸乙酯－異丙醇－甲醇－濃氨水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5），但都具有拖尾現(xiàn)象，而苯－乙酸乙酯 －異丙醇 －甲醇－水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）展開色譜條件最好。確定的最佳色譜條件為：硅膠G薄層預(yù)制板（100mm×200mm），苯－醋酸乙酯－甲醇－異丙醇－水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）為展開條件，于氨蒸氣和展開劑等體積飽和層析缸內(nèi)展開，取出，晾干，掃描波長340 nm，狹縫0.4mm×0.4mm。雷嵐芬等［4］采用薄層掃描法測定二妙湯中鹽酸小檗堿的含量，展開劑為苯－乙酸乙酯－異丙醇－甲醇－濃氨溶液（12∶6∶3∶3∶1），放置于用氨蒸氣與展開劑同時預(yù)飽和15min的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾 干，進(jìn)行熒光掃描，激發(fā)波長為365 nm。用薄層掃描法方法測定小檗堿含量準(zhǔn)確、可靠。

重慶市教委立項課題（KJ102501）；重慶市衛(wèi)生局立項課題（2012-1-093）；重慶市衛(wèi)生局中醫(yī)科研立項課題（2012-2-17）

蔣紅艷，女，副教授，碩士，研究方向：中藥藥理學(xué)，E-mail：jianghy200568＠126.com；楊元娟，通信作者，女，教授，碩士，研究方向：天然藥物，E-mail：yang_1889＠sina.com。