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    溫通止痛貼中黃芩苷含量的測定*

    2014-08-29 05:45:34陳浩何小女鄧運(yùn)明萬元泰
    關(guān)鍵詞:量瓶風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎黃芩

    ★ 陳浩 何小女 鄧運(yùn)明 萬元泰

    (1.江西省中醫(yī)院 江西 南昌 330006 ;2.江西中醫(yī)藥大學(xué) 江西 南昌 330004)

    眾所周知[1,2]臨床治療中,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨性關(guān)節(jié)炎等癥多年來一直都屬于疑難雜癥,尤其在臨床上使用中成藥治愈更是收效甚微。本院鄧運(yùn)明教授[3]結(jié)合多年來臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)自主研發(fā)的溫通止痛貼劑采用中醫(yī)疏通經(jīng)絡(luò)、祛除寒濕痹痛的機(jī)制,治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨性關(guān)節(jié)炎等癥臨床治療效果顯著。為控制其質(zhì)量,保證臨床用藥安全、有效,有必要對溫通止痛貼質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)再進(jìn)行深入研究,因此采用HPLC法對溫通止痛貼中黃芩苷的含量進(jìn)行測定。

    1 儀器與試劑

    1.1 儀器 電子天平BS 124S(北京賽多利斯儀器);超聲波清洗器DL360B(上海之信儀器有限公司);微型植物試樣粉碎機(jī)KN-500型(長沙康寧電子科技有限公司);恒溫鼓風(fēng)干燥箱DHG-9070A 型(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);安捷倫1260。

    1.2 試劑 黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110715-201117);色譜甲醇;水為超純水,其余實(shí)驗(yàn)所用化學(xué)試劑均為分析純試劑。

    1.3 色譜條件 色譜柱:C18安捷倫液相色譜柱(4.6mm×150mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇: 0.125%磷酸(47∶53);檢測波長:278nm;流速:1mL/min;柱溫: 30℃。

    2 含量的測定[4-10]

    2.1 黃芩苷對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品9.7mg于50mL量瓶中,加適量甲醇使溶解,用甲醇定容至刻度,搖勻,超聲10min,過微孔濾頭于小瓶,即得儲(chǔ)備液。

    2.2 供試品溶液的制備 刮取溫通藥膏50g于研缽中,研勻,精密稱定5g于圓底燒瓶中。分別加入75%乙醇150,100mL于水浴(85℃)中回流提取兩次,每次40min,放冷、濾過,合并濾液,置分液漏斗中,用石油醚(60~90℃)萃取三次,棄去醚液,蒸干,殘?jiān)眉状级哭D(zhuǎn)移至25mL量瓶中作為母液,加甲醇至刻度,搖勻。精密吸取母液5mL于25mL量瓶中,用甲醇定容,超聲10min,過微孔濾頭,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。精密吸取黃芩苷對照品適量,加甲醇制成每1mL含58.2μg的溶液,作為對照品溶液。

    2.3 線性關(guān)系的考察 精密取儲(chǔ)備液取1, 2, 3, 5, 7mL溶解于5個(gè)10mL量瓶中,取甲醇稀釋至刻度,搖勻,超聲10min,以儲(chǔ)備液及稀釋的五個(gè)濃度的黃芩苷溶液建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,每次進(jìn)樣量10μL,以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)X,峰面積為縱坐標(biāo)Y繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求得回歸方程:Y=31939X-74.533,r=0.9997(n=6)。結(jié)果表明:黃芩苷在進(jìn)樣量0.194~1.94μg范圍內(nèi),進(jìn)樣量與峰面積呈良好線性關(guān)系。

    2.4 陰性干擾試驗(yàn) 取陰性樣品適量,按2.2項(xiàng)供試品方法制成陰性對照溶液。按照上述色譜條件,分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL注入色譜儀中,記錄色譜圖如下。結(jié)果表明:在與黃芩苷對照品色譜相應(yīng)的位置上無色譜峰出現(xiàn),方中其他組分對測定結(jié)果無影響。

    2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.2項(xiàng)的對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次,每次進(jìn)樣10μL,測得精密度RSD% =1.92%,表明儀器精密度良好。

    2.6 重復(fù)性考察 取同一批號樣品6份,按供試品溶液制備方法制備的樣品溶液,各進(jìn)樣10μL記錄峰面積,結(jié)果RSD%為1.56%,說明本方法重復(fù)性好。

    2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一份供試品溶液10μL分別于0, 1, 4, 7, 10 ,12 h注入液相色譜儀,記錄色譜圖,測定其峰面積積分值,結(jié)果其RSD為1.67%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)測定穩(wěn)定性良好。

    2.8 回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收法,精密稱定已知含量的本品2.5g,共6份,精密加入對照品溶液5mL(0.7732mg/mL),依“供試品溶液的制備”法制成供試品溶液,測定,計(jì)算回收率,結(jié)果見表1。

    表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

    2.9 樣品測定 取本品三批樣品(20121025、20121122、20121205),按2.2供試品方法制備溶液,按含量測定方法測定,用外標(biāo)法計(jì)算供試品黃芩苷的含量,結(jié)果分別為1.408mg/g、1.436mg/g、1.422mg/g。

    3 討論

    3.1 取樣品在200~350 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,在278 nm處有最大吸收,故選擇278 nm為檢測波長。

    3.2 本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對溫通止痛貼中黃芩苷含量進(jìn)行測定,結(jié)果表明該方法簡單、有效,具有良好的準(zhǔn)確性與重現(xiàn)性且測定中無陰性干擾。通過對HPLC方法學(xué)的摸索為下一步固本顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步完善提供了精確、合理的科學(xué)依據(jù)。

    [1]蔡雄,周華,劉良,等.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的中醫(yī)臨床治療研究概況[J]. 中華中醫(yī)藥雜志,2005,20(5):309-311.

    [2]許岳,周臨東,謝林.骨性關(guān)節(jié)炎中藥治療相關(guān)作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 中醫(yī)藥信息,2011,28(2):114-117.

    [3]陳浩,鄧運(yùn)明,王曉躍.溫通止痛貼臨床作用的研究[J]. 江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,24(3):51-53.

    [4]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典﹒一部[S]. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010,282-283.

    [5]于世林.高效液相色譜方法及應(yīng)用[M]. 北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2004.

    [6]江西省食品藥品監(jiān)督管理局.江西省中藥飲片炮制規(guī)范[S]. 上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,2008.

    [7]張瑗惠、臧恒昌. HPLC法測定紅杏止咳合劑中黃芩苷的含量[J]. 齊魯藥事,2012,31(10):579-580.

    [8]劉利敏,胡譯方. HPLC法同時(shí)測定葛根芩連片中黃芩苷和葛根素的含量[J]. 安徽醫(yī)藥,2012,16(11):1 598-1 599.

    [9]叢彩娟,李桂榮. HPLC法測定外用應(yīng)急軟膏中黃芩苷的含量[J]. 齊魯藥事,2010,29(8):470-471.

    [10]曹繼軍. HPLC法測定外用應(yīng)急軟膏中黃芩苷的含量[J]. 中草藥,2006,37(10) :1 511-1 512.

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