三味檀香口服液制備及質量研究

★ 文萬江 何平清 何純斌 楊明 張明明

(1.江西濟民可信藥業(yè)有限公司 江西 宜春 336000；2.江西中醫(yī)藥大學 江西 南昌 330004)

三味檀香口服液是在《內蒙古成藥標準》收載的“贊丹-3湯”基礎上改劑型而成[1]，處方由檀香、肉豆蔻和廣栆三味藥組成，功能主治為清熱、補心。用于清心熱、心悸、煩躁不安，適用于冠心病心絞痛，具有清熱、健心之功能，用于心悸，心熱，煩躁不安等癥[2]。廣棗具有行氣活血、養(yǎng)心安神之功效，是三味檀香散中的君藥，檀香具有行心溫中，開胃止痛，歸脾、胃、肺經，具有調和藥性增加療效的作用，是復方中的使藥，他們的組合形成了“君-使對藥”，符合中藥復方的組方原理[3]，三味檀香口服液制備工藝以蒙醫(yī)藥理論為指導，應用現代科學技術和方法進行劑型選擇和工藝設計。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(安捷倫1260，VWD紫外檢測器)。

1.2 試藥 三味檀香口服液(江西濟民可信藥業(yè)有限公司)；肉豆蔻；檀香；廣棗；原兒茶酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110809-200604)，甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 揮發(fā)油提取時間的考察 將肉豆蔻和檀香粗碎成粗粉，取按處方比例準備肉豆蔻和檀香粗粉3份，加入4倍的水，加熱蒸餾，收集揮發(fā)油，藥渣備用，結果見表1。結果表明，3h已經將藥材中大部分提出。

表1 不同時間對揮發(fā)油提取的影響 /mL

2.2 廣棗提取工藝優(yōu)化

2.2.1 正交試驗設計 以原兒茶酸為指標，重點考察乙醇濃度，乙醇用量和回流的時間3個因素，每個因素選擇3個水平，采用L9(34)正交實驗設計表，以原兒茶酸轉移率為評價指標，優(yōu)化處方提取工藝，正交設計因素水平表見表2。

表2 正交設計因素水平表

2.2.2 樣品制備 取廣棗粗粉130g，按L9(34)正交設計表要求試驗，測定提取液中原兒茶酸含量，計算原兒茶酸轉移率。正交實驗設計及結果見表3、表4。

表3 正交實驗設計及結果

表4 提取方差分析

F0.05(2,2)=19.000。

由結果可知，以原兒茶酸轉移率為考察指標，采用極差直觀分析顯示影響因素大小為A>B>C；方差分析結果表明，A因素具有顯著影響，根據K值，因素B應選水平2，考慮節(jié)能，因素C選水平1，最佳提取工藝為A2B2C1即提取乙醇濃度為70%，6倍量回流2次，每次2h。

2.2.3 提取工藝驗證實驗 取同批藥材廣棗(粉碎成粗粉)3份，每份130按優(yōu)選的提取工藝進行提取，測得結果見表5。結果表明該提取工藝穩(wěn)定可靠。

表5 驗證試驗結果

2.3 藥渣的煎煮條件的選擇 取廣棗、肉豆蔻、檀香三種藥渣加水煎煮，考察不同時間點出膏率為指標，結果見圖1。結果顯示8倍水煎煮2h，既節(jié)能又能將藥渣中的成分全部提取。

圖1 不同加水倍數對出膏率的影響

2.4 水提取液醇沉濃度的選擇 取煎煮液靜置6h，抽濾，濾液真空濃縮，濃縮液分為3份，用乙醇分別調整為50%，65%，75%進行醇沉24 h，按照工藝制備口服液，留樣1個月，對澄明度進行觀察，結果發(fā)現醇沉濃度為50%，有沉淀。醇沉濃度為65%，75%的口服液經放置仍澄清，從經濟的角度考慮，以65%乙醇濃度為佳。

2.5 吐溫的種類的選擇 為了保證口服液的澄清度符合要求，實驗通過對吐溫-20、吐溫-60、吐溫-80等非離子表面活性劑的篩選，確定吐溫-20與揮發(fā)油混溶加入口服液中的效果最佳，確定比列為揮發(fā)油與吐溫20以1∶6。

2.6 三味檀香口服液的制備 廣棗粗粉用70%乙醇回流提取兩次，濾過，藥渣備用，回收乙醇得藥液；檀香與肉豆蔻粗粉混合，用水蒸氣法回流提取揮發(fā)油，分出揮發(fā)油，密閉保存，藥渣備用；兩藥渣混合，水煮，濾過，合并濾液，靜置5～6h，取上清液，濃縮，放置室溫，醇沉，攪拌，靜置24h，濾過，濾液減壓回收乙醇，得水煮濃縮液；將廣棗醇提物藥液與水煮濃縮藥液合并，加蒸餾水至體積約為1 000mL，室溫用濾菌板抽濾，濾液加入山梨酸至濃度為0.2%，加入甜菊糖至濃度為0.3%，將所提揮發(fā)油與吐溫20以1∶6攪拌混勻，緩慢加入藥液中(70℃)，強烈攪拌，用蒸餾水定容至體積1 000mL，灌裝，滅菌，即得。

3 質量研究

3.1 原兒茶酸含量測定[4]

3.1.1 色譜條件 C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動相：甲醇-水(含2.5%醋酸)(10∶90)，流速為1mL/min；檢測波長為260nm；柱溫為30℃；進樣量10μL。理論板數按原兒茶酸峰計算應不低于2500，結果見圖2。

A.對照品；B.供試品溶液；1.原兒茶酸

3.1.2 對照品溶液的制備 對照品溶液的制備取原兒茶酸對照品適量，精密稱定，加流動相溶解，制成每1mL含0.05mg的溶液，即得。

3.1.3 供試品溶液制備 準確量取本品10mL，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣加流動相溶解并轉移至10mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

3.1.4 標準曲線的繪制 分別精密吸取原兒茶酸對照品貯備液適量(12.5mg加流動相稀釋到50mL)加流動相稀釋，分別制成0.025，0.05，0.075，0.100，0.125mg/mL的原兒茶酸溶液進樣10μL，測定原兒茶酸的峰面積。以峰面積為縱坐標(Y)，濃度為橫坐標(X)，建立回歸方程：Y=17525X+10.23(r=0.9998)。表明濃度在0.025～0.125mg/mL間與峰面積有良好的線性關系。

3.1.5 精密度試驗 取對照品溶液一份連續(xù)進樣6次，每次10μL，測定原兒茶酸峰面積，RSD為0.36%。

3.1.6 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液分別在0,2，4,6,8,10，12 h各進樣10μL，測定原兒茶酸的峰面積，RSD為0.33%，表明供試品溶液在10h內穩(wěn)定。

3.1.7 重復性試驗 取同1份樣品，按3.1.3項下供試品溶液的制備方法分別制備6份，測定原兒茶酸的含量，RSD=1.08%。

3.1.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的三味檀香口服液樣品(批號：130601，含量：0.052mg/mL)5 mL，6份，每份加入原兒茶酸對照品(按原兒茶酸計為0.0512mg/mL)5 mL，樣品及對照品的加入量見表7，按3.1.3項下供試品溶液的制備方法制備并測定。

表7 加樣回收率實驗結果(n=6)

4 討論

4.1 廣棗70%乙醇對廣棗總黃酮進行了完全的提取，以原兒茶酸作為指標，優(yōu)化了工藝，同時對肉豆蔻和檀香采用水蒸汽提取揮發(fā)油，確定了揮發(fā)油與吐溫-20的比例為1∶6，制備的三味檀香口服液澄明度符合要求，為口服液中存在大量的揮發(fā)油提供了思路。

4.2 建立了三味檀香口服液的原兒茶酸的含量測定方法，適合對三味檀香口服液的質量控制，在色譜條件篩選中，加入2.5%的醋酸作為流動相，原兒茶酸的色譜峰尖銳，對稱，無干擾。

[1]鄧麗嘉,顧維彰.蒙藥贊丹·古日班的方劑研究[J].內蒙古中醫(yī)藥,1989(01):3-5.

[2]梁楊靜,蘭薇,桑柏,等.三味檀香散的藥理研究進展[J].云南民族大學學報(自然科學版)，2010，19(2)：86-89.

[3]桑柏.“廣棗-檀香”君——使對藥的效應物質研究[D].西北大學,2010.

[4]張志斌,吳佩穎,祁慶,等.HPLC測定復方四季青片中原兒茶酸、原兒茶醛的含量[J].中成藥2004,26(9):33-35.