HPLC法測定神安顆粒中天麻素含量

★ 李堅 易延逵 蔡光先 楊永華

(1. 漣源市人民醫(yī)院藥劑科 湖南 漣源 417100；2.南方醫(yī)科大學(xué) 廣東 廣州 510515；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué) 湖南 長沙 410006)

安神顆粒是湖南中醫(yī)藥大學(xué)蔡光先教授的經(jīng)驗(yàn)方，由天麻、酸棗仁、丹參、首烏藤、百合花、五味子等6味藥組成，功能益氣養(yǎng)血、疏郁定驚、清心除煩、補(bǔ)腦安眠。用于各種慢性疾病引起的頭昏眼花、心神焦悴、失眠多夢、記憶力減退、疲倦無力等。

安神方原方應(yīng)用方法為：天麻、酸棗仁、丹參、首烏藤、百合花、五味子等各味粉碎成粗粉，開水泡服。很明顯，原方應(yīng)用不方便，服用量大，服用困難，口感苦澀。鑒于安神顆粒藥方療效確切、應(yīng)用廣泛及市面已有劑型的特點(diǎn)與現(xiàn)代人們用藥的要求，本文選擇安神處方為研究載體，對原工藝進(jìn)行改進(jìn)，采用超細(xì)粉體技術(shù)及現(xiàn)代提取工藝等現(xiàn)代制藥工藝，研制安神顆粒制劑，在保持傳統(tǒng)中醫(yī)藥特色的基礎(chǔ)上，大量采用現(xiàn)代天然產(chǎn)物制備技術(shù)，提高天然產(chǎn)物的生物利用度。

1 儀器與試藥

1.1 高效液相儀器：Aglient1100高效液相色譜儀；色譜柱：Kromasil C18柱(4.6 mm ×150.0 mm，5.0μm)；處理軟件：Aglient1100數(shù)據(jù)處理軟件。UV-2401可見紫外分光光度儀(日本島津)；電子天平(0.001g，德國sartrius BP110S)。

1.2 試藥 天麻素對照品(批號：110807-200205，由中國藥品生物制品檢定所提供)；神安顆粒(自制)；乙腈為色譜純，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

參照有關(guān)文獻(xiàn)報道[4-8]，選擇高效液相色譜法測定天麻素含量，并進(jìn)行了方法學(xué)研究。

2.1 色譜條件 流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液(0.5∶99.5)為流動相；檢測波長為220 nm。流速：1.0mL/min，理論板數(shù)按天麻素峰計算不低于5000。

2.2 檢測波長的選擇 根據(jù)天麻素的理化性質(zhì)，在紫外區(qū)域有最大吸收，故取天麻素對照品，采用甲醇配成約10μg/mL的溶液，在200～400nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果天麻素在220nm波長處有最大吸收，與文獻(xiàn)報道一致，可作為HPLC法測定天麻素含量的檢測波長。

2.3 供試品溶液制備方法的比較

2.3.1 取本品0.25g，精密稱定，加稀乙醇50mL，精密稱定重量，水浴回流3h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，取濾液10mL，濃縮至近干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，進(jìn)行HPLC檢測。

2.3.2 取本品0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理(功率：240W，頻率：45Hz)1h，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，進(jìn)行HPLC檢測。

近兩年，中國石化黑龍江石油把全面可持續(xù)發(fā)展，邁向高質(zhì)量發(fā)展作為第一要務(wù)，以打造“一流企業(yè)”為愿景，以建設(shè)“大一企業(yè)”為目標(biāo)，堅決落實(shí)集團(tuán)公司工作部署，圍繞“改革、管理、創(chuàng)新、發(fā)展”工作方針，堅持穩(wěn)中求進(jìn)工作總基調(diào)，統(tǒng)籌拓市場、促改革、抓運(yùn)行，持續(xù)推進(jìn)新業(yè)務(wù)轉(zhuǎn)型突破，主營業(yè)務(wù)扎實(shí)開展。1—8月，公司實(shí)現(xiàn)經(jīng)營總量72.5萬噸，同比增幅17%。零售總量同比增加9.2萬噸，同比增幅24.3%。非油品交易額1.28億元，同比增幅13%。零售總量增幅排名系統(tǒng)第一，市場份額達(dá)到17%，榮獲銷售企業(yè)月度紅旗四面。

試驗(yàn)結(jié)果表明，同批樣品采用甲醇超聲和回流處理，結(jié)果相差不大，天麻素峰與樣品中其它組分色譜峰可達(dá)基線分離，且與其它組分相鄰色譜峰分離度大于1.5，按天麻素峰計，理論塔板數(shù)在5000以上。故本品含量測定采用2.3.2方法進(jìn)行供試品溶液的制備。

2.4 對照品溶液的制備 精密稱取天麻素對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.25mg的溶液，即得。

2.5 專屬性考查 按處方配比稱取除天麻以外的其他藥材適量，按制備工藝制成缺天麻的陰性樣品，注入液相色譜儀，結(jié)果表明陰性無干擾。

2.6 方法學(xué)考查

2.6.1 線性范圍的考查 精密吸取天麻素對照品溶液(0.25mg /mL)2.5，5，10，15，20，25μL，注入高效液相色譜儀，測定，以峰面積對數(shù)值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)對數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程為：Y= 17198X-160.97，r=0.9993。

2.6.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10μL，分別進(jìn)樣6次，依法測定，RSD為1.0%，表明本方法精密度較好。

2.6.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、12、16 h進(jìn)行測定，RSD為1.8%, 表明供試品溶液在24 h內(nèi)峰面積值基本穩(wěn)定。

2.6.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品6份，同法制備供試品溶液，依法測定，RSD為2.53%，表明本方法重復(fù)性較好。

2.6.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已測定含量的樣品適量，共6份，精密稱定，分別加入天麻素對照品溶液10mL(0.029mg/mL)，即0.29mg/mL，按供試品溶液的制備方法處理，測定峰面積，計算加樣回收率，見表1。結(jié)果表明，本方法加樣回收率較好。

表6 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 樣品含量測定 取樣品三批,依法進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表2。

表2 三批樣品含量測定結(jié)果

2.8 原料中天麻素含量測定試驗(yàn) 取天麻三批，按《中國藥典》2010年版一部天麻項下含量測定方法檢驗(yàn)，其天麻素含量分別為0.7414%、0.7185%、0.7643%。用天麻素含量為0.7414%的原料投料試制樣品，結(jié)果含量為2.11mg/g。經(jīng)計算本品轉(zhuǎn)移率為94.87%?！吨袊幍洹芬?guī)定天麻藥材中天麻素含量不得少于0.20%，如采用該含量的原料投料，按90.0%的轉(zhuǎn)移率計算，本品中天麻素含量為0.54mg/g。根據(jù)上述結(jié)果，暫定本品含天麻以天麻素計，不低于0.50mg/g。

3 討論與小結(jié)

神安顆粒采用了三種工藝，即超微粉碎工藝，醇提工藝，水提工藝，而其原料藥材成分也基本可以分為三類，即以天麻素為指標(biāo)成分的天麻苷類成分；以五味子醇甲、丹參酮ⅡA為指標(biāo)性成分的脂溶性成分；以丹參素、斯皮諾素、酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B等為指標(biāo)性成分的水溶性成分。因而其質(zhì)量控制也應(yīng)建立三類成分的質(zhì)量控制指標(biāo)。

天麻在神安顆粒中為主要原料，也為天然產(chǎn)物的貴細(xì)原料，天麻素為其指標(biāo)成分，2010版中國藥典[4]天麻中天麻素采用的也是高效液相色譜(HPLC)法，為此我們對其進(jìn)行了研究，采用HPLC法建立其含量測定方法。2010版中國藥典天麻中天麻素的高效液相色譜含量測定方法中，和有關(guān)文獻(xiàn)采用的有關(guān)條件有些差異，我們經(jīng)過了反復(fù)實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用到神安顆粒中天麻素的含量測定中，進(jìn)行了改進(jìn)，并選擇了供試品溶液的處理方法，結(jié)果樣品分離效果好，從而建立了HPLC法測定天麻苷類成分的指標(biāo)性成分天麻素的含量測定方法。

[1]王浴生，鄧文龍，薛春生．中藥藥理與應(yīng)用[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社,1998:70.

[2]肖崇厚．中藥化學(xué)[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 1997，113.

[3]鄭虎占，董澤宏，佘靖．中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用[M]. 北京：學(xué)苑出版社,1997.

[4]國家藥典委員會．中國藥典﹒一部[S]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010，54.

[5]馬虹，毛午佳，劉冬．高效液相色譜法測定全天麻泡騰顆粒中天麻素含量[J]. 中國藥業(yè)，2012，21(10)：24-25.

[6]張冠東，郝旭亮，李青山．高效液相色譜法測定羅丹調(diào)脂膠囊中天麻素的含量[J]. 中國藥物與臨床，2012，12(4)：454-455.

[7]程龍瓊，劉莉，周曉英．HPLC法測定強(qiáng)力天麻杜仲膠囊中天麻素的含量[J]. 中國藥房，2008，19(18)：1 410-1 411.

[8]吳春敏，陳海濱．天麻中天麻素含量測定方法的研究[J]. 中國中藥雜志，2006，29(12)：1 157-1 159.