HPLC法測定紅源達膠囊的含量

姜作玲，田紅偉，程宏霞，王邵林，趙俊梅

（青島國風藥業(yè)股份有限公司，山東青島266510）

HPLC法測定紅源達膠囊的含量

姜作玲，田紅偉，程宏霞，王邵林，趙俊梅

（青島國風藥業(yè)股份有限公司，山東青島266510）

目的建立高效液相色譜法測定紅源達膠囊含量的方法。方法采用高效液相色譜法對紅源達膠囊進行定量測定，流動相為0.15%四丁基氫氧化銨溶液（用甲酸調(diào)pH值至3.6）－甲醇（87∶13）；檢測波長為256 nm。結(jié)果本方法線性關(guān)系良好（R2為0.999 9），平均回收率為99.62%（RSD＝1.36%）。結(jié)論本方法操作簡便準確，重復性好，可用于紅源達的含量測定。

紅源達膠囊；高效液相色譜法；含量

紅源達膠囊是一種優(yōu)良的抗貧血制劑，為淀粉水解而成的單糖、低聚糖與鐵的復合物。此類復合物為完整的分子存在，可被人體迅速吸收，用于治療單純性缺鐵性貧血，效果顯著，安全有效，不良反應輕微，已在國內(nèi)外臨床使用多年，孕婦與哺乳期婦女、兒童均可服用［1～3］。

多糖鐵復合物中鐵的定量經(jīng)典方法為滴定分析法（碘量法）［4，5］，但滴定分析法需要將制劑制備成高濃度的溶液，對于低濃度的溶液則不能進行滴定。針對該產(chǎn)品沒有紫外吸收，無法直接采用HPLC法進行測定，本文參考了乙二胺四乙酸二鈉HPLC測定方法［6～9］，將多糖鐵復合物處理后與乙二胺四乙酸二鈉形成穩(wěn)定的絡合物，于256 nm處利用HPLC法測定其含量，簡便，靈敏，結(jié)果準確。

1 儀器與試藥

Angilent1260液相色譜儀，Shimadzu UV－2550紫外－可見分光光度計，Mettler Toledo XS205電子天平。紅源達膠囊為國風藥業(yè)股份有限公司提供。甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 色譜條件

色譜柱：迪馬Diamonsil C18柱（4.6 mm×200 mm，5μm）；流動相：0.15%四丁基氫氧化銨溶液（用甲酸調(diào)pH值至3.6）－甲醇（87∶13）；檢測波長：256 nm；柱溫：30℃。理論板數(shù)按乙二胺四乙酸鐵鈉峰計算應不低于3 000。

3 溶液制備

3.1 對照品溶液 精密稱取乙二胺四乙酸鐵鈉對照品（相當于15 mg鐵），置100 mL量瓶中，加水溶解并至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取該對照品貯備液1.0 mL，置10 mL量瓶，加水至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

3.2 供試品溶液 取本品20粒內(nèi)容物，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于1粒裝量），置100 mL量瓶中，加水，超聲使溶解，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置10mL量瓶中，加水至刻度，搖勻；精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加入稀硫酸0.1 mL，置水浴中加熱至顏色變淺，取出，放至室溫，加入0.4%乙二胺四乙酸二鈉溶液0.5 mL，搖勻，放置10 min，加水至刻度，搖勻。微孔濾膜（0.45μm）過濾后取續(xù)濾液，即得。

4 方法學考察

4.1 專屬性實驗 按“3.1”、“3.2”項下方法制備供試品溶液、對照品溶液，并按供試品溶液的制備方法制備不含多糖鐵復合物的空白對照溶液。取上述3種溶液按“2”項下色譜條件進行測定。結(jié)果見圖1。結(jié)果表明，空白對照溶液沒有影響，供試品溶液分離良好。

圖1 供試品溶液HPLC圖譜

4.2 線性關(guān)系考察 精密稱取乙二胺四乙酸鐵鈉對照品（相當于10 mg鐵），置100 mL量瓶中，加水溶解并至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。分別精密量取該對照品貯備液0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.0 mL，置10 mL量瓶，分別加水至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取上述各溶液，按“2”項下色譜條件，分別測定峰面積。以對照品濃度（μg·mL－1）為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，并對測得的數(shù)據(jù)進行回歸分析，回歸方程為Y＝227.05X＋324.26，相關(guān)系數(shù)R2＝0.999 9，結(jié)果表明，濃度在5.938 8～19.796 0μg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，結(jié)果見表1。

4.3 精密度實驗 取對照品溶液，按“2”項下色譜條件，連續(xù)進樣6次，記錄色譜峰面積。結(jié)果6次峰面積測定值的平均值為1 259.6，RSD為0.51%。

4.4 重復性實驗 精密稱取同一樣品，按“3.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，并按“2”項下色譜條件進行測定。RSD值為0.89%，表明本法重復性較好。

4.5 穩(wěn)定性實驗 取同一份供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8 h時，按“2”項下色譜條件，分別測定峰面積。結(jié)果峰面積測的平均值為1 348.7，RSD為0.62%。表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表1 線性關(guān)系考察試驗數(shù)據(jù)

4.6 加樣回收實驗 采用加樣回收法，精密稱取已知含量的紅源達膠囊樣品9份（含鐵41.38%），各加入乙二胺四乙酸鐵鈉對照品，按“3.2”項下方法平行制備9份供試品溶液，并按“2”項下色譜條件進行測定，計算回收率。平均回收率為99.62%，RSD為1.36%，小于2%，表明其方法穩(wěn)定，準確性好，結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗

5 樣品測定

取紅源達膠囊樣品，按“3.2”項下方法制備供試品溶液，并按“2”項下色譜條件進行測定，按外標法以峰面積計算含量，結(jié)果見表3。

表3 紅源達膠囊樣品含量測定結(jié)果

6 討論

6.1 因紅源達膠囊是單糖、低聚糖與鐵的復合物，沒有紫外吸收，不能直接利用HPLC法測定。通過酸處理，將紅源達膠囊中的有機鐵轉(zhuǎn)化為三價鐵，三價鐵與乙二胺四乙酸二鈉可以定量反應形成穩(wěn)定的絡合物，該絡合物在256 nm波長處具有紫外吸收。本方法通過HPLC測定乙二胺四乙酸鐵鈉的含量從而實現(xiàn)了對鐵的定量，用于紅源達膠囊含量測定。

6.2 檢測波長的選擇。據(jù)文獻報導［6，7］，乙二胺四乙酸鐵鈉在254 nm處有最大吸收。本實驗于200～400 nm波長范圍內(nèi)進行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)在256 nm處有最大吸收，因此選測256 nm為本方法的檢測波長，且在此波長下，乙二胺四乙酸鐵鈉的分離效果良好。

6.3 本法與原質(zhì)量標準方法的測定結(jié)果一致。但碘量法需要樣品濃度較高，考慮到溶出度等質(zhì)量檢查項目，供試品溶液濃度較低，HPLC法完全能夠滿足需求。本法為建立溶出度檢查等質(zhì)量標準提高工作做好了準備。

本實驗的方法學研究結(jié)果表明，本法結(jié)果準確、重復性好，能夠有效測定紅源達膠囊的含量。

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Determ ination of Hongyuanda Capsules by HPLC

JIANG Zuo-ling，TIAN Hong-wei，CHENG Hong-xia，WANG Shao-lin，ZHAO Jun-mei
（Qingdao Growful Pharmaceutical Co.，Ltd.，Qingdao 266510，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of Hongyuanda Capsules.MethodsThe mobile phase consisted of 0.15%tetrabutyl ammonium hydroxide solution（with formic acid pH value to 3.6）－methanol（87∶13），the determination wavelength was256 nm.ResultsThe linearity was good（R2＝0.999 9），the average recoverieswas 99.62%（RSD＝1.36%）.ConclusionThe method was simple，accurate with good reproducibility and can be used for the determination of Hongyuanda Capsules.

Hongyuanda Capsules；HPLC；Determination

R927.2

A

2095－5375（2014）09－0516－003

姜作玲，女，高級工程師，研究方向：藥物研發(fā)，E－mail：jzlqd＠126.com

田紅偉，女，高級工程師，研究方向：藥物分析，Tel：0532－86058846，E－mail：red1215＠sohu.com