316例RhD陰性獻(xiàn)血者Del血清學(xué)檢測(cè)分析

林杰 陳榮倉(1.溫州市中心血站，浙江 溫州 325001)

Rh血型系統(tǒng)是除ABO血型系統(tǒng)外最復(fù)雜、最重要的血型系統(tǒng)，其Rh抗原與自身免疫性溶血病有關(guān)，同時(shí)它的不相容還能夠引起溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血病(HDN)［1］。Del表型發(fā)現(xiàn)于20世紀(jì)80年代，是1種變異的極弱RhD陽性血型。Del表型紅細(xì)胞會(huì)引起Rh陰性受血者產(chǎn)生抗-D，繼而引起嚴(yán)重的后果。為提高臨床安全輸血，減少輸血反應(yīng)，正確檢定RhD陰性，我們隨機(jī)抽取316名已確認(rèn)為RhD陰性獻(xiàn)血者采用血清學(xué)方法檢測(cè)Del，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 采取整體抽樣的原則，隨機(jī)收集溫州地區(qū)2004年1月～2009年5月的165041名無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本，重復(fù)獻(xiàn)血者只收集1次，4℃保存。隨機(jī)選擇其中316名確認(rèn)為RhD陰性獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本(已排除弱D型)。

1.2 儀器和試劑 細(xì)胞洗滌離心機(jī)(KA-2200，日本KUBOTA公司生產(chǎn))，開口浴槽循環(huán)器(MB-19，優(yōu)萊博北京公司生產(chǎn))。IgG 抗-D血清、IgM 抗-D、C、c、E、e血清和多抗球蛋白試劑均為上海血液生物醫(yī)藥公司產(chǎn)品;2個(gè)不同廠家的IgG+IgM的抗-D血清分別為法國(guó)Diagast公司和德國(guó)Biotest公司產(chǎn)品;聚乙二醇(PEG)試劑為長(zhǎng)春博得生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品;乙醚為常熟市楊園化工有限公司生產(chǎn);5%“0”型RhD陽性(陰性)紅細(xì)胞懸液(本室自配)。

1.3 Del檢測(cè) 用乙醚放散法檢測(cè)Del，吸收放散方法參見文獻(xiàn)［2］:1)將RhD陰性的壓積紅細(xì)胞與IgG抗-D血清等量混合，37℃水浴1～2h(期間搖勻1～2次)，并用生理鹽水充分洗滌，徹底去除未與細(xì)胞結(jié)合的抗-D血清。2)制備成的壓積紅細(xì)胞加入生理鹽水和乙醚(體積比為1∶1∶2)，顛倒混勻，離心，取紅色放散液。3)放散液、標(biāo)準(zhǔn)5%“O”型RhD陽性紅細(xì)胞和PEG按2∶1∶4的比例混合，做IAT試驗(yàn)，同時(shí)用5%“O”型RhD陰性紅細(xì)胞做陰性對(duì)照，顯微鏡下觀察結(jié)果，有凝集者判為Del型。

1.4 Rh因子篩選［2］采用單克隆的 IgM 抗-c、c、E和 e血清試管法進(jìn)行篩選，凝集者為陽性，不凝集者為陰性。按試劑說明書操作，用單克隆的IgM 類抗-C、c、E和e血清，鹽水試管法檢測(cè)Rh抗原。

2 結(jié)果

2.1 RhD陰性獻(xiàn)血者中檢測(cè)出Del表型情況 從316名確認(rèn)RhD陰性獻(xiàn)血者中檢測(cè)出71例Del型，占RhD陰性獻(xiàn)血者的 22.47%，其表現(xiàn)型主要以 Ccee(81.69%)和 CCee(14.08%)為主，其余為 CcEe(1.41%)、ccEe(1.41%)和ccee(1.41%)(表1)。

2.2 溫州和其他地區(qū)Del型分布的比較［3～6］重慶地區(qū)Del型檢出的百分率最高，其次為長(zhǎng)春、海南、香港、溫州、云南、日本。通過χ2檢驗(yàn)，將其他各地區(qū)與溫州進(jìn)行比較，可見長(zhǎng)春、重慶、日本3地P＜0.05，與溫州地區(qū)Del型比較的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

表1 RhD陰性獻(xiàn)血者中檢測(cè)出Del表型情況

表2 溫州和其他地區(qū)Del分布的比較

3 討論

Rh血型系統(tǒng)中最重要的抗原有5種，分別是:C、c、D、E、e抗原。其中以D抗原的免疫原性最為強(qiáng)烈。D放散型(Del)是自1984年被日本學(xué)者Okubo等［7］在RhD陰性獻(xiàn)血者中發(fā)現(xiàn)以來逐漸受到人們重視的弱D抗原。這種非常弱的RhD抗原無法用敏感的間接抗球蛋白試驗(yàn)檢出，而只能通過吸收放散試驗(yàn)才可檢測(cè)出來。通常對(duì)經(jīng)鹽水法和IAT確認(rèn)為RhD陰性者，都未再進(jìn)一步檢測(cè)。雖然Del是弱D抗原，并只能用吸收放散方法才能檢測(cè)出來，但與其他D抗原一樣具有免疫原性，如果將這些弱D抗原的血液輸給RhD陰性患者，便會(huì)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，再次輸血將會(huì)導(dǎo)致輸血反應(yīng)或可能引起新生兒溶血病。

我們從316名確認(rèn)RhD陰性獻(xiàn)血者中檢測(cè)出71例Del型，占 RhD陰性獻(xiàn)血者的 22.47%，檢出比率與長(zhǎng)春(43.02%)、重慶(62.67%)、日本(10.23%)比較有明顯的不同(表2)，說明存在一定的地區(qū)差異。有作者用PCR-RRP方法分析76名常規(guī)血清學(xué)RhD陰性的漢族獻(xiàn)血者RHD基因，結(jié)果表明基因存在多態(tài)性，提示中國(guó)漢族RhD陰性特征有多種遺傳機(jī)制，特別是RhCC和RhCc的個(gè)體中廣泛存在RHD基因［8］，與本文的結(jié)果相符。檢測(cè)的316名獻(xiàn)血者中，含C基因的有117名(表1)，吸收放散試驗(yàn)陽性的69名，占58.97%。

對(duì)Del的研究最重要的目的就是指導(dǎo)臨床輸血，它直接關(guān)系到人的生命安全，溫州地區(qū)Del檢出率不低，讓我們不得不對(duì)Rh陰性血液的輸注引起重視。在臨床輸血試驗(yàn)中，經(jīng)鹽水法和IAT確認(rèn)為RhD陰性者很有必要進(jìn)行Del檢測(cè)，只要檢出Del，一定要作為RhD陽性血液，這樣才能保證RhD陰性受血者的輸血安全。

［1］邵超鵬.RHD研究進(jìn)展和中國(guó)人RHD研究現(xiàn)狀分析.中國(guó)輸血雜志，2003，16(5):354.

［2］劉達(dá)莊.免疫血液學(xué).上海:上海科學(xué)技術(shù)出社，2002:194-231.

［3］葉健中，林向萍，蔡于旭，等.海南地區(qū)RhD陰性個(gè)體RhD基因研究.中國(guó)輸血雜志，2005，18(2):97-100.

［4］蔡玲君，丁 權(quán)，陳文仙，等.云南地區(qū)RhD陰性個(gè)體RhD基因研究.中國(guó)輸血雜志，2006，19(6):452-453.

［5］于曉麗，劉玉潔，門小菲，等.長(zhǎng)春地區(qū)獻(xiàn)血者RH Del血清學(xué)檢測(cè).中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2008，12(10):1310-1311.

［6］肖瑞抑，林武存，曾杰，等.獻(xiàn)血者Rh(D)陰性DEL表型調(diào)查研究.重慶醫(yī)學(xué)，2007，36(24):2473-2474.

［7］Okubo Y，Yamaguchi H，Tomita T，et al.A D variant，Del.Transfusion，1984，24(6):542-546.

［8］鄒望遠(yuǎn)，郭曲練.Rh血型與輸血的研究進(jìn)展.國(guó)外醫(yī)學(xué)輸血及血液學(xué)分冊(cè)，2004，27(5):443.