烏魯木齊無(wú)償獻(xiàn)血者HBsAg、抗-HCV、抗-HIV檢測(cè)結(jié)果分析*

周麗君 郭偉鵬 王麗鴻 李旭(烏魯木齊市血液中心，新疆 烏魯木齊 830000)

輸血除能治療疾病外，也可能引起患者一些不良反應(yīng)和并發(fā)癥，最重要的是血液或者血液制品中易攜帶并傳播多種病原體，使人類(lèi)在接受輸血時(shí)也遭受著感染其他病毒性疾病的危險(xiǎn)，HBV、HCV、HIV是輸血傳播疾病中感染率最高、危害最為嚴(yán)重的3種病毒［1］，嚴(yán)重威脅我國(guó)輸血安全，因此輸血相關(guān)傳播病原體的預(yù)防和控制特別是預(yù)防經(jīng)輸血傳播病毒已經(jīng)成為全世界關(guān)注的焦點(diǎn)，目前檢驗(yàn)方法是ELISA和NAT，ELISA是衛(wèi)生部規(guī)定的雙篩檢測(cè)方法，NAT不是衛(wèi)生部規(guī)定的檢測(cè)項(xiàng)目，本中心前期申請(qǐng)了基金項(xiàng)目，使用NAT進(jìn)行檢測(cè)，取得了相應(yīng)的成果［2］。新疆位于祖國(guó)西北，經(jīng)濟(jì)相對(duì)落后，民族眾多，各族人民大雜居、小聚居，人員素質(zhì)參差不齊，對(duì)傳染性疾病的預(yù)防和控制相關(guān)知識(shí)匱乏，烏魯木齊是乙型肝炎、艾滋病高發(fā)地區(qū)，而且艾滋病感染者向一般人群傳染呈上升趨勢(shì)［3］，存在較高的輸血風(fēng)險(xiǎn)。血液中心對(duì)獻(xiàn)血者血樣進(jìn)行HBV、HCV和HIV的高靈敏度、高特異性檢測(cè)是防止醫(yī)源性感染的重要途徑，將檢測(cè)ELISA和NAT結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 2011年3月～2011年10月本中心無(wú)償獻(xiàn)血者14 696例;其中男性8 692例，女性6 004例，年齡范圍18～55歲，平均27.7歲，為保護(hù)獻(xiàn)血者隱私所有標(biāo)本均采用13位數(shù)條碼。

1.2 試劑和儀器 質(zhì)控品來(lái)自衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心。ELISA用2種不同試劑廠(chǎng)家檢測(cè)2遍。HBsAg(上?？迫A;北京金豪);抗-HCV(北京萬(wàn)泰;北京金豪);抗-HIV(北京萬(wàn)泰;生物梅里埃);HBV-HCV-HIV熒光PCR(上?？迫A)。加樣槍、生物安全柜、離心機(jī)、STAR全自動(dòng)加樣儀、FAME全自動(dòng)酶免分析儀、核酸提取儀器、熒光PCR、儀冷藏柜。

1.2 血清學(xué)檢測(cè) 獻(xiàn)血者血液標(biāo)本按照衛(wèi)生部要求HB-sAg、抗-HCV、抗-HIV用ELISA方法檢測(cè)檢測(cè)2遍，前處理用全自動(dòng)加樣儀(STAR)進(jìn)行加標(biāo)本、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控品，使用1次性加樣尖，避免污染;后處理用全自動(dòng)酶免分析儀(FAME)檢測(cè)，所有試劑和標(biāo)本均掃描條碼。結(jié)果均陽(yáng)性、或1種試劑檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性用該種試劑雙孔復(fù)測(cè)試管和血辮，仍至少1孔陽(yáng)性、HBsAg、抗HCV設(shè)立80%的灰區(qū)，抗HIV設(shè)立70%的灰區(qū)，均按照陽(yáng)性處理。

1.3 NAT檢測(cè) 病毒核酸提取采用磁珠分離、純化技術(shù)，磁珠法提取核酸具有操作簡(jiǎn)便、所需時(shí)間短、易于自動(dòng)化、對(duì)核酸標(biāo)本的回收率高和純度好等優(yōu)勢(shì);擴(kuò)增檢測(cè)采用熒光TaqMan PCR探針技術(shù)，HBV-HCV-HIV單人份檢測(cè)。

1.4 病毒核酸提取 病毒核酸提取采用磁珠法。在加有去抑制劑磁珠溶液混合物的核酸提取模板1各孔中依此從A1至H1，A2至H2以此類(lèi)推，加入100 μL待測(cè)標(biāo)本，再加入130 μL已加入內(nèi)標(biāo)的裂解液，將板1～5按照程序提示放入KHB DP-1000磁珠分離儀，進(jìn)行分離、清洗和洗脫。裂解:破碎病毒蛋白外殼釋放核酸;分離純化:將模板從裂解液中分離提純，去除雜質(zhì)。加入裂解液釋放標(biāo)本中的核酸后，核酸會(huì)和包裹有二氧化硅的磁珠微粒相結(jié)合，通過(guò)特制的磁棒吸附、試劑溶液置換和釋放磁珠，從而實(shí)現(xiàn)核酸的純化，避免了人工操作液體處理的過(guò)程，提高了自動(dòng)化程度和準(zhǔn)確程度。

1.5 擴(kuò)增檢測(cè) 核酸擴(kuò)增利用體外合成的方法，把待檢基因大批量復(fù)制后檢測(cè)，取試劑盒中HBV、HCV、HIV項(xiàng)目的PCR 反應(yīng)液A、PCR 反應(yīng)液B、PCR 反應(yīng)液C，按A∶B∶C=8∶6∶1，用移液器分裝至PCR反應(yīng)板各孔中，每孔15 μL，再加入15 μL已處理好的模板標(biāo)本，貼上蓋膜后轉(zhuǎn)移到擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)，使用A7500熒光PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，指導(dǎo)特定的DNA序列合成，并使該區(qū)段迅速得到大量擴(kuò)增，利用溫度的升降來(lái)控制DNA的變性和復(fù)性;變性(92～94℃)，高溫使DNA變性，即雙鏈DNA解鏈為單鏈;退火(40～60℃)溫度降低，使引物和DNA片段結(jié)合復(fù)性;延伸(72℃)，以引物片段為啟動(dòng)片段，在DNA聚合酶和dNTPs存在下、完成基因片段的延伸，一般進(jìn)行25～40個(gè)循環(huán)，每一循環(huán)可以使靶序列增加1倍。

1.6 結(jié)果判斷 每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的域值線(xiàn)時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)被稱(chēng)為Ct值(threshold value)。檢測(cè)標(biāo)本CT值＜40.0者判為陽(yáng)性;CT值≥55.0的標(biāo)本判為陰性;CT值在40～50的標(biāo)本為灰區(qū)標(biāo)本，重新測(cè)量，并以重測(cè)結(jié)果為準(zhǔn)。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)資料檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果(表1～2)

表1 不同性別、年齡、民族與學(xué)歷HBV、HCV、HIV陽(yáng)性率比較

表2 不同獻(xiàn)血次數(shù)HBV、HCV、HIV陽(yáng)性率比較

3 討論

ELISA與NAT檢測(cè)HBV、HCV、HIV陽(yáng)性標(biāo)本共154例，陽(yáng)性率1.05%，陽(yáng)性率顯著高于北京、昆明、杭州等地［4，5］，ELISA檢測(cè)陽(yáng)性共152例:HBsAg陽(yáng)性率為0.52%，抗-HCV陽(yáng)性率為0.37%，抗-HIV陽(yáng)性率為0.16%。NAT檢測(cè)陽(yáng)性共71例:HBV DNA陽(yáng)性率0.22%，HCV RNA陽(yáng)性率為0.18%，HIV RNA陽(yáng)性率為0.10%;檢測(cè)結(jié)果與ELISA不完全一致，因?yàn)檫@2種方法檢測(cè)原理不同;雖然本地區(qū)HBV在采血前用“金標(biāo)法”已經(jīng)篩查，但是ELISA陽(yáng)性比例還是很高;同時(shí)有2例HBsAg檢測(cè)陰性，HBV DNA檢測(cè)陽(yáng)性經(jīng)過(guò)追蹤分析［9］，是“窗口期”和隱匿性乙型肝炎的感染，說(shuō)明烏魯木齊地區(qū)乙型肝炎的預(yù)防和控制是重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。不同性別、年齡、民族、學(xué)歷、獻(xiàn)血次數(shù)的陽(yáng)性率進(jìn)行比較，說(shuō)明不同性別、年齡獻(xiàn)血者陽(yáng)性率比較(P＞0.05);不同民族獻(xiàn)血者陽(yáng)性率比較(P＜0.01)，由于部分少數(shù)民族對(duì)傳染病知識(shí)了解匱乏，同時(shí)，也可能與資料的標(biāo)本數(shù)有關(guān)，少數(shù)民族標(biāo)本量較小，不能夠很真實(shí)地反映總體情況。此外，烏魯木齊居住著漢、維吾爾族、回、哈薩克、蒙古等13個(gè)民族，少數(shù)民族人口占26.87%［10］，維吾爾民族中Rh陰性所占比例較高，而烏魯木齊地區(qū)臨床醫(yī)療機(jī)構(gòu)70%的維吾爾族患者來(lái)自于南疆、北疆地區(qū)，造成RH陰性血的供不應(yīng)求，此外，本研究獻(xiàn)血者中少數(shù)民族所占比例為13.19%，其中維吾爾族為5.19%，回族6.95，哈薩克族0.69，主要原因可能是少數(shù)民族對(duì)于獻(xiàn)血知識(shí)了解少，語(yǔ)言交流少數(shù)困難等，少數(shù)民族特別是維吾爾族無(wú)償獻(xiàn)血工作應(yīng)該著力加強(qiáng)。不同學(xué)歷的陽(yáng)性率顯示結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，中專(zhuān)、大專(zhuān)獻(xiàn)血者所占比例較大，是主力軍，與西安地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者結(jié)果一致［11］。學(xué)歷高的陽(yáng)性率較低，文化程度越高者，綜合素質(zhì)也越高，掌握醫(yī)學(xué)相關(guān)知識(shí)相對(duì)就越多，對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血理解能力越強(qiáng)。獻(xiàn)血次數(shù)的陽(yáng)性率有差異，獻(xiàn)血次數(shù)越多，陽(yáng)性率越低，這和很多地區(qū)的研究結(jié)果均一致，重復(fù)獻(xiàn)血者陽(yáng)性率顯著低于首次獻(xiàn)血者，獻(xiàn)血次數(shù)≥2次的無(wú)償獻(xiàn)血者，其血液檢測(cè)不合格率明顯低于初次獻(xiàn)血者，本研究獻(xiàn)血次數(shù)4次以及以上者，陽(yáng)性率為0。因此，采供血機(jī)構(gòu)要大力加強(qiáng)無(wú)償獻(xiàn)血的宣傳力度，最大限度地把初次獻(xiàn)血者發(fā)展成為重復(fù)、固定的無(wú)償獻(xiàn)血者，這就要求采供血工作人員的以?xún)?yōu)質(zhì)服務(wù)和感恩的心來(lái)贏(yíng)得獻(xiàn)血者的信任，并且貫徹到獻(xiàn)血前咨詢(xún)、采前、采中、采后的護(hù)理、回訪(fǎng)，加深與獻(xiàn)血者的溝通。因此，招募一支低危的、固定的無(wú)償獻(xiàn)血者隊(duì)伍會(huì)提高輸血安全，降低輸血疾病殘余風(fēng)險(xiǎn)。

［1］ 高峰.臨床輸血與檢驗(yàn).2版，北京:人民衛(wèi)生出版社，2007:220-240.

［2］ 周麗君，李旭，姚華.烏魯木齊地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者HBV核酸檢測(cè)結(jié)果分析.中國(guó)輸血雜志，2013，26(3):149-151.

［3］ 譚曉華，郭淑霞，張景玉，等.新疆某市暗娼人群艾滋病相關(guān)知識(shí)和行為調(diào)查.中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2011，45(4):369-370.

［4］ 張磊，戴蘇娜，張榮華，等.北京地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血前后血液檢測(cè)結(jié)果分析.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2009，19，(12):1524-1526.

［5］ 任芙蓉，王憬惺，趙海燕，等.我國(guó)5城市合格獻(xiàn)血者血液HIV及HCV殘余風(fēng)險(xiǎn)研究.中國(guó)輸血雜志，2007，20(6):469-475.

［6］ 周麗君，姚華，郭偉鵬.烏魯木齊無(wú)償獻(xiàn)血者HBsAg陰性HBV DNA陽(yáng)性的追蹤分析.中國(guó)衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2012，9(2):91-92.

［7］ 烏魯木齊年鑒，新疆人民出版社.2004，

［8］ 吳霞，陳綱.西安市無(wú)償獻(xiàn)血人群分布特點(diǎn)及結(jié)構(gòu)分析.中國(guó)醫(yī)師雜志，2003，5(8):1144-1145.