荔枝草全草乙醇提取物的化學(xué)成分分析

劉慧清，王國(guó)凱，林彬彬，黃 珺，秦民堅(jiān)

(中國(guó)藥科大學(xué)中藥學(xué)院中藥資源學(xué)教研室教育部現(xiàn)代中藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京211198)

荔枝草(Salvia plebeia R.Br.)為唇形科(Lamiaceae)鼠尾草屬(Salvia Linn.)植物，別名為蛤蟆草、雪見(jiàn)草和癩蛤蟆草等，其味苦、辛，性涼，具有清熱解毒、利尿消腫和涼血止血的作用。作為中藥始載于《本草綱目》，曾收載于《中華人民共和國(guó)藥典》(1977年版)。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明［1－8］:荔枝草具有保肝、止咳、平喘、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、止血、抗炎和抗氧化等多種作用。目前從荔枝草全草中已分離得到黃酮類、木脂素［9－10］、二萜類［11］、三萜類［12］以及甾醇和揮發(fā)油類［13］等多類化學(xué)成分。荔枝草分布區(qū)域極為廣泛，除青海、新疆和西藏外，中國(guó)各省區(qū)均有分布。

為了充分利用這一豐富的藥用植物資源，并尋找與其藥效及生物活性相吻合的有效成分，作者對(duì)荔枝草全草乙醇提取物中所包含的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究。

1 材料和方法

1.1 材料

供試的荔枝草全草購(gòu)自安徽省亳州藥材市場(chǎng)，經(jīng)中國(guó)藥科大學(xué)中藥學(xué)院秦民堅(jiān)教授鑒定為唇形科鼠尾草屬荔枝草的干燥全草，憑證標(biāo)本號(hào)SP20110729，保存于中國(guó)藥科大學(xué)中藥資源學(xué)教研室。

主要儀器:Bruker ACF－300和500核磁共振儀(德國(guó)Bruker公司)、X－4型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(上海精密科學(xué)儀器有限公司);Sephadex LH－20(50 μm)和RP C18色譜柱均為美國(guó)Pharmacia公司生產(chǎn)，MCI gel(CHP 20P，75 ～150 μm)為日本三菱公司生產(chǎn)，薄層和柱層析硅膠(100～200目和200～300目)為青島海洋化工廠生產(chǎn)，實(shí)驗(yàn)所用其他試劑均為分析純(江蘇漢邦科技有限公司生產(chǎn))。

1.2 方法

取荔枝草全草10 kg，用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇以固液比(W/V)1∶10進(jìn)行滲漉提取，回收乙醇，使用回收的乙醇加熱回流提取2次，合并提取液，減壓回收乙醇后得到浸膏530 g。將浸膏上100目硅膠柱，用三氯甲烷和甲醇混合液〔V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=100∶0 ～0∶100〕進(jìn)行梯度洗脫，得到不同極性的洗脫流分F1～F14。然后反復(fù)用硅膠柱色譜法、Sephadex LH－20柱色譜法、MCI gel柱色譜法、RP C18柱色譜法及重結(jié)晶法等方法得到單體化合物。

從F5流分得到化合物Ⅰ(20 mg)、化合物Ⅱ(15 mg)和化合物Ⅵ(90 mg);從F6流分得到化合物Ⅷ(4.9 mg)和化合物Ⅻ(8.3 mg);從F8流分得到化合物Ⅲ(約142 mg)、化合物Ⅳ(40 mg)和化合物Ⅺ(約68 mg);從F9流分得到化合物Ⅴ(5.5 mg)、化合物Ⅶ(13 mg)和化合物ⅩⅢ(3 mg);從F12流分得到化合物Ⅸ(3.4 g);從F13流分得到化合物Ⅹ(900 mg)。

采用理化方法、薄層層析法以及NMR等波譜分析方法鑒定化合物Ⅰ～ⅩⅢ的結(jié)構(gòu)。

2 結(jié) 果

化合物Ⅰ:無(wú)色針狀結(jié)晶(石油醚－乙酸乙酯)，mp:142℃ ～144℃。與β－谷甾醇對(duì)照品共同薄層層析并用多種溶劑系統(tǒng)展開(kāi)，Rf值一致且顯色斑點(diǎn)相同，混合熔點(diǎn)不下降，故確定該化合物為β－谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物Ⅱ:白色固體(三氯甲烷)，mp:174℃ ～176℃。1H－NMR(300 MHz，CDCl3)δ:6.58(4H，s，H－2，6，2'，6')，5.53(2H，s，4，4'－OH)，4.73(2H，d，J=4.1 Hz，H－7，7')，4.28(2H，dd，J=6.7，9.1 Hz，H－9e，9'e)，3.91(2H，m，H－9a，9'a)，3.89(12H，s，OMe－3，3'，5，5')，3.10(2H，m，H－8，8')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道的丁香脂素一致，故確定該化合物為丁香脂素(syringaresinol)。

化合物Ⅲ:淡黃色針狀結(jié)晶(三氯甲烷－甲醇)，mp:284 ℃ ～285 ℃。1H－NMR(500 MHz，DMSO－d6)δ:13.08(1H，s，5－OH)，7.92(2H，d，J=9.0 Hz，H－2'，6')，6.92(2H，d，J=9.0 Hz，H－3'，5')，6.79(1H，s，H－8)，6.60(1H，s，H－3)，3.75(3H，s，OMe－6)，10.70(OH－7)，10.36(OH－4')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道的粗毛豚草素基本一致，故確定該化合物為粗毛豚草素(hispidulin)。

化合物Ⅳ:黃色粒狀結(jié)晶(三氯甲烷－甲醇)，mp:255℃ ～257 ℃。1H－NMR(500 MHz，DMSO－d6)δ:13.07(1H，s，OH－5)，7.92(2H，d，J=5.3 Hz，H－2'，6')，6.92(1H，d，J=5.3 Hz，H－5')，6.77(1H，s，H－8)，6.59(1H，s，H－3)，3.76(3H，s，OMe－6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］報(bào)道的澤蘭黃酮基本一致，故確定該化合物為澤蘭黃酮(nepetin)。

化合物Ⅴ:深紅色粉末(丙酮)。1H－NMR(500 MHz，acetone－d6)δ:6.72(1H，d，J=2.4 Hz，H－2)，7.37(1H，d，J=2.4 Hz，H－4)，7.26(1H，s，H－5)，2.38(3H，s，CH3－3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］報(bào)道的7－羥基大黃素基本一致，故確定該化合物為7－羥基大黃素(7-hydroxy emodin)。

化合物Ⅵ:白色粉末(三氯甲烷－甲醇)，mp:277℃ ～278 ℃。1H－NMR(500 MHz，C5D5N)δ:5.50(1H，m，H－12)，3.21(1H，dd，J=5.8，5.4 Hz，H－3)，2.19(1H，d，J=11.1 Hz，H－18)，1.26，1.08，0.98，0.86，0.78(5×3H，s，Me－23，24，25，26，27)，0.94(6H，d，J=6.5 Hz，Me－29，30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］報(bào)道的熊果酸基本一致，故確定該化合物為熊果酸(ursolic acid)。

化合物Ⅶ:黃色粉末(三氯甲烷－甲醇)，mp:328℃ ～330 ℃。1H－NMR(300 MHz，DMSO－d6)δ:12.95(1H，s，OH－5)，10.02(3H，brs，H－3'，H－4'，H－7)，7.41(1H，t，J=2.2，8.0 Hz，H－6')，7.39(1H，s，H－2')，6.89(1H，d，J=8.0 Hz，H－5')，6.66(1H，s，H－3)，6.44(1H，d，J=2.0 Hz，H－8)，6.19(1H，d，J=2.0 Hz，H－6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］報(bào)道的木犀草素基本一致，故確定該化合物為木犀草素(luteolin)。

化合物Ⅷ:白色粉末(三氯甲烷－甲醇)，1H－NMR(500 MHz，C5D5N)δ:5.50(1H，s，H－12)，4.29(1H，m，H－2)，3.75(1H，d，J=2.1 Hz，H－3)，2.61(1H，d，J=11.4 Hz，H－18)，1.27(3H，s，H－23)，1.19(3H，s，H－24)，1.12(3H，s，H－26)，1.05(3H，s，H－27)，0.97(3H，d，J=5.1 Hz，H－29)，0.94(3H，s，H－25)，0.90(3H，d，J=5.1 Hz，H－30)。根據(jù)文獻(xiàn)［12］確定該化合物為 2α，3β－二羥基－12－烯－28－烏蘇酸(2α，3βdihydroxy-12-en-28-ursonic acid)。

化合物Ⅸ:黃色粉末(甲醇)，mp:241℃ ～242℃。1HNMR(500 MHz，DMSO－d6)δ:12.95(1H，s，5－OH)，10.37(1H，s，OH－4')，7.92(2H，d，J=8.8 Hz，H－2'，H－6')，7.01(1H，s，H－8)，6.94(2H，d，J=8.8 Hz，H－3'，H－5')，6.85(1H，s，H－3)，5.05(1H，d，J=4.4 Hz，H－1″)，3.77(3H，s，OMe－6)，3.17 ～3.75(5H，m，H－2″～6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道的高車前苷基本一致，故確定該化合物為高車前苷(homoplantaginin)。

化合物Ⅹ:黃白色粉末(甲醇)。1H－NMR(500 MHz，DMSO－d6)δ:12.97(1H，s，5－OH)，9.93(2H，s，3'，4'－OH)，7.43(2H，m，H－2'，6')，6.97(1H，s，H－8)，6.91(1H，m，H－5')，6.73(1H，s，H－3)，5.14(1H，d，J=3.8 Hz，H－1″)，3.77(3H，s，OMe－6)，3.17 ～ 3.74(5H，m，H－2″～ 6″)。根據(jù)文獻(xiàn)［15］確定該化合物為假荊芥屬苷(nepitrin)。

化合物Ⅺ:白色結(jié)晶(三氯甲烷－甲醇)。1H－NMR(500 MHz，C5D5N)δ:0.81，1.02，1.03，1.09，1.25，1.30，1.67(each 3H，s，H－23，24，25，26，27，28，30)，4.84(1H，d，J=2.3 Hz，H－29b)，4.59(1H，d，J=1.0 Hz，H－29a)，4.12(1H，m，H－1)，3.97(1H，m，H－11)，3.57(1H，m，H－3)，8.69(2H，s，1，11－OH)，8.48(1H，s，3－OH)。13C－NMR(125 MHz，C5D5N)δ:66.9(C－1)，36.6(C－2)，75.5(C－3)，40.4(C－4)，58.6(C－5)，19.2(C－6)，36.2(C－7)，43.1(C－8)，53.9(C－9)，46.7(C－10)，76.9(C－11)，35.5(C－12)，36.7(C－13)，43.4(C－14)，30.6(C－15)，38.4(C－16)，43.6(C－17)，49.1(C－18)，48.6(C－19)，151.0(C－20)，28.4(C－21)，40.5(C－22)，29.1(C－23)，14.8(C－24)，16.1(C－25)，18.2(C－26)，14.7(C－27)，18.7(C－28)，110.7(C－29)，19.8(C－30)。根據(jù)文獻(xiàn)［19］確定該化合物為nepetidin。

化合物Ⅻ:白色粉末(三氯甲烷)。1H－NMR(500 MHz，C5D5N)δ:0.87(3H，m，－Me)，1.25(34H，m，17×－CH2)，1.56(4H，m，－CH2－CH2)，3.63(2H，t，J=6.6 Hz，－CH2－OH)。根據(jù)文獻(xiàn)［20］確定該化合物為正二十一烷醇(n-heneicosanol)。

化合物ⅩⅢ:黃白色粉末(三氯甲烷－甲醇)，mp:345℃ ～350 ℃。1H－NMR(500 MHz，C5D5N)δ:7.93(1H，d，J=1.9 Hz，H－2')，7.92(1H，d，J=1.9 Hz，H－6')，7.23(2H，d，J=1.9 Hz，H－3'，H－5')，6.91(1H，s，H－3)，6.82(1H，d，J=2.0 Hz，H－8)，6.75(1H，d，J=2.0 Hz，H－6)，13.76(1H，s，5－OH)，13.06(1H，brs，7－OH)，12.56(1H，brs，4'－OH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［21］報(bào)道的芹菜素基本一致，故鑒定該化合物為芹菜素(apigenin)。

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:從荔枝草全草的乙醇提取物中共分離得到13個(gè)化合物，分別為β－谷甾醇(Ⅰ)、丁香脂素(Ⅱ)、粗毛豚草素(Ⅲ)、澤蘭黃酮(Ⅳ)、7－羥基大黃素(Ⅴ)、熊果酸(Ⅵ)、木犀草素(Ⅶ)、2α，3β－二羥基－12－烯－28－烏蘇酸(Ⅷ)、高車前苷(Ⅸ)、假荊芥屬苷(Ⅹ)、nepetidin(Ⅺ)、正二十一烷醇(Ⅻ)和芹菜素(す)，其中化合物Ⅺ為首次從鼠尾草屬植物中分離獲得，化合物Ⅱ、Ⅴ、Ⅺ、Ⅻ和ⅩⅢ為首次從荔枝草中分離獲得。在13個(gè)化合物中有6個(gè)黃酮類化合物，其中粗毛豚草素、澤蘭黃酮、高車前苷和假荊芥屬苷含量較高。本研究結(jié)果為尋找與荔枝草生物活性相吻合的有效成分奠定了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，對(duì)于更全面開(kāi)發(fā)荔枝草這一藥用植物資源具有重要的理論和實(shí)踐意義。

［1］OSHIMA Y，KAWAKAMI Y，KISO Y.Liver protective drugs.13.Antihepatotoxic principles of Salvia plebeia herbs［J］.Shoyakugaku Zasshi，1984，38(2):201－202.

［2］郭仁永，李 玲，郝 洪.荔枝草止咳平喘作用的研究［J］.國(guó)醫(yī)論壇，2000，15(4):41.

［3］王立寬，郭冬青，李 軍，等.荔枝草揮發(fā)油的化學(xué)成分分析及抑菌活性研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37(27):13094－13096.

［4］張 梅，孫 霞.荔枝草治療帶狀皰疹的臨床研究［J］.中華醫(yī)學(xué)實(shí)踐雜志，2004，3(3):262.

［5］UM S H，LEE K R，ZEE O P，et al.The effect of Salvia plebeia on murin macrophage-mediated cytotoxicity［J］. NaturalProduct Sciences，1996，2(1):43－47.

［6］張紅霞.荔枝草的藥效學(xué)研究［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2010(1):35－36.

［7］JUNG H J，SONG Y S，LIM C J，et al.Anti-inflammatory，antiangiogenic and anti-nociceptive activities of an ethanol extract of Salvia plebeia R.Brown［J］.Journal of Ethnopharmacology，2009，126(2):355－360.

［8］翁新楚，任國(guó)譜，段 杉，等.天然抗氧化劑的篩選［J］.中國(guó)糧油學(xué)報(bào)，1998，13(4):46－48.

［9］POWELL R G，PLATTNER R D.Structure of a secoisolariciresinol diester from Salvia plebeia seed［J］.Phytochemistry，1976，15(12):1963－1965.

［10］PLATTNER R D，POWELL R G.A secoisolariciresinol branched fatty diester from Salvia plebeia seed［J］.Phytochemistry，1978，17(1):149－150.

［11］GARCIA-ALVAREZ M C，HASAN M，MICHAVILA A，et al.Epoxysalviacoccin，a neo-clerodane diterpenoid from Salvia plebeia［J］.Phytochemistry，1986，25(1):272－274.

［12］盧汝梅，楊長(zhǎng)水，韋建華.荔枝草化學(xué)成分的研究［J］.中草藥，2011，42(5):859－862.

［13］盧汝梅，潘麗娜，朱小勇，等.荔枝草揮發(fā)油的化學(xué)成分分析［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19(1):164－165.

［14］戴春燕，陳光英，朱國(guó)元，等.戰(zhàn)骨莖的化學(xué)成分研究［J］.中草藥，2007，38(1):34－35.

［15］向 蘭，陳滬寧，徐成明，等.荔枝草中黃酮類成分的研究［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2008，43(11):813－815.

［16］張玉奎.分析化學(xué)手冊(cè):第五分冊(cè)［M］.2版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2003:468.

［17］吳 敏，趙廣才，魏孝義，等.銳尖山香圓葉中三萜類成分的研究［J］.熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào)，2012，20(1):78－83.

［18］吳 娟，周先禮，周小力，等.藏角蒿花的化學(xué)成分研究［J］.中草藥，2012，43(1):55－59.

［19］AHMAD V U，BANO S，VOELTER W，et al.The structure of nepetidin， a new triterpenoid from Nepeta hindostana［J］.Zeitschrift für Naturforschung. Teil B:Anorganische Chemie，Organische Chemie，1982，37B(12):1675－1676.

［20］殷 婕，鄔云霞，吳啟南，等.淡竹葉的化學(xué)成分研究［J］.西北藥學(xué)雜志，2010，25(6):413－414.

［21］馮子明，楊椏楠，姜建雙，等.小薊的化學(xué)成分研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(6):87－89.