中藥香附中促進(jìn)胃腸動力有效組分提取方法研究

趙洪超

（沈陽市蘇家屯區(qū)中醫(yī)醫(yī)院制劑室，遼寧 沈陽110101）

香附為莎草科植物莎草Rhizoma cyperi rotundusL.的干燥根莖，主產(chǎn)于山東、浙江等地，有行氣解郁，調(diào)經(jīng)止痛的功效，常用于治療肝郁氣滯，胸、脅、脘腹脹痛，消化不良，胸脘痞悶，寒疝腹痛，乳房脹痛，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)[1]，被歷代中醫(yī)譽(yù)為“氣病之總司，女科之元帥”[2]。香附中主要成分為揮發(fā)油類，另外，文獻(xiàn)報(bào)道還有黃酮類、三萜類、糖類、生物堿類、酚類和萜類等[3]。香附具有抑制胃排空，促進(jìn)腸傳輸?shù)淖饔肹4]。因此，對香附揮發(fā)油以外成分的深入研究對于揭示香附廣泛的藥理作用是十分有必要的。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-1800型紫外分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器有限公司）；HSS型電子恒溫水浴鍋（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-DⅢ型循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 試藥

香附藥材（遼寧本溪三藥有限公司）；蘆丁對照品（供含量測定用，批號：080-9002，中國藥品生物制品檢定所）；亞硝酸鈉（沈陽化學(xué)試劑廠）；硝酸鋁（天津天河化學(xué)試劑廠）；氫氧化鈉（天津福晨化學(xué)試劑廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫外分光光度法

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱定蘆丁對照品9.27mg，用甲醇溶解，定容于50mL量瓶中，得到濃度為0.1854 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.1.2 檢測波長的選擇

精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL，置于10mL容量瓶中，并依次加入0.3mL的5%NaNO2溶液，搖勻，靜置6min，0.3mL的10%A1（NO3）3溶液，搖勻，靜置6min，4.0 mL的4%NaOH溶液，搖勻，靜置15min，于200～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波長掃描，結(jié)果在510nm有最大吸收峰，故確定檢測波長為510nm。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密吸取1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液置于10mL容量瓶中，并依次加入0.3mL的5%NaNO2溶液，搖勻，靜置6min，0.3mL的10%A1（NO3）3溶液，搖勻，靜置6min，4.0mL的4%NaOH溶液，搖勻，靜置15min。再取甲醇定容。用紫外分光光度計(jì)在510nm測定對照品溶液的吸光度，對照品溶液與吸光度的線性關(guān)系為y=10.128x+0.0685，R=0.9995。香附中總黃酮以蘆丁計(jì)在0.02～0.08mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2 香附總黃酮提取工藝考察

2.2.1 香附總黃酮提取醇濃度考察

①稱取香附粗粉（過60目篩）7份，每份5g，置100mL 圓底燒瓶中，分別用水、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇各50mL，加熱回流提取1h，放冷，過濾，濾液定容至50mL量瓶，作為供試品溶液。②取以上供試品溶液0.2mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定吸光度，計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果見表1。

表1 香附總黃酮提取醇濃度考察結(jié)果

由表1可知，乙醇濃度為60%時香附總黃酮提取含量最高，故確定60%乙醇為香附總黃酮的最佳提取醇濃度。

2.2.2 香附總黃酮提取方法考察

①超聲提取法：稱取香附粗粉（過60目篩）5g，置100mL 具塞錐形瓶中， 加60%乙醇50mL，超聲提取1h，過濾，濾液定容至50mL量瓶，作為供試品溶液。②回流提取法：稱取香附粗粉（過60目篩）5g，置100mL 圓底燒瓶中，加60%乙醇50mL，回流提取1h，過濾，濾液定容至50mL量瓶，作為供試品溶液。③取以上供試品溶液0.2mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定吸光度，計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果見表2。

表2 香附總黃酮提取方法考察結(jié)果

由表2可知，回流提取法香附總黃酮提取含量高于超聲提取法，故確定回流提取法為香附總黃酮的最佳提取方法。

2.2.3 香附總黃酮提取正交設(shè)計(jì)

選擇主要影響提取效率的物料比（A），提取次數(shù)（B），提取時間（C），藥材粒度（D）為考察因素，采用L9（34）正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn),因素水平表見表3。

表3 香附總黃酮提取正交因素水平表

取香附粉末約25g，按表3中的要求，加60%乙醇水浴回流提取，放冷，過濾，回收溶劑濃縮提取液，提取液定容至250mL量瓶中，作為樣品溶液。精密取樣品溶液0.2mL， 按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定吸光度，計(jì)算總黃酮含量。精密吸取樣品溶液200mL，進(jìn)行出膏率測定。并以香附總黃酮含量權(quán)重系數(shù)為0.8，出膏率權(quán)重系數(shù)為0.2進(jìn)行綜合評分，正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4，方差分析見表5。

表4 香附總黃酮提取正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表5 方差分析

經(jīng)直觀分析和方差分析可見，影響香附總黃酮提取的因素大小順序?yàn)锽＞D＞C＞A，提取次數(shù)具有顯著性差異，確定以A2B3C3D2，即8倍量60%乙醇，回流提取3次，每次2h，藥材粒度為中粉為最佳提取工藝。

2.2.4 香附總黃酮提取工藝驗(yàn)證

為進(jìn)一步考察選取工藝的可靠性及穩(wěn)定性，分別稱取藥材5份各50g，按2.2.3最佳工藝進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定總黃酮含量，并計(jì)算出膏率，結(jié)果見表6。

表6 香附總黃酮提取工藝驗(yàn)證結(jié)果

由表6可知正交優(yōu)選的最佳提取工藝各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于正交試驗(yàn)中的最高值，說明優(yōu)化是成功的。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)采用考察不同比例的乙醇濃度對香附總黃酮提取效果的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)60%乙醇對香附中總黃酮提取效果最好。有文獻(xiàn)報(bào)道對香附總黃酮的提取采用超聲提取[5]，本實(shí)驗(yàn)比較超聲提取和回流提取，發(fā)現(xiàn)回流提取優(yōu)于超聲提取。在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)物料比、提取時間、提取次數(shù)和藥材粉碎粒度這四個因素進(jìn)行四因素三水平正交考察，最終確定香附總黃酮最佳提取工藝為8倍量60%乙醇，回流提取3次，每次2h，藥材粒度為中粉。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].Ⅰ部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010：181.

[2] 明?李時珍.本草綱目(校點(diǎn)本上冊)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1982： 888.

[3] 黃險(xiǎn)峰,彭國平.香附的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].中藥材,2003,26(1)：65.

[4] 王賀玲,等.理氣中藥對鼠胃腸動力的影響[J].世界華人消化雜志,2004,12(5)：1136-1138.

[5] 黃鎖義,羅建華,張麗丹,等.香附總黃酮的超聲波提取工藝研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,19(1)：142-142.