HPLC法測(cè)定其格日木湯中梔子苷的含量

王曉娟

(錫盟藥檢所，內(nèi)蒙古錫林浩特026000)

HPLC法測(cè)定其格日木湯中梔子苷的含量

王曉娟

(錫盟藥檢所，內(nèi)蒙古錫林浩特026000)

目的:HPLC法測(cè)定其格日木湯中梔子苷的含量。方法:以C12柱(250mm×4.5mm，5μm)，乙腈-水-甲醇(12:88:1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm，流速為1mL·min-1，柱溫為40。C。結(jié)果:線形范圍0.1993～1.1960μg(r=0.9993)，平均含量為2.6234 mg·g-1，RSD為1.1%。結(jié)論:本法可作為其格日木湯中梔子苷含量測(cè)定的一種準(zhǔn)確、靈敏、可行的方法。

其格日木湯;蒙藥;梔子苷;HPLC法;含量測(cè)定

蒙成藥其格日木湯由五靈脂、紅花、梔子、川木通、瞿麥、訶子、川楝子、丹參、苦地丁、黃連、五味子、豬膽粉、甘草等13味藥組成，主要用于肝熱，肝久熱，肝血昔日相江，肝膽“粘”熱等。處方中梔子為主藥成分，梔子苷可作其格日木湯中含量指標(biāo)。本文采用HPLC方法對(duì)梔子苷進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器、材料與試劑

島津SIL-20A高效液相色譜儀。梔子苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;其格日木湯由東烏旗蒙醫(yī)院提供，其格日木湯模擬樣品自制。乙睛、甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件:色譜柱天河C18(250mm×4.5mm，5μm);乙腈-水-甲醇(12:88:1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm，流速為1mL·min-1，柱溫為40。C。

2.2 提取時(shí)間考察與樣品制備:參照《中國(guó)藥典》2005年版一部“三子散”項(xiàng)下梔子苷含量測(cè)定的方法，選用甲醇作為提取溶劑精密稱取0.3g，至具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液25ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300W，頻率40kHz)50min，放冷，稱定重量，甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，制得供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)中考察了超聲提取10、20、30、40、50、60和70min不同超聲提取時(shí)間對(duì)提取效率的影響，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1提取效率的考察表

從表中數(shù)據(jù)可見(jiàn)，超聲處理50、60和70min梔子苷的含量基本一致，故超聲提取時(shí)間定為50min。

2.3 專屬性:梔子苷對(duì)照品的HPLC圖的測(cè)定:精密稱取梔子苷對(duì)照品14.94mg，置50mL量瓶中，加甲醇(色譜純)溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL于50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成對(duì)照品溶液，精密量取10μL注入液相色譜儀測(cè)定。

其格日木湯HPLC圖的測(cè)定:取本品，研細(xì)，稱取約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇(分析純)25mL，密塞，稱定重量，超聲處理50min，放冷，再稱定重量，用甲醇(分析純)補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10μL注入液相色譜儀測(cè)定。

陰性對(duì)照液的HPLC圖的測(cè)定:按處方配比取處方中除主藥外的12味藥混勻，制成模擬陰性對(duì)照。取上述模擬陰性對(duì)照約0.3g，精密稱定，制成陰性對(duì)照液，同法測(cè)定。

測(cè)定結(jié)果:陰性對(duì)照色譜圖在與梔子苷對(duì)照品以及供試品色譜相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其它組分對(duì)梔子苷的測(cè)定無(wú)干擾。

2.4 線性關(guān)系考察:取梔子苷對(duì)照品15mg，精密稱取為14.95mg，置150mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取0.5、1、2、3、4、5、6mL，分別置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取20μL進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行回歸分析，結(jié)果梔子苷在0.1993～1.1960μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

回歸方程為:Y=1379109.7X+1331.10，R2=0.9993

表2梔子苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值表

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一份供試品溶液(批號(hào):20090604)，分別在0、2、4、8、12、24(h)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3不同時(shí)間測(cè)定樣品中梔子苷的峰面積積分值

從表中數(shù)據(jù)可見(jiàn)，梔子苷在24h內(nèi)的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變。

2.6 精密度:取同一批號(hào)供試品(批號(hào):20090604)6份，研細(xì)，精密稱取0.3g，按2.2項(xiàng)下的方法制得供試品溶液;另精密稱取梔子苷對(duì)照品14.94mg依法制成每1mL含梔子苷29.88μg的溶液作為對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述溶液各10ul注入色譜儀測(cè)定每份供試品含量。按外標(biāo)法計(jì)算含量。平均含量(2.6234mg·g-1)，RSD為1.1。

2.7 回收試驗(yàn):梔子苷對(duì)照品溶液的制備:精密稱取梔子苷對(duì)照品14.94mg，置50m量瓶中，加甲醇制成每1ml含梔子苷0.2988mg的溶液，再分別精密吸取5mL、10mL、15mL分別至200mL量瓶中制成7.47、14.94和22.41μg·mL-1梔子苷對(duì)照品溶液。

加樣回收試驗(yàn):取供試品(批號(hào):20090604含量2.6234mg·g-1)9份，各約0.15mg，精密稱定，分別置9個(gè)具塞錐形瓶中，在1～3、4～6、7～9號(hào)分別精密加入濃度為0.00747、0.01494、0.02241 mg·mL-1的梔子苷對(duì)照品甲醇溶液25mL，按2.2項(xiàng)下的方法制得供試品溶液，分別精密吸取上述溶液各10uL注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。平均回收率分別為101.1、101.9、98.8，RSD為1.0、0.8、1.0。

3 樣品含量測(cè)定

取本品2.0g，按2.2項(xiàng)下方法制備，取10μL注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4樣品中梔子苷含量測(cè)定結(jié)果

從表中2批樣品及1批模擬樣品測(cè)定的數(shù)據(jù)可見(jiàn)，梔子苷的含量在2.4960mg·g-1以上。

4 小結(jié)

4.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:梔子苷的檢測(cè)保留時(shí)間為9.75min;而陰性對(duì)照溶液在此處未出現(xiàn)檢測(cè)峰。說(shuō)明樣品中的其他藥材不干擾梔子苷的測(cè)定。

4.2 參照《中國(guó)藥典》2005年版一部“三子散”項(xiàng)下梔子苷含量測(cè)定的方法，含量測(cè)定項(xiàng)下的流動(dòng)相和檢測(cè)波長(zhǎng)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分離效果不好，故采用現(xiàn)在的流動(dòng)相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典2005年版一部［S］化學(xué)工業(yè)出版社，3、173、324

［2］內(nèi)蒙古衛(wèi)生廳編.內(nèi)蒙古蒙藥材標(biāo)準(zhǔn)［S］.內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社，1986，448、498

［3］內(nèi)蒙古食品藥品檢驗(yàn)所.內(nèi)蒙古蒙藥制劑規(guī)范［M］.內(nèi)蒙古人民出版社，2007，26、226

2012年6月18日收稿

R291.2

A

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