GC法測定辣椒堿中環(huán)己烷、乙醇、乙酸乙酯殘留量

蔣 雷，蔣玉梅，宋 非

(1.山東綠葉制藥有限公司，山東 煙臺 264003;2.煙臺市食品藥品檢驗所，山東 煙臺 264000)

辣椒堿系自茄科植物辣椒中提取制得的混合物，其主要成分辣椒堿為(反)－N－［(4－羥基－3－甲氧基苯基)甲基］－8－甲基－6－壬烯酰胺，為白色或微黃色結晶性粉末。辣椒堿主要通過影響C型感覺神經元上的神經傳導介質P物質的釋放、合成和貯藏而起鎮(zhèn)痛和止癢作用。

辣椒堿生產當中使用了有機溶劑:環(huán)己烷(二類殘留溶劑)、乙醇(三類殘留溶劑)、乙酸乙酯(三類殘留溶劑)。辣椒堿現行標準為:國家食品藥品監(jiān)督管理局標準YBH05742006，其中沒有殘留溶劑的檢查，根據《中國藥典》2010年版凡例規(guī)定“如生產過程中引入或生產中殘留有機溶劑，均應按‘殘留溶劑測定法’檢查并應符合相應溶劑的限度規(guī)定”。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 氣相色譜儀(agilent6890N);氮、氫、空氣發(fā)生器(SGD－300，北京東方精華苑科技有限公司);電子分析天平(Sartorius BP210S)。

1.2 試藥 環(huán)己烷(分析純);乙醇(色譜純);乙酸乙酯(色譜純);辣椒堿(山東綠葉制藥有限公司20101017)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 檢測器:氫火焰離子化檢測器;固定相:6%氰丙級苯基－94%二甲基聚硅氧烷;色譜柱:石英毛細管柱30 m;載氣柱流量 2.0mL·min－1;助燃氣:氫氣;柱溫:120℃維持10min;氣化室溫度:200℃;檢測器溫度:250℃。

2.2 對照溶液的制備 精密移取環(huán)己烷50.0μL(39.00mg)，乙醇 63.4μL(50.00mg)，乙酸乙酯 55.4μL(50.00mg)于100mL量瓶中，加適量N，N－二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度。精密取上述溶液1mL置于10mL量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱取供試品0.5 g于10mL量瓶中，加適量N，N－二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度。

2.4 分別精密量取對照溶液、供試品溶液各1μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。

2.5 專屬性 按2.2項下配制對照品溶液，圖1中三色譜峰(從左到右)依次為環(huán)己烷、乙醇、乙酸乙酯，三色譜峰分離良好，無干擾。

圖1 專屬性試驗色譜圖

2.6 線性關系 分別配制濃度為對照品溶液50%，75%，100%，125%，150%的溶液，測定。以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，分別對三種溶劑進行線性回歸，環(huán)己烷、乙醇、乙酸乙酯回歸方程分別為:

Y=3.0733X －0.1584，r=0.998，線性范圍:19.5 ～58.5 μg·mL－1;Y=1.6208X －8.6，r=0.998，線性范圍:25.0 ～75.0 μg·mL－1;Y=1.3872X－0.88，r=0.999，線性范圍:25.0 ～75.0μg·mL－1。

2.7 精密度 取對照品溶液重復進樣5次，每次1μL，測得環(huán)己烷峰面積的RSD為3.5%;乙醇峰面積的RSD為3.3%;乙酸乙酯峰面積的RSD為3.1%。

2.8 準確度 稱取同一批次辣椒堿(山東綠葉制藥有限公司20101017)0.5 g，未檢出三種有機溶劑，精密稱定9份，并分別加入3個梯度量的環(huán)己烷、乙醇、乙酸乙酯，按2.1項下色譜條件測定，結果見表1、2、3。

表1 環(huán)己烷回收率試驗結果

續(xù)表1:

表2 乙醇回收率試驗結果

表3 乙酸乙酯回收率試驗結果

2.9 定量限 取對照品溶液稀釋至信噪比10∶1，環(huán)己烷的定量限為:0.7 ×10－3mg·mL－1;乙醇的定量限為:1 ×10－3mg·mL－1;乙酸乙酯的定量限為1 ×10－3mg·mL－1。

3 小結與討論

3.1 在色譜條件優(yōu)化過程中，發(fā)現采用高極性的聚乙二醇柱分離效果不如極性相對較低的DB－624柱，較高的柱溫既能夠滿足分離度的要求，又可縮短出峰時間，從而提高檢測效率。

3.2 溶劑的選擇 對丙酮、DMSO、正己烷等做過實驗均未達到預期效果，最終選擇DMF作為溶劑，與測定溶劑之間能夠達到有效分離。

3.3 實驗結果表明本方法操作簡單，準確、專屬性強、重現性好，可作為辣椒堿中乙酸乙酯、環(huán)己烷、丙酮殘留量的測定方法。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(二部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄 ⅧP.