高效液相色譜法定性鑒別人參口服液中人參皂苷Rg1、Re的方法研究

杜進(jìn)+王雪

摘 要：為了確保人參口服液產(chǎn)品原料用藥的真實(shí)，本文通過查閱大量文獻(xiàn)，不斷進(jìn)行實(shí)驗(yàn)摸索以及分析方法學(xué)驗(yàn)證工作，建立了人參口服液定性鑒別的測定方法。方法：采用高效液相色譜法對人參皂苷Rg1、Re進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果：本方法專屬性、耐用性良好，能準(zhǔn)確進(jìn)行定性鑒別。結(jié)論：建立的新方法準(zhǔn)確可靠，適用于人參口服液鑒別分析。

關(guān)鍵詞：人參皂苷；專屬性；耐用性；高效液相色譜法

人參口服液大補(bǔ)元?dú)?，生津止渴。用于氣虛所致的身倦乏力，食欲不振，心悸氣短，失眠健忘等。人參口服液主要成分為人參。人參作為滋補(bǔ)佳品，其成分極其復(fù)雜，而人參皂苷被視為人參中的核心成分。例如人參皂苷Rg1可快速緩解疲勞、改善學(xué)習(xí)記憶、延緩衰老，具有興奮中樞神經(jīng)、抑制血小板作用；Rg2具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治療和預(yù)防冠心??；Rb1具有增強(qiáng)膽堿系統(tǒng)的功能，增加乙酰膽堿的合成和釋放以及改善記憶力作用；人參皂苷Re具有抑制中樞神經(jīng)，促進(jìn)DNA，RNA合成，升高血漿皮質(zhì)酮，擴(kuò)張血管的作用。人參加工產(chǎn)品大多以總皂苷形式定量，而因種植及提取方法不同各單組分皂苷含量差異較大，為使同類產(chǎn)品更具使用針對性及防范合成式假冒投產(chǎn)本文采用高效液相色譜法建立了人參口服液定性鑒別人參皂苷Rg1、Re的測定方法，嚴(yán)格控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保藥品真實(shí)可靠。

1 材料

1.1 供試品

人參口服液（市售樣品，規(guī)格10ml/支）

1.2 對照品

（1）人參皂苷Rg1（中國藥品生物制品檢定所 批號：110703-201128 含量93.4%）。貯存條件：冷藏。使用條件：使用前無需干燥，可直接使用。（2）人參皂苷Re（中國藥品生物制品檢定所 批號：110754-201324 含量92.7%）。貯存條件：冷藏。使用條件：使用前無需干燥，可直接使用。

1.3 陰性空白樣品

技術(shù)部門提供陰性空白樣品為按人參口服液工藝生產(chǎn)，但不含人參功效成分的空白混合物。

1.4 儀器與試藥

1.4.1 儀器。高效液相色譜儀（ 美國Waters e2695）、分析天平等。

1.4.2 試藥。甲醇、乙腈為無末端吸收色譜純級試劑，其他試劑為分析純，均購自合格的供應(yīng)商。

2 測定方法

2.1 色譜條件

儀器：美國Waters e2695高效液相色譜儀紫外檢測器。流動相：乙腈-水為流動相，進(jìn)行梯度洗脫（見表1）。檢測波長：203nm。柱溫：30℃。流速：1.0ml/min。進(jìn)樣量：20μl。色譜柱：Agilent C18（250×4.6mm，5μm）

2.2 對照品和供試品溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備。取人參皂苷Rg1、Re對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備。精密量取人參口服液20ml置分液漏斗中，以水飽和正丁醇提取3次，每次20ml，合并提取液，至水浴鍋上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙庵?ml量瓶中，定容至刻度，搖勻，過濾，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備。取陰性空白混合液20ml置分液漏斗中，與供試品溶液同法制成陰性對照溶液。

3 試驗(yàn)研究

3.1 鑒別方法的專屬性考察

用供試品溶液，對照品溶液以及陰性空白對照溶液驗(yàn)證本方法的專屬性。（圖1）

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如上重疊色譜圖，陰性空白對照溶液在對照品溶液峰處無干擾。

3.2 鑒別方法的耐用性考察

通過改變色譜的條件，用對照品溶液驗(yàn)證耐用性。

3.2.1 柱溫。分別在柱溫25℃、30℃、35℃下進(jìn)行測定，記錄色譜圖，觀察分離度、保留時(shí)間、理論塔板數(shù)的變化。

結(jié)果表明：溫度在25℃-35℃區(qū)間內(nèi)理論塔板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)≥30000時(shí)，Rg1、Re分離度均符合要求。

3.2.2 流速。調(diào)節(jié)流速0.9ml/min，1.0ml/min， 1.1ml/min，記錄色譜圖，觀察分離度、保留時(shí)間、理論塔板數(shù)的變化。

結(jié)果表明：流速在0.9-1.1ml/min區(qū)間內(nèi)理論塔板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)≥30000時(shí)，Rg1、Re分離度均符合要求。

3.2.3 不同品牌色譜柱。選擇以下牌號的C18色譜柱：Diamonsil C18色譜柱，Inertsil ODS-3 C18色譜柱，Agilent C18色譜柱，記錄色譜圖，觀察分離度、保留時(shí)間、理論塔板數(shù)的變化。

結(jié)果表明：不同品牌C18色譜柱均可完成鑒別分離。

3.3 檢出限考察

精密量取對照品溶液用甲醇逐步稀釋成一定濃度的溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，信噪比為3時(shí)，最小檢測限為5ug/mL。

4 結(jié)論

經(jīng)過以上分析方法學(xué)驗(yàn)證表明，本方法適用于人參口服液中人參皂苷Rg1、Re成分的定性鑒別。

5 討論

本方法在樣品提取過程中，嘗試過三氯甲烷提取，正丁醇提取、乙醚提取等萃取方式，并嘗試提取液是否需要洗滌過程。試驗(yàn)結(jié)果表明，水飽和正丁醇提取效果較好，并且不需要洗滌過程既可得到Rg1、Re較好的分離峰型圖。水飽和正丁醇提取次數(shù)考察結(jié)果說明2～3次提取基本已經(jīng)將皂苷提盡。流動相選擇乙腈-水梯度洗脫，嘗試更換流動相比例，洗脫時(shí)間等因素，試驗(yàn)結(jié)果表明，現(xiàn)比例分離效果最好，峰型尖銳，陰性無干擾。

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