建立柴連口服液中柴胡鑒別的薄層色譜法

杜進+王雪

摘 要：柴連口服液現(xiàn)標準檢驗項目中無柴胡鑒別項，無法證明柴連口服液中是否含有柴胡有效成分，為了確保藥品真實可靠，筆者通過查閱文獻，不斷進行實驗摸索，建立了適合柴連口服液的柴胡薄層鑒別檢測方法。結(jié)果：建立的柴胡薄層鑒別檢測方法其專屬性、耐用性良好。結(jié)論：建立的新方法準確可靠，適用于柴連口服液質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：柴胡；專屬性；耐用性；薄層鑒別

柴連口服液解表宣肺，化濕和中，用于感冒屬風寒、風寒挾濕癥者，證見惡寒，發(fā)熱、頭痛、鼻塞。咳嗽、咽干、惡心等。其功效成分由麻黃、柴胡、廣藿香、肉桂、連翹等組成。現(xiàn)登載《中國藥典》的柴連口服液的質(zhì)量標準中無柴胡鑒別項，為嚴格控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保藥品真實性，有效提高治療效果，本文建立了適合于柴連口服液的柴胡薄層鑒別檢測方法。

1 材料

1.1 供試品

柴連口服液（本公司技術(shù)部提供樣品 批號：樣品1～樣品10）

貯藏條件：密封，至陰涼處

1.2 對照品

柴胡對照藥材（中國藥品生物制品檢定所 批號：120992-200504，規(guī)格：0.5g）

貯存條件：避光，密閉保存。使用條件：使用前無需干燥，可直接使用。

1.3 陰性空白樣品

技術(shù)部提供陰性空白樣品為按柴連口服液工藝生產(chǎn)不含柴胡藥材的制備樣品。

1.4 儀器與試藥

1.4.1 儀器。超聲波清洗機，電熱恒溫鼓風干燥箱，瑞士卡瑪薄層點板機，瑞士卡瑪薄層成像系統(tǒng)，METTLER電子天平，青島海洋化工廠硅膠G板。

1.4.2 試藥。乙醚、甲醇、正丁醇、氨水、三氯甲烷、對二甲基苯甲醛、硫酸、乙醇、乙酸乙酯等均為分析純來源于合格的供應商。

2 方法研究

2.1 對照藥材溶液和供試品溶液的制備

2.1.1 對照藥材溶液的制備。取柴胡對照藥材0.5g，加水20ml回流1小時，回流液濾過，以水飽和正丁醇提取3次，20ml/次，合并正丁醇液，加入等體積的氨試液，搖勻，棄去氨試液，靜置，分層后，取正丁醇蒸干，殘渣加2ml甲醇溶解，作為對照藥材溶液。

2.1.2 供試品溶液及陰性對照溶液的制備與優(yōu)化。供試品溶液制備：制備方法①：取本品10ml，加甲醇20ml，提取，取甲醇層，超聲處理10分鐘，濾過，濾液濃縮至5ml，作為供試品溶液。制備方法②：取本品10ml置分液漏斗中，用乙醚振搖提取3次，20ml/次，棄去乙醚液，再以水飽和正丁醇提取3次……（同對照藥材溶液制備中間過程），殘渣加5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。陰性對照溶液制備：各取空白樣品液10ml置分液漏斗中，與供試品溶液制備方法①與②同法制成不同陰性對照溶液。實驗薄層色譜圖顯示供試品溶液與對照藥材溶液熒光斑點明亮，表明方法②提取量較多，故應采用方法②作為柴連口服液中柴胡鑒別項的供試品溶液和陰性對照溶液提取方法。

2.2 展開劑溶液的制備與優(yōu)化

制備方法①：三氯甲烷：甲醇：水（13：7：2）10℃以下的下層溶液為展開劑。制備方法②：為乙酸乙酯-甲醇-水（8：2：1）。將供試品溶液、對照藥材溶液及陰性對照溶液以相同點樣量分別點于兩張硅膠G板上，并分別在展開劑①及展開劑②溶劑中展開，觀察不同展開劑斑點顯色情況。實驗色譜圖顯示，以制備方法①為展開劑展開的供試品溶液與對照藥材溶液色譜較方法②斑點顯示清晰，分離較好。故選用展開劑①方法作為柴連口服液柴胡鑒別項的展開劑溶液。

2.3 顯色劑溶液的制備與優(yōu)化

制備方法①：2%對二甲氨基苯甲醛硫酸乙醇（1→10）溶液。制備方法②：2%對二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液。將同一供試液點樣量、薄層板及展開劑溶液完全相同的兩張板分別噴以不同顯色劑溶液，觀察不同顯色劑溶液斑點的顯色情況。實驗色譜圖顯示，噴顯色劑①溶液的色譜斑點較噴顯色劑②溶液的色譜斑點顯色更清晰，易于判定。固選用制備方法①溶液做為柴連口服液中柴胡鑒別項的顯色劑。

2.4 方法小結(jié)

經(jīng)過方法對比試驗，擬定柴連口服液中柴胡鑒別方法如下：取柴胡對照藥材0.5g，加水20ml回流1小時，回流液濾過，以水飽和正丁醇提取3次，20ml/次，合并正丁醇液，加入等體積的氨試液，搖勻，棄去氨試液，靜置，分層后，取正丁醇蒸干，殘渣加2ml甲醇溶解，作為對照藥材溶液。取本品10ml置分液漏斗中，用乙醚振搖提取3次，20ml/次，棄去乙醚液，再以水飽和正丁醇提取3次，20ml/次，合并正丁醇液，加入等體積的氨試液，搖勻，靜置，分層后，棄去氨試液，取正丁醇蒸干，殘渣加5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。吸取供試品溶液及對照品溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上。以三氯甲烷：甲醇：水（13：7：2）10℃以下的下層溶液為展開劑，展開取出，晾干，噴以2%對二甲基苯甲酸硫酸乙醇液（1→10），置105℃干燥箱加熱至斑點顯色清晰。置紫外光（365nm）下檢視，供試品色譜在與對照藥材色譜相應位置上，應顯兩個或兩個以上相同顏色熒光斑點。

3 方法學驗證

3.1 專屬性結(jié)果

以不同樣品的供試液，對照藥材溶液及陰性對照溶液驗證本方法，在相同位置上，供試品溶液與對照藥材溶液呈兩個或兩個以上相同顏色熒光斑點，陰性對照溶液均無對應斑點，檢測專屬性強。

3.2 耐用性結(jié)果

通過在實驗中對試劑廠家、提取次數(shù)及點樣量的改變，以及對10批柴連口服液驗證其柴胡鑒別項方法的耐用性，結(jié)果均成立。

4 結(jié)論

經(jīng)過以上分析方法學驗證表明，本方法適用于柴連口服液中柴胡成分的鑒別。

參考文獻

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