P53、MDM2在基底細胞癌中的表達及意義

艾東方 馮世軍 馬敬

[摘要]目的：研究p53和MDM2蛋白在皮膚基底細胞癌中的表達，探討基底細胞癌的發(fā)生和發(fā)展機制。方法：選取50例基底細胞癌標本，30例正常皮膚組織。采用免疫組化S-P法檢測p53與MDM2蛋白的表達情況。結(jié)果：p53、MDM2蛋白在基底細胞癌組織中的陽性表達率分別為58%（29/50）、46%（23/50），與正常皮膚組織比較，有顯著性差異（P<0.05）?；准毎┙M織中p53蛋白的表達與MDM2蛋白的表達呈正相關(guān)（r=0.460）。結(jié)論：p53和MDM2蛋白在基底細胞癌中的異常表達，說明在基底細胞癌的發(fā)生及發(fā)展過程中起重要作用。

[關(guān)鍵詞]p53；MDM2；基底細胞癌；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號]R739.5[文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455（2012）06-0939-03

基底細胞癌（BCC）大約占所有皮膚癌的75%，而且以3%～8%的速度逐年遞增，BCC好發(fā)于頭頸部，雖然生長緩慢，很少轉(zhuǎn)移，但卻有毀損性。BCC的發(fā)生是多基因相互作用的結(jié)果，目前，在其他多種腫瘤中可以檢測到突變型p53和MDM2的表達，而對于二者在BCC組織中的表達情況及相關(guān)性，則研究較少。我們在此采用免疫組織化學(xué)方法檢測了p53、MDM2在BCC組織及正常皮膚組織中的表達情況，探討p53、MDM2在BCC發(fā)病中的意義。

1資料和方法

1.1 一般資料：組織標本來自2005年10月～2009年10月期間滄州市中心醫(yī)院門診及住院患者，手術(shù)切除后經(jīng)病理證實為BCC。50例BCC中，男性26例，女性24例，年齡36～82歲，平均62.34歲，病程6個月～12年，平均40.25個月，頭面部42例(84%)，軀干部位8例(16%)。排除標準：取材前1年內(nèi)腫瘤經(jīng)過放射線治療；取材前3個月內(nèi)局部應(yīng)用過咪喹莫特、干擾素等藥物或系統(tǒng)應(yīng)用過維甲酸等化療性藥物。另選取正常人包皮手術(shù)切除標本30例，年齡18～40歲，平均23歲。

1.2 研究方法：手術(shù)切除標本均經(jīng)10%多聚甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度4μm，使用S-P免疫組化染色方法對切片進行染色，免疫組化操作步驟嚴格按試劑盒說明進行。鼠抗人p53單克隆抗體及鼠抗人MDM2單克隆抗體均購自上海太陽生物技術(shù)有限公司。用已知陽性切片作陽性對照，用堿性磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷：p53免疫組化陽性信號位于細胞核，呈棕黃色或棕褐色，MDM2免疫組化陽性信號位于細胞核或胞漿，呈棕黃色，染色結(jié)果參照文獻[1]評分方法，高倍鏡下取5個不同視野，各計數(shù)200個細胞，計算陽性細胞所占百分比，陽性細胞數(shù)計數(shù)分：陽性數(shù)＜5%為0；35%＞陽性數(shù)≥5%為1；70%＞陽性數(shù)≥35%為2；陽性數(shù)＞70%為3。著色強度計分：不著色為0，弱著色（呈淡棕黃色）為1，強著色（呈明顯的棕黃色）為2。陽性分級：以上兩項相加，0～1分為(-)，2分為(±)，3分為(+)，4分為(++)，5分為(+++)，-～±記為陰性，+～+++記為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，p53和MDM2陽性百分率的比較采用計數(shù)資料的χ2檢驗，P<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)差異。

2結(jié)果

2.1 正常皮膚組織中p53蛋白表達率為0(0/30)；BCC組織中p53蛋白陽性表達率為58%(29/50)(見圖1、2)，癌組織中p53蛋白陽性率與正常皮膚組織相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2正常皮膚組織中MDM2蛋白表達率為0(0/30)；BCC組織中MDM2蛋白陽性表達率為46%(23/50)(見圖3、4)，癌組織中MDM2蛋白陽性率與正常皮膚組織相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3p53蛋白與MDM2蛋白表達的相關(guān)性分析，p53蛋白與MDM2蛋白有一個比較高的共同表達率，在50例BCC組織中有19例共同表達，陽性表達率為38%，通過相關(guān)分析表明，二者在BCC組織中的表達有明顯的相關(guān)性（P<0.05），見表3。

3討論

p53與基底細胞癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系：p53蛋白分為野生型和突變型兩種，野生型p53阻礙受損傷細胞進入DNA合成期，抑制細胞的分裂和增殖，使受損的DNA有時間修復(fù)，或啟動程序性死亡過程，防止細胞惡變，在p53基因缺失或突變的細胞，受損傷的DNA無法通過p53介導(dǎo)的途徑停止在G1期進行修復(fù)，細胞的遺傳信息受阻，導(dǎo)致惡性轉(zhuǎn)化、增殖以及腫瘤的發(fā)生，但由于野生型p53基因的半衰期短，不易被檢測出，而突變型p53基因半衰期長，所以一般認為，免疫組化法陽性的就表示存在突變型p53基因。BCC由正常角質(zhì)形成細胞惡性轉(zhuǎn)化而成，好發(fā)于曝光部位，過度紫外線照射是誘因之一，研究證明BCC存在p53突變，且大多數(shù)為光突變（C→T或CC→TT轉(zhuǎn)換），光照導(dǎo)致的p53基因突變參與光致癌過程。P53蛋白在BCC中的陽性表達率報道結(jié)果不一，Gorji[2]認為p53陽性率為48.5%，而Adamkov[3]報道p53蛋白的陽性率可高達90.3%，另有研究表明[4]p53的表達可以作為預(yù)測BCC侵襲性的一個標記，而與患者年齡和腫瘤部位沒有相關(guān)性。我們的試驗結(jié)果顯示：p53蛋白在BCC中的陽性表達率為58%(29/50)，相對與Gorji的研究結(jié)果相近，和正常皮膚組織p53蛋白表達相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明p53參與BCC的發(fā)病過程。

MDM2與基底細胞癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系：MDM2是癌基因，對細胞的生長有調(diào)節(jié)作用，參與細胞的基本生理活動，但在正常組織中MDM2蛋白的表達水平很低，MDM2基因突變或表達異常后則會引起細胞轉(zhuǎn)化和腫瘤的發(fā)生[5]，一方面，MDM2基因通過其編碼的P90蛋白與野生型p53基因結(jié)合，使p53基因失去正常功能，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[6]；另一方面，MDM2本身也可以通過數(shù)個非p53依賴性作用方式直接致癌。早期研究認為只有在無p53突變的腫瘤中，才能夠有較高水平的MDM2基因擴增以及相應(yīng)mRNA和蛋白質(zhì)的表達，然而近年來越來越多的具有p53突變的腫瘤也被發(fā)現(xiàn)存在MDM2蛋白的過度表達。BCC具有較高的p53突變率，Cho HS[7]報道MDM2蛋白在BCC中的陽性表達率為50%，其中，MDM2(+)/p53(+)占39%，顯示MDM2蛋白在BCC中有較高的表達，并且與p53蛋白的表達有一個較密切的關(guān)系，近期，Almquist[8]分析了902例基底細胞癌和676例鱗狀細胞癌，發(fā)現(xiàn)攜帶MDM2SNP309G等位基因伴隨一個升高的非黑素瘤皮膚癌的風(fēng)險。我們的試驗結(jié)果顯示：MDM2蛋白在BCC中的陽性表達率為46%(23/50)，與Cho HS的研究結(jié)果相近，和正常組織MDM2蛋白表達相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明MDM2參與了BCC的發(fā)生發(fā)展過程。

p53與MDM2在基底細胞癌發(fā)病過程中的相互關(guān)系：腫瘤的發(fā)生、發(fā)展較為復(fù)雜，其中涉及到原癌基因的激活和抑癌基因的失活以及二者之間的相互作用，本試驗表明p53和MDM2表達升高在BCC發(fā)病過程中扮演著重要角色，由于BCC好發(fā)于老年人，推測在BCC發(fā)病過程中，長期的紫外線照射等誘因促使p53基因突變，突變型p53不能修復(fù)受損的DNA，DNA損傷后，激活MDM2并促使其表達，而MDM2降解突變型p53的能力減弱，導(dǎo)致突變型p53蛋白與MDM2蛋白的慢性蓄積，并反復(fù)加重此循環(huán)過程，最終引起細胞的惡性轉(zhuǎn)化、增殖及腫瘤形成。在MDM2(+)/p53(-)病例，推測MDM2通過表達P90蛋白并與野生型p53蛋白結(jié)合，使野生型p53功能喪失，同樣不能使受損的DNA恢復(fù)正常，而且，作為癌基因的MDM2，有可能與啟動整個細胞周期的基因啟動子結(jié)合，使細胞從G1期向S期轉(zhuǎn)化，引起細胞成瘤性增強。由于BCC的發(fā)生、發(fā)展是一個多基因相互作用的復(fù)雜過程，在均無MDM2、p53表達的病例，可能有不依賴于二者的作用機制促進了BCC的發(fā)病，目前仍需要進一步的研究。

[參考文獻]

[1]Shimizu M,Saitoh Y,Itoh H. Immunohistochemical staining of Ha-ras oncogene product in normal, benign, and m alignant human pancreatic tissues[J]. Hum Pathol,1990,21(6):607-612.

[2]Gorji H,Shahbazi N,Habibollahi P,et al.The glutathione-S-transferase P1 polymorphisms correlates with changes in expression of TP53 tumor suppressor in cutaneous basal cell carcinoma[J].J Dermatol Sci,2009,56(3):208-210.

[3]Adamkov M,Halasova E,Rajcani J,et al. Relation between expression pattern of p53 and survivin in cutaneous basal cell carcinomas[J]. Med Sci Monit,2011,17(3):74-80.

[4]Ansarin H,Daliri M,Soltani-Arabshahi R. Expression of p53 in aggressive and non-aggressive histologic variants of basal cell carcinoma[J]. Eur J Dermatol,2006,16(5):543-547.

[5]Weissman AM.Themes and variations on ubiquitylation[J].Nat Rev Mol Cell Biol, 2001,2(3):169-178.

[6]Momand J,Zambetti GP,Olson DC,et al.The mdm-2 oncogene product forms a complex with the p53 protein and inhibits p53-mediated transactivation[J].Cell,1992,69(7):1237-1245.

[7]Cho HS,Park EJ,Kim CW,et al.Immunohistochemical Study of p53 and MDM2 Expression on the Epithelial Tumors of the Skin[J]. Korean J Dermatol,2007,45(6):534-540.

[8]Almquist LM,Karagas MR,Christensen BC,et al.The role of TP53 and MDM2 polymorphisms in TP53 mutagenesis and risk of non-melanoma skin cancer[J].Carcinogenesis,2011,32(3):327-330.

[收稿日期]2012-03-06[修回日期]2012-04-21

編輯/張惠娟