黎藥-裸花紫珠氯仿萃取部位的化學(xué)成分

董 琳 劉明生 王金輝 張 蕾 沈 碩 張小坡 關(guān)薇薇

1.海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，海南 ?？?571199；2.海南省南藥黎藥研究院，海南 ?？?571101；3.沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016

裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hook.Et Arn.）為馬鞭草科（Verbenaceae）紫珠屬植物。黎藥名為補(bǔ)閥，國(guó)內(nèi)主要分布廣東、廣西、海南等地，其中以海南的裸花紫珠最為道地，是海南黎族醫(yī)生常用藥材之一。藥用部位為干燥地上部分，具有有抗菌止血、消炎解毒、散瘀消腫、驅(qū)風(fēng)祛濕之功效[1-3]。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)裸花紫珠化學(xué)成分研究的報(bào)道較少，其化學(xué)成分主要有萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、揮發(fā)油等[4]。為了開(kāi)發(fā)和利用該藥用植物資源，筆者對(duì)裸花紫珠葉進(jìn)行化學(xué)成分研究。本實(shí)驗(yàn)從裸花紫珠氯仿萃取部位中分離鑒定的5個(gè)已知化合物，分別鑒定為：7α-Hydroxysandaracopimaric acid（Ⅰ）、香草醛（Ⅱ）、5，4′-二羥基-3，7，3′-三甲氧基黃酮（Ⅲ）、5-羥基-3，7，3′，4′-四甲氧基黃酮（Ⅳ）、齊墩果酸（Ⅴ）。其中化合物Ⅱ?yàn)槭状螐脑撝参镏蟹蛛x得到。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Barnstead International顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀 （溫度未經(jīng)校正）。Bruker ARX-300型和Bruker AV-600型核磁共振光譜儀（TMS為內(nèi)標(biāo)，瑞士Bruker公司）。ESI-MS用Agilent 1200SL RRLC-6410 QQQ液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀。半制備HPLC：ShimadzuLC-6AD高效液相色譜儀；色譜柱為YMCC18（5μm，10 mm×250 mm）。

1.2 試藥

裸花紫珠采自海南省五指山，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所陳偉平研究員鑒定為馬鞭草科紫珠屬裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hook.Et Arn.）。薄層色譜和柱色譜用硅膠 （青島海洋化工有限公司），Sephadex LH-20（Pharmacia biotech Sweden），普通色譜用試劑均為分析純（天津大茂化學(xué)試劑公司），甲醇（色譜純，美國(guó)Tedia公司）；氘代試劑為中國(guó)科學(xué)院武漢波譜公司生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離

裸花紫珠葉12.5 kg，粉碎，用水加熱回流提取3次，每次3 h，減壓回收溶劑將提取液濃縮至8000 mL，再依次用氯仿、乙酸乙酯和正丁醇反復(fù)萃取，得氯仿萃取物55 g、乙酸乙酯萃取物40 g和正丁醇萃取物207 g。將氯仿萃取物經(jīng)硅膠開(kāi)放柱色譜分離，以石油醚-丙酮（200∶0～0∶200）進(jìn)行梯度洗脫，TLC檢識(shí)，合并得到17個(gè)流份。各流份分別通過(guò)硅膠柱色譜、凝膠柱色譜及半制備HPLC分離純化，得化合物Ⅰ～Ⅴ。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1 化合物Ⅰ 無(wú)定形固體（甲醇），香草醛-濃硫酸反應(yīng)顯紅色，ESI-MS m/z 317.5[M-H]-，分子式為 C20H30O3。1H-NMR（300 mHz，DMSO-d6） δ：0.74 （3H，s，CH3-20），0.99 （3H，s，CH3-17），1.05（3H，s，CH3-19），4.36（1H，s，7β-H），4.91（1H，dd，J=10.8，1.2 Hz） and 4.97（1H，dd，J=17.4，1.2 Hz）（H-16），5.36（1H，s，H-14），5.78（1H，dd，J=17.7，10.8 Hz，H-15）；13CNMR（75 mHz，DMSO-d6）δ：38.4（C-1），18.6（C-2），37.0（C-3），46.7（C-4），42.3（C-5），32.5（C-6），71.5（C-7），140.2（C-8），45.9 （C-9），38.6 （C-10），18.4 （C-11），34.5 （C-12），37.6（C-13），132.2（C-14），148.8（C-15），111.9（C-16），26.6（C-17），183.1（C-18），17.7（C-19），15.1（C-20）。與文獻(xiàn)[5]對(duì)照，其光譜數(shù)據(jù)基本一致，故化合物Ⅰ鑒定為7α-Hydroxysandaracopimaric acid。

2.2.2 化合物Ⅱ 無(wú)色針晶（甲醇），mp.81～83℃。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性。1H-NMR（300mHz，DMSO-d6）：δ9.72（1H，s，-CHO），δ 3.82（3H，s，OCH3-3），δ 7.38（1H，dd，J=1.7，8.1 Hz，H-6），δ 6.90（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），δ 7.34（1H，br.s，H-2），薄層 E-merson反應(yīng)提示羥基對(duì)位有取代基，上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道的香草醛光譜數(shù)據(jù)基本一致，故化合物Ⅱ鑒定為香草醛。

2.2.3 化合物Ⅲ 黃色粉末（甲醇）。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性，推測(cè)為黃酮類(lèi)化合物。1H-NMR（300 mHz，DMSO-d6）中，δ 12.67（1H，s，5-OH）、δ 9.96（H，s，4′-OH）為酚羥基質(zhì)子信號(hào)，烯氫區(qū)給出5個(gè)質(zhì)子信號(hào)δ：6.37（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）、6.80（1H，d，J=2.0 Hz，H-8）、7.67（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′）、6.97（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′）、7.63 （1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6′）；3 個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào) δ：3.88、3.87、3.82（9H，s，OCH3）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8-9]對(duì)照，其光譜數(shù)據(jù)基本一致， 并與 5，4′-二羥基-3，7，3′-三甲氧基黃酮（即藿香黃酮醇）對(duì)照品共薄層，在三種溶劑系統(tǒng)中Rf值和顯色一致，且混合熔點(diǎn)不下降，故化合物Ⅲ鑒定為5，4′-二羥基-3，7，3′-三甲氧基黃酮（即藿香黃酮醇）。

2.2.4 化合物Ⅳ 黃色粉末（甲醇），三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽(yáng)性，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽(yáng)性，推測(cè)為黃酮類(lèi)化合物。1H-NMR（300 mHz，CDCl3） δ：6.37（1H，d，J=2.0 Hz，H-6）、6.44（1H，d，J=2.0 Hz，H-8）、7.69（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′）、6.99（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′）、7.73（1H，dd，J=8.6，2.0 Hz，H-6′）、3.97，3.97，3.88，3.86（12H，s，3，7，3′，4′-OCH3）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]對(duì)照，其光譜數(shù)據(jù)基本一致， 并與 5-羥基-3，7，3′，4′-四甲氧基黃酮對(duì)照品共薄層，在三種溶劑系統(tǒng)中Rf值和顯色一致，且混合熔點(diǎn)不下降，故化合物Ⅳ鑒定為 5-羥基-3，7，3′，4′-四甲氧基黃酮。

2.2.5 化合物Ⅴ 白色固體（氯仿），Liebermann-Burchard反應(yīng)陽(yáng)性。1H-NMR（300 mHz，Pyr-d5） δ：5.28（1H，s，H-12），3.22（1H，dd，J=10.2，4.2 Hz，H-3），1.14 （3H，s，CH3），0.99（3H，s，CH3），0.93 （3H，s，CH3），0.92 （3H，s，CH3），0.91（3H，s，CH3），0.78（3H，s，CH3），0.76（3H，s，CH3）。13C-NMR（75 mHz，Pyrd5） δ：38.4（C-1）、27.1（C-2）、79.0（C-3）、38.7（C-4）、55.2（C-5）、18.3（C-6）、32.6（C-7）、39.2（C-8）、47.6（C-9）、37.0（C-10）、22.9（C-11）、122.6（C-12）、143.5 （C-13）、41.6 （C-14）、27.6（C-15）、23.5（C-16）、46.5（C-17）、41.0（C-18）、45.8（C-19）、30.6（C-20）、33.8（C-21）、32.4（C-22）、28.1（C-23）、15.6（C-24）、15.4（C-25）、16.9（C-26）、25.9（C-27）、182.7（C-28）、33.0（C-29）、23.4（C-30）。13C-NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11-12]光譜數(shù)據(jù)基本一致，并與齊墩果酸對(duì)照品共薄層，在三種展開(kāi)劑系統(tǒng)中Rf值和顯色一致，且混合熔點(diǎn)不下降，故化合物Ⅴ鑒定為齊墩果酸。

3 討論

本文對(duì)裸花紫珠葉的水提取物的氯仿萃取部分經(jīng)各種色譜手段（硅膠吸附柱色譜和Sephadex LH-20柱色譜等）分離得到了5個(gè)化合物，通過(guò)對(duì)其波普數(shù)據(jù)的分析以及與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對(duì)照，分別鑒定為：7α-Hydroxysandaracopimaric acid（Ⅰ）、香草醛（Ⅱ）、5，4′-二羥基-3，7，3′-三甲氧基黃酮（Ⅲ）、5-羥基-3，7，3′，4′-四甲氧基黃酮（Ⅳ）、齊墩果酸（Ⅴ）。化合物Ⅱ?yàn)槭状螐脑撝参镏蟹蛛x得到。此外，本文中分離得到的化合物 5，4′-二羥基-3，7，3′-三甲氧基黃酮 （Ⅲ） 和 5-羥基-3，7，3′，4′-四甲氧基黃酮（Ⅳ），在筆者先前的研究中從乙酸乙酯萃取部位也曾分離得到且含量較大，表明該兩種化合物在乙酸乙酯萃取部位和氯仿萃取部位中均為主要化合物。

裸花紫珠葉具有抗菌止血，消炎解毒，散瘀消腫的功能，其成藥裸花紫珠片是海南省著名的黎藥品種之一，對(duì)細(xì)菌感染引起的炎癥、急性傳染性肝炎、呼吸道及消化道出血等具有確切的療效[1-3]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)裸花紫珠化學(xué)成分研究的報(bào)道較少，其抗炎和止血藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。梁繼軍等[13]曾報(bào)道，不同劑量的裸花紫珠總黃酮具有良好的抗炎和止血作用，因此，筆者將繼續(xù)對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行藥理活性篩選以確定其主要活性成分。

[1]中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物資源開(kāi)發(fā)研究所，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，北京醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，等.中藥志[M].5冊(cè).北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：147.

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