固腎合劑含量測(cè)定方法的驗(yàn)證

王淡娜，朱小帆，吳 烜，李順濃

（1.廣東眾生藥業(yè)股份有限公司 ，廣東 東莞 523325；2.廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，廣東 東莞 523325）

固腎合劑是遵循古代名醫(yī)張景岳“人到中年當(dāng)大修”指導(dǎo)思想研制的保健治療藥，由補(bǔ)腎良藥左歸丸、五子衍宗丸和龜齡集（龜齡——取龜長(zhǎng)壽之意）精選淫羊藿、人參、鹿茸、海馬、熟地黃、肉蓯蓉、鎖陽(yáng)等組成。本品溫腎助陽(yáng)，固腎滋陰，適用于腎虛所致的精神不振，腰背酸痛，脛酸膝軟，畏寒肢冷，夜尿增多。本研究根據(jù)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理的有關(guān)規(guī)定，參照藥品標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則［1］，對(duì)“中藥中的偉哥”［2］——淫羊藿中淫羊藿苷含量的測(cè)定做了方法學(xué)驗(yàn)證。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UltiMate－3000液相色譜儀（德國(guó)戴安）；800離心機(jī)（常州國(guó)華電器有限公司）；AUW120D電子天平（日本島津）。

1.2 試藥

甲醇（色譜純）、乙醇為分析純；純化水；淫羊藿苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；固腎合劑由廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為C18（SMA，4.6mm×250mm，5μm）。流動(dòng)相為：甲醇－水（65∶35），流速1mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，理論板數(shù)按淫羊藿苷計(jì)算不低于6000［3］。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取淫羊藿苷對(duì)照品13.44mg，置20mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成672μg／mL的溶液；精密吸取0.5 mL、1mL、3mL、5m、7mL分別置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖 勻，制 成 每 1mL 中 含 33.6μg、67.2μg、210.6μg、336μg、470.4μg和原有的672μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品的制備

取樣品適量，搖勻，精密量取10mL，置25mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液，即得。

2.2.3 陰性供試品溶液的制備

取處方中除去淫羊藿的藥材制成的樣品，按供試品溶液的制備即得。

2.3 色譜圖的測(cè)繪及陰性干擾試驗(yàn)

分別精密量取上述對(duì)照品溶液（33.6μg／mL）、供試品溶液和陰性供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，色譜見(jiàn)圖1、圖2、圖3。在對(duì)照品色譜峰相應(yīng)位置，供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性供試品溶液在對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處無(wú)吸收峰，證明陰性供試品對(duì)本含量測(cè)定無(wú)影響。

圖1 淫羊藿苷對(duì)照品色譜

圖2 淫羊藿陰性色譜

圖3 固腎合劑供試品色譜

2.4 線性關(guān)系考察

取精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品溶液20μL，依次進(jìn)樣分析，計(jì)錄色譜圖，以進(jìn)樣濃樣為自變量（X），淫羊藿苷峰面積為因變量（Y）進(jìn)行最小二乘法線性回歸方程。得回歸方程：Y ＝300387.31X＋976.63，r＝0.9996。結(jié)果表明，淫羊藿苷濃度在33.6～672μg／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度考察

用同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定，峰面積的RSD為0.2%。結(jié)果表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

按擬定的含量測(cè)定法對(duì)同一個(gè)樣品測(cè)定5次，測(cè)定結(jié)果為：3.69mg／支 、3.73mg／支、3.76mg／支、3.73mg／支、3.68mg／支，RSD為0.89%。結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于0、2、4、6h進(jìn)樣測(cè)定，峰面積的RSD為0.35%，表明供試品溶液在6h內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密吸取3.72mg／支供試品10mL，置25mL量瓶中，精密加入淫羊藿苷對(duì)照品約4mg，加乙醇至刻度，振搖，離心，取上清液，依次進(jìn)樣分析計(jì)算，結(jié)果回收率的平均值為97.2%，RSD為1.6%。詳見(jiàn)表1。

表1 回收試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定結(jié)果

取供試品照“2.2.2”制備，進(jìn)樣分析計(jì)算，結(jié)果分別為3.72mg／支、3.63mg／支、4.47mg／支、5.36mg／支和4.21mg／支。含量指標(biāo)（不得少于1.0mg／支）符合規(guī)定。

3 討論

固腎合劑按法定標(biāo)準(zhǔn)的處方工藝生產(chǎn)，按GMP要求控制質(zhì)量，質(zhì)量指標(biāo)有外觀性狀、專(zhuān)屬的薄層鑒別、裝差異、微生物檢查和含量測(cè)定。含量測(cè)定采用了現(xiàn)代科學(xué)儀器和高新技術(shù)液相色譜法，方法學(xué)考察淫羊藿苷濃度與峰面積呈線性關(guān)系，精密度、穩(wěn)定性、回收率均符合要求，陰性試驗(yàn)無(wú)干擾，證明本法準(zhǔn)確可靠，可作為含量測(cè)定控制產(chǎn)品質(zhì)量。

淫羊藿苷是淫羊藿藥材中主要的有效成分，具有雄性激素樣作用［4］。據(jù)說(shuō)嘉慶皇帝服了龜齡集，身體強(qiáng)健，連續(xù)生了九個(gè)兒子［5］。乾隆皇帝活至89歲，望之如60許人，精神矍鑠，健康長(zhǎng)壽的秘訣之一是常服龜齡集［6］。固腎合劑與龜齡集的組成、功效類(lèi)同，如果您不了解固腎合劑，懂得龜齡集就明白固腎合劑。固腎合劑的處方含淫羊藿、鹿茸、海馬、人參、巴戟天、五味子、肉蓯蓉、補(bǔ)骨脂、鎖陽(yáng)等，都是傳統(tǒng)經(jīng)典的補(bǔ)益藥，制成口服液服用方便，是腎虛及中老年的保健治療良藥。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［M］.二部附錄.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］王惟恒，胡順強(qiáng)，強(qiáng)剛.家庭中醫(yī)藥1000問(wèn)［M］.合肥：安徽科學(xué)技術(shù)出版社，2006：132.

［3］張虹，湯金城.208種中藥功效及新用［M］.鄭州：中原農(nóng)民出版社，2009：350.

［4］常宇，李曼荻.中醫(yī)是本故事書(shū)［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2009：286.

［5］楊曉光，趙春媛.中醫(yī)中藥軼事珍聞［M］.北京：人民軍醫(yī)岀版社，2007：66.