蛹蟲草與冬蟲夏草的含量測定研究

， ，麗麗

(1.白求恩醫(yī)科大學(xué)制藥廠，吉林 長春 130021；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117)

冬蟲夏草為麥角菌科真菌冬蟲夏草Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.寄生在鱗翅目蝙蝠蛾科昆蟲蝙蝠蛾幼蟲上的子座及幼蟲尸體的復(fù)合體[1]。蛹蟲草Cordyceps militaris(L.ex Fr.)Link生于半埋伏于林地土壤中的鱗翅目昆蟲的死蛹上[2]，又名北冬蟲夏草、北蟲草、蛹草。主要成分為多糖、蟲草素、蟲草酸等，富含人體必需的多種氨基酸和微量元素,世界各地分布廣泛,我國的吉林、河北、四川、湖南、湖北、山西等省均有生長。目前蛹草商品主要是人工培養(yǎng)品。蛹蟲草與冬蟲夏草相比，無論是在化學(xué)成分還是在藥效上兩者都有許多相似之處。在某些方面蛹蟲草已經(jīng)成為冬蟲夏草的主要代用品。

1 材料與儀器

1.1 材料 冬蟲夏草(購于吉林宏檢大藥房)；蛹蟲草(人工培養(yǎng)品，產(chǎn)地為吉林)。

1.2 儀器及試藥 101-1A型數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海瀘南科學(xué)儀器聯(lián)營廠);超聲波清洗器AS3120A(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；AB1235-S型電子天平；TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。無水葡萄糖：中國藥品生物制品檢驗(yàn)所提供；鹽酸、氫氧化鈉、水合氯醛等均為分析純(北京化工廠生產(chǎn))。

2 含量測定[3-5]

2.1 顯示劑與測定波長的選擇 3、5-二硝基水楊酸法，選擇顯色劑為3、5-二硝基水楊酸試液。葡萄糖顯色后在525 nm處紫外掃描譜吸收較大，吸收度較為穩(wěn)定，故選擇525 nm為其測定波長。

2.2 對照品溶液的制備 取于105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品約100 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液制備 總糖供試液的制備取本品粉末約0.5 g，精密稱定，置磨口錐形瓶中，精密加入水25 mL，加蓋，水浴30 min，取出，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL置25 mL量瓶中，加8 mL 6N鹽酸溶液，沸水浴30 min，取出，冷卻后用20% NaOH調(diào)pH至7，放冷，定容至刻度，搖勻即得。還原糖供試液的制備精密量取供試品溶液制備項(xiàng)下的續(xù)濾液5 mL，置10 mL量瓶中，加水定容至刻度，搖勻即得。

2.4 測定法 精密量取總糖和還原糖供試液各1 mL，分別置25 mL量瓶中,分別加入1 mL水和1.5 mL 3、5-二硝基水楊酸試液(DNS),照標(biāo)準(zhǔn)曲線方法，測定吸收度，據(jù)稀釋倍數(shù)分別計(jì)算總糖和還原糖的量，以總糖的量減去還原糖的量即為多糖的量。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系的考察 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mL分別置于25 mL量瓶中，加水至2.0 mL，分別精密加入3、5-二硝基水楊酸試液(DNS)1.5 mL，混勻，沸水浴5 min,取出，立即冷卻至室溫，加水定容至刻度，搖勻，以2.0 mL水顯色后的溶液做空白,照分光光度法，在525 nm的波長處測定吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果

以吸收度為縱坐標(biāo)，以取樣量為橫坐標(biāo)(mg)，得回歸方程：Y=0.715 2X-0.035 9，r=0.999 2，線性范圍在0.300 06～0.900 18之間。

2.5.2 精密度實(shí)驗(yàn) 取蛹蟲草總糖供試液，照測定法重復(fù)測定吸光度6次,結(jié)果見表2。

表2 精密度實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果

表2結(jié)果表明儀器具有良好的精密度。

2.5.4 回收率實(shí)驗(yàn) 采用加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，取已知含量蛹蟲草樣品6分，每分0.5 g，精密稱定，據(jù)供試液制備方法得續(xù)濾液，精密量取續(xù)濾液2.5 mL于25 mL量瓶中，精密加入對照品溶液5 mL(1.000 2 mg/mL)，依法測定總糖供試液吸收度；精密量取續(xù)濾液2.5 mL置10 mL量瓶中，依法測定還原糖供試液吸收度，計(jì)算回收率，結(jié)果回收率RSD=1.4%，<2%，說明該方法測定蟲草多糖含量穩(wěn)定可靠。

2.5.5 樣品依法測定 結(jié)果見表3。

表3 樣品多糖含量測定結(jié)果

3 小結(jié)

利用紫外分光光度法測定蟲草主要成分多糖含量，冬蟲夏草及蛹蟲草多糖含量分別為32.37%及6.32%，冬蟲夏草多糖含量較高。

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