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    胃樂(lè)新顆粒中多糖的含量測(cè)定

    2011-04-25 09:31:20,,
    關(guān)鍵詞:清液無(wú)水乙醇回歸方程

    ,,

    (1.白求恩醫(yī)科大學(xué)制藥廠,吉林 長(zhǎng)春 130021;2.吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,吉林 長(zhǎng)春 130021)

    胃樂(lè)新顆粒是采用長(zhǎng)白山珍貴野生資源小刺猴頭菌經(jīng)深層發(fā)酵、培養(yǎng)、提取其有效成分制成的沖劑。猴頭多糖是猴頭菌中的主要活性成分,有保護(hù)胃黏膜,抗腫瘤作用,其含量在一定程度上反映了胃樂(lè)新顆粒的質(zhì)量,特建立了測(cè)定胃樂(lè)新顆粒中多糖含量的方法[1-3]。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(UV-2450島津公司),低速自動(dòng)離心機(jī)(LDZ5-2北京醫(yī)用離心機(jī)廠),電子分析天平(AB104-N梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

    1.2 試藥 D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):110833-200503);胃樂(lè)新顆粒(白求恩醫(yī)科大學(xué)制藥廠,批號(hào):100326;100415;100538;100607);蒽酮溶液:取蒽酮0.2 g,加硫酸溶解并稀釋至100 mL。此試劑應(yīng)臨用新制。其他試劑均為分析純。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品10 mg,置100 mL量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,搖勻,既得0.1 mg/mL對(duì)照品溶液。

    2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液0.0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mL,各加水至2.0 mL,分別加入預(yù)先用冷水冷卻的蒽酮溶液4 mL,混勻,置沸水浴中加熱6 min,迅速冷卻至室溫,約20 min時(shí),照分光光度法,在625 nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度,以測(cè)得吸收度與其對(duì)應(yīng)的濃度,計(jì)算回歸方程。回歸方程為:Y=8.245 21X-0.006 38。結(jié)果表明:葡萄糖溶液1.7~15.0 μg/mL與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

    2.3 供試品溶液的制備 精密稱取供試品2.5 g,溶于10 mL水中,時(shí)時(shí)振搖浸漬30 min,濾過(guò),作為儲(chǔ)備液。精密量取儲(chǔ)備液1 mL,置10 mL離心管中,分4次加入無(wú)水乙醇,每次1 mL并搖勻,靜置5 min,4 000 r/min離心10 min,傾去上清液;沉淀加水0.2 mL振搖溶解,再分2次加入無(wú)水乙醇,每次1 mL,同法重復(fù)操作,離心,傾去上清液,沉淀加95%乙醇5 mL,振搖使成混懸液,離心,傾去上清液;沉淀再加無(wú)水乙醇5 mL,同法洗滌1次。取沉淀,用水溶解并稀釋至50 mL為供試品溶液。

    2.4 測(cè)定法 精密吸取供試品2.0 mL,照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下自“加入預(yù)先用冷水冷卻的蒽酮溶液4 mL起”依法操作,由回歸方程計(jì)算多糖含量。

    2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液0.5 mL,加水至2.0 mL,加入預(yù)先用冷水冷卻的蒽酮溶液4 mL,混勻,置沸水浴中加熱6 min,迅速冷卻至室溫,約20 min時(shí)測(cè)定吸收度。平行6分,以純化水2 mL加相應(yīng)的試劑做空白,計(jì)算其RSD為1.89%,表明儀器的精密度良好。

    2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品(批號(hào):100326)新制得的供試品溶液2.0 mL,加入預(yù)先用冰水冷卻的蒽酮溶液4 mL,混勻,置沸水浴中加熱6 min,迅速冷卻至室溫,以純化水2 mL加相應(yīng)的試劑做空白,在0、2、4、8、16、24 h時(shí)測(cè)定吸光度。計(jì)算其RSD為1.56%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品(批號(hào):100326)6分,每分各2.5 g,精密稱定,按“2.3”項(xiàng)下方法制備溶液,測(cè)定。計(jì)算RSD為2.05%,表明重復(fù)性良好。

    2.8 回收率試驗(yàn) 精密吸取1 mL已知含量的供試品溶液6分,每2分分別精密加入0.2、0.4、0.6 mL的葡萄糖對(duì)照品溶液(0.1 mg/mL),照“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定其吸收度,并計(jì)算含量,結(jié)果見(jiàn)表1。

    表1 加樣回收率測(cè)定結(jié)果

    2.9 樣品測(cè)定 取4批樣品,按上述供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,測(cè)定吸收度,并計(jì)算其多糖含量,結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 硫酸-蒽酮法測(cè)定胃樂(lè)新顆粒多糖的含量結(jié)果

    3 小結(jié)

    3.1 制備供試品溶液的過(guò)程中,分4次加入無(wú)水乙醇,每次1 mL,比1次加入4 mL無(wú)水乙醇對(duì)供試品的溶解性要好[4]。

    3.2 蒽酮溶液加得快慢不同,相當(dāng)于在不同的溫度顯色,因此加入的速度應(yīng)一致[5]。

    3.3 因硫酸黏度高易產(chǎn)生氣泡影響吸收度,建議加熱顯色后趁熱充分振搖,一旦冰浴冷卻后不要再搖。

    [1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑[S].第11冊(cè),WS3-B-2182-96.

    [2]徐增香,師健友.天南星中多糖的測(cè)定[J].華西藥學(xué)雜志,2010,25(2):208-209.

    [3]鐘方曉,任海華,李巖.多糖含量測(cè)定方法比較[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2007(8):218-219.

    [4]楊瑞瑞,李國(guó)華,樊寶娟.靈芝多糖的含量測(cè)定方法探討及改進(jìn)[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,32(5):223-224.

    [5]許樂(lè)文,周林彬.胃樂(lè)新片中多糖的含量測(cè)定[J].中南藥學(xué),2006,4(4):294-296.

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