抗風(fēng)濕類中成藥中非法加入尼美舒利的檢測(cè)

李存金，郭飛宇

(1.江西省宜春市藥品檢驗(yàn)所，江西 宜春 336000; 2.宜春職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江西 宜春 336000)

抗風(fēng)濕類中成藥中非法添加的化學(xué)物質(zhì)主要有兩類:一類為抗炎、鎮(zhèn)痛類西藥，有雙氯芬酸鈉、吲哚美辛、布洛芬、吡羅西康、氨基比林等;另一類為激素類西藥，如醋酸強(qiáng)的松、磷酸地塞米松、強(qiáng)的松等[1]。尼美舒利抗炎效果顯著，解熱鎮(zhèn)痛效力強(qiáng)，其不良反應(yīng)國(guó)內(nèi)報(bào)道不多，但國(guó)外報(bào)道其有極高的致嚴(yán)重肝損害風(fēng)險(xiǎn)。臨床應(yīng)用也應(yīng)注意肝功不全患者禁用、避免與有肝損害的藥物聯(lián)合應(yīng)用，且長(zhǎng)期應(yīng)用者定期檢查肝功能，一旦發(fā)現(xiàn)肝功能改變應(yīng)及時(shí)停藥[2]。因此，尼美舒利的應(yīng)用需要臨床醫(yī)生的指導(dǎo)?；颊叻梅欠ㄌ砑恿四崦朗胬闹谐伤幒?，短期內(nèi)癥狀雖可緩解，但長(zhǎng)遠(yuǎn)看會(huì)對(duì)身體造成傷害[3-6]。為有效查處、打擊此類假藥的生產(chǎn)及銷售，筆者參考文獻(xiàn)[7-9]，用高效液相色譜(HPLC)法檢測(cè)了抗風(fēng)濕類中成藥中非法添加的化學(xué)物質(zhì)尼美舒利，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀，Waters 1525型高效液相色譜儀，SK250LHC型超聲波清洗器，普析通用TU1901型紫外分光光度計(jì)。尼美舒利對(duì)照品(批號(hào)為100555-200501，中國(guó)藥品生物制品檢定所);水(二次重蒸餾水)，甲醇(色譜純)，其他試劑(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μ m);流動(dòng)相:0.004 mol/L磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)pH至4.0)-甲醇(45∶55);檢測(cè)波長(zhǎng):298 nm;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

精取尼美舒利對(duì)照品適量，加甲醇超聲溶解并稀釋成0.5mg/mL的對(duì)照品貯備液，精取貯備液10 mL，置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。若供試品為片劑、丸劑、顆粒劑，研細(xì)，稱取一次最大服用劑量，置具塞錐形瓶中，加入約20 mL甲醇超聲處理10 min，放冷至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10 mL，置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過;若供試品為膠囊劑，取一次最大服用劑量?jī)?nèi)容物，研細(xì)，置具塞錐形瓶中，加入約20 mL甲醇超聲處理10 min，放冷至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5 mL，置25 mL量瓶中，膠囊殼[9]用熱水(70～80℃)10 mL溶解，用20 mL氯仿萃取，萃取液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，并入上述25 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過;若供試品為口服液[10]，量取5 mL，置25 mL量瓶中，加入約15 mL甲醇超聲處理10 min，待溫度與室溫平衡后，用乙腈定容至刻度，超聲混勻，置冰箱中冷藏過夜。濾過后取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:取質(zhì)量濃度為1.000 4 mg/mL的對(duì)照品貯備液 1，2，3，4，5，6 mL，置 10 mL 量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精取10 μL注入高效液相色譜儀測(cè)定，以質(zhì)量濃度為對(duì)峰面積進(jìn)行回歸，得線性回歸方程為 Y=14.866 98X+9.486 73，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，尼美舒利質(zhì)量濃度在 100.04～600.24 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定。結(jié)果峰面積的 RSD小于0.1%(n=6)，表明方法精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一供試品6份，依法制備供試品溶液并測(cè)定峰面積。結(jié)果平均含量為3.2%，RSD=0.2%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，依法于 0，0.5，1.0，3.0，5.0，24.0 h時(shí)分別進(jìn)樣。結(jié)果峰面積的 RSD為1.2%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

空白干擾試驗(yàn):共測(cè)定了5種劑型20批次抗風(fēng)濕類中成藥樣品。取樣品，依法制備供試品溶液，注入液相色譜儀。結(jié)果在對(duì)照品溶液成分色譜峰相應(yīng)位置上，無其他色譜峰出現(xiàn)(圖1)，證明該色譜條件下，各樣品雜質(zhì)干擾小。

最低檢測(cè)限確定:在 S/N=3時(shí)，尼美舒利的最低檢測(cè)限為0.6 ng。

圖1 高效液相色譜圖

加樣回收試驗(yàn):精密稱取陰性樣品適量，精密加入尼美舒利對(duì)照品10 mg，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 尼美舒利加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

精密稱取樣品適量，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

考察了不同比例(55 ∶45，50 ∶55，60 ∶40)的甲醇-0.004 mol/L磷酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH至4.0)作為流動(dòng)相。結(jié)果表明，在選定的3種流動(dòng)相比例適當(dāng)變動(dòng)的情況下，雜質(zhì)成分仍能很好地分離，理論板數(shù)均不小于4 000。比較了本試驗(yàn)用流動(dòng)相中0.004 mol/L磷酸二氫鉀溶液的pH(3.9，4.0及4.1)，結(jié)果pH在4.0或微小的變動(dòng)時(shí)，雜質(zhì)成分仍能很好地分離，理論板數(shù)均不少于4 000。

曾用不同品牌色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Symmetry C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Hypersil ODS2柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)均能取得滿意的分離效果與理論板數(shù)。

取尼美舒利對(duì)照品適量，加甲醇超聲溶解并用流動(dòng)相稀釋成750 μg/mL的待測(cè)溶液。照紫外分光光度法在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。綜合考慮尼美舒利的吸收波長(zhǎng)范圍，結(jié)合中成藥和保健品成分復(fù)雜等情況，本試驗(yàn)選298 nm為分析波長(zhǎng)。

取本品陽(yáng)性樣品，分別超聲處理5，10，15 min，結(jié)果超聲處理10min即可將尼美舒利基本提取完全，故本試驗(yàn)采用超聲處理10min。

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