HPLC法測定胃痛平糖漿中原阿片堿

吳愛軍 汝秋明

胃痛平糖漿是以白屈菜為君藥的制劑，具有緩解止痛、止咳的療效;用于慢性胃炎，胃潰瘍，十二指腸潰瘍，胃腸痙攣引起的疼痛及百日咳，支氣管炎等。本實驗采用HPLC法對胃痛平糖漿中原阿片堿建立了測定方法，為完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

日本島津LC-2010 hT全自動高效相色譜儀，原阿片堿對照品(由中國藥品生物制品檢驗所提供)批號：110853-200402，規(guī)格：20 mg，供含量測定用。乙腈為色譜純，水為純化水，其他為分析醇。

2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜條件：色譜柱為迪馬C18(4.6×250 mm，5 μm);流動相：乙腈-三乙胺醋酸溶液(取三乙胺1 ml，冰乙酸3.5 ml加水至1000 ml)(16：84)流速：0.8 ml/min;柱溫：30℃;檢測波長：290 nm。

3 方法與結(jié)果

3.1 對照品溶液的制備 取原阿片堿對照品10 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加1%鹽酸溶液5 ml使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取適量，加甲醇制成每1 ml含60 μg的溶液，即得。見圖1。

圖1 對照品色譜圖

3.2 供試品溶液的制備 精密量取本品2 ml，加水20 ml，用氨水調(diào)至pH 9～10，用乙醚提取4次，30 ml/次，分取乙醚層，用同一份無水硫酸鈉脫水，容器、硫酸鈉用少量乙醚洗滌，合并乙醚液，揮干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移置5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，用0.45 μm濾膜濾過，即得見圖2。

圖2 供試品色譜圖

3.3 陰性對照溶液的制備 按處方(不含白屈菜藥材)比例及生產(chǎn)工藝配制陰性，并用供試品溶液制備方法處理陰性對照溶液。依上述色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果陰性對照色譜在與原阿片堿峰相應(yīng)的保留時間處無干擾峰檢出，從而證明本方法是合理可行的見圖3。

圖3 陰性對照色譜圖

3.4 測定法 分別精密量取對照品溶液供試品溶液及陰性對照注液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。供試品溶液與對照品溶液的保留時間一致。陰性對照無干擾測定。

3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取原阿片堿對照品9.66 mg，置100 ml量瓶中，1%鹽酸溶液5 ml溶解，用甲醇稀釋至刻度，精密量取6 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別精密量取 2、4、6、8、10、12、14、16、18 μl注入液相色譜儀，以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=3190+1612986X、r=0.9999，結(jié)果原阿片堿進(jìn)樣量在0.1159～1.0433 μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

3.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μl，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，測定其色譜峰面積，平均峰面積為940172，RSD=0.3%。

3.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取取供試品溶液，分別在0、8、16、24、32、40、48、56 h 測定原阿片堿峰面積，平均峰面積為828443，RSD=0.7%。

3.8 重復(fù)性試驗 取批號20061003供試品6份，分別按供試品溶液制備方法處理并測定，計算得原阿片堿含量(mg/ml)分別為 0.1388、0.1428、0.1418、0.1405、0.1405、0.1406，平均含量0.1408，RSD=1.0%。

3.9 加樣回收試驗 精密量取已知含量的供試品(批號為20061003，含量為0.1408 mg/ml)1 ml，共6份，分別精密加入原阿片堿對照品溶液(0.0483 mg/ml)3 ml，加水20 ml，按供試品溶液制備方法處理并測定，計算回收率，測得原阿片堿的平均回收率為99.4%，RSD=1.0% 結(jié)果見表1。

3.10 樣品測定結(jié)果 取三批樣品按供試品溶液制備方法處理并測定，結(jié)果見表2。

表1 回收率試驗結(jié)果

表2 三批樣品中原阿片堿含量測定結(jié)果

4 討論

4.1 測定波長的選擇 取原阿片堿對照品的甲醇溶液，經(jīng)UV-2201紫外-可見分光光度計在200～350 nm范圍內(nèi)掃描，原阿片堿在290 nm和241 nm波長處有最大吸收，考慮290 nm波長處干擾較小，故選擇290 nm為本試驗的測定波長。

4.2 流動相的選擇 參考文獻(xiàn)［1］，通過試驗選擇乙腈-三乙胺醋酸溶液(取三乙胺1 ml，冰乙酸3.5 ml加水至1000 ml)(16：84)為流動相，此流動相的分離效果好，出峰較快，故選擇此為流動相。

4.3 提取方法的考察 曾試驗加大取樣量，溶液乳化非常嚴(yán)重，不易分層;而減少取樣量后，再用乙醚提取，溶液不乳化且分層較快，重現(xiàn)性好，故采取此方法。

［1］顧孝紅.反相高效液相色譜法測定夏無天中原阿片堿的含量.時珍國醫(yī)國藥，200213(10)：608 ～609.