• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    沙苑子及其炮制品中沙苑子苷A和鼠李檸檬素的含量測(cè)定研究

    2010-07-25 10:27:12孫建中賈天柱
    中成藥 2010年8期
    關(guān)鍵詞:沙苑子目篩量瓶

    孫建中, 張 懷, 賈天柱*, 張 希

    (1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué),2.遼寧省中藥炮制工程技術(shù)研究中心,遼寧大連116600;3.威海市中醫(yī)院,山東威海264200)

    沙苑子為豆科植物扁莖黃芪Astragalus complanatus R.Br.的干燥成熟種子[1]。具有溫補(bǔ)肝腎、固精、縮尿、益肝明目的功能。沙苑子的炮制工藝具有悠久的歷史,鹽炙法是沙苑子最常用的炮制方法?,F(xiàn)代研究表明,本品所含化學(xué)成分主要有氨基酸、黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)、脂肪酸以及微量元素等[2]。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)[3]記載,沙苑子苷A是沙苑子中主要的生物活性成分之一,具有保護(hù)肝細(xì)胞、抑制肝纖維化形成的作用;鼠李檸檬素對(duì)體外部分腫瘤細(xì)胞有直接抑制作用,而且都隨著濃度的增加,抑制作用增強(qiáng)[4]。目前還尚未見(jiàn)有同時(shí)測(cè)定沙苑子苷A和鼠李檸檬素的HPLC含量測(cè)定的報(bào)道。

    本實(shí)驗(yàn)以沙苑子苷A和鼠李檸檬素為對(duì)照品,建立了其含量測(cè)定方法,同時(shí)考察了沙苑子炮制前后沙苑子苷A和鼠李檸檬素的變化情況,為沙苑子的炮制研究提供依據(jù)。

    1 儀器與試藥

    Agilent 1100 series高效液相色譜儀(包括G1314 VWD檢測(cè)器、G1379A真空脫氣機(jī)、G1311A四元泵);LG燒烤型微波爐[S/NO303TA722082,型號(hào):WP700(MG-50037),產(chǎn)品號(hào):MG-5003TW,額定電壓:220 V-50 HZ,輸出功率:700W,微波輸出功率:1050W,燒烤輸出功率:950W,震蕩頻率:2450 MHZ];METTLER AE240型十萬(wàn)分之一分析天平(瑞士METTLER);FA1004B電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司);101型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京市永光明醫(yī)療儀器廠(chǎng));KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);乙腈為色譜純,水為超純水。

    沙苑子苷 A[5]、鼠李檸檬素對(duì)照品(自制,HPLC檢測(cè)純度>99.0%,歸一化法);沙苑子購(gòu)于安徽瀘譙中藥飲片廠(chǎng),經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院鑒定教研室翟延君教授鑒定為豆科植物扁莖黃芪(Astragalus complanatus R.Br.)的干燥成熟種子。

    2 溶液制備

    2.1 沙苑子及鹽沙苑子的炮制 經(jīng)初步篩選,確定沙苑子及鹽沙苑子炮制工藝如下:

    A生品:取凈沙苑子50 g,粉碎,過(guò)60目篩,備用。

    B清炒品:取凈沙苑子50 g,置炒鍋中,鍋底溫度120~130℃,炒制60 s,放涼,粉碎,過(guò)60目篩,備用。

    C清水悶潤(rùn)炒干品:取凈沙苑子50 g,加入20 mL清水至密閉容器內(nèi),悶潤(rùn)2 h,置炒鍋中,鍋底溫度120~130℃,炒制60 s,放涼,粉碎,過(guò)60目篩,備用。

    D鹽水悶潤(rùn)炒干品:取凈沙苑子50 g,加入20 mL鹽水(含2%鹽)至密閉容器內(nèi),悶潤(rùn)2 h,置炒鍋中,鍋底溫度120~130℃,炒制60 s,放涼,粉碎,過(guò)60目篩,備用。

    E鹽水悶潤(rùn)烘干品:取凈沙苑子50 g,加入20 mL鹽水(含2%鹽)至密閉容器內(nèi),悶潤(rùn)2 h,置于烘箱內(nèi),溫度為60℃,烘干,4 h后取出,放涼,粉碎,過(guò)60目篩,備用。

    F鹽水悶潤(rùn)蒸后烘干品:取凈沙苑子50 g,加入20 mL鹽水(含2%鹽)至密閉容器內(nèi),悶潤(rùn)2 h,取出,置于蒸鍋中,圓氣后蒸60 min后取出,置于烘箱內(nèi),溫度為60℃,烘干,4 h后取出,放涼,粉碎,過(guò)60目篩,備用。

    G鹽水悶潤(rùn)蒸后炒干品:取凈沙苑子50 g,加入20 mL鹽水(含2%鹽)至密閉容器內(nèi),悶潤(rùn)2 h,取出,置于蒸鍋中,圓氣后蒸60 min后取出,置于炒鍋內(nèi),在鍋底溫度120~130℃下炒制60 s后取出,放涼,粉碎,過(guò)60目篩,備用。

    H鹽水悶潤(rùn)后微波品:取凈沙苑子50 g,加入20 mL鹽水(含2%鹽)至密閉容器內(nèi),悶潤(rùn)2 h,取藥置于微波爐內(nèi),高火微波6 min后取出,放涼,粉碎,過(guò)60目篩,備用。

    2.2 對(duì)照品溶液的制備 取沙苑子苷A對(duì)照品0.00395 g,精密稱(chēng)定,置10 mL量瓶中,加50%乙醇至刻度,從中精密量取1 mL置于50 mL量瓶中配制成每 1 mL 含沙苑子苷 A0.0079 mg[4]的對(duì)照品溶液;另精密稱(chēng)取鼠李檸檬素對(duì)照品0.00413 g,精密稱(chēng)定,置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,從中精密量取1 mL置于50 mL量瓶中配制成每1 mL含鼠李檸檬素0.00826 mg的對(duì)照品溶液。

    2.3 供試品溶液的制備[4]取上述沙苑子生品及炮制品1 g,精密稱(chēng)定,置50 mL三角瓶中,精密加入石油醚(60~90℃)25 mL,密塞,超聲30 min,靜置,濾過(guò),濾紙不棄;同法再次精密加入石油醚(60~90℃)25 mL,密塞,超聲30 min,靜置,用第一次的濾紙過(guò)濾,殘?jiān)鼡]干石油醚;連同濾紙一起放入三角瓶中,精密加入60%乙醇25 mL,密塞,稱(chēng)重,超聲30 min,用60%乙醇補(bǔ)至原重,過(guò)0.45 μm微孔濾膜,取續(xù)濾液,即得。

    3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

    色譜柱為 Agilent C18(150 mm ×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相:乙腈-0.2%磷酸溶液(采用梯度洗脫的方式:0~12 min,20% ~24%乙腈;12~40 min,24% ~70%乙腈);流速為1.0 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為337 nm;沙苑子苷A和鼠李檸檬素的保留時(shí)間分別在10 min和30 min左右,且沙苑子苷A和鼠李檸檬素與相鄰成分色譜峰的分離度都在1.5以上,理論塔板數(shù)均大于4000。

    分別精密吸取沙苑子苷A對(duì)照品溶液、鼠李檸檬素對(duì)照品溶液與供試品溶液20 μL注入液相色譜儀,依上述色譜條件,測(cè)定,即得。HPLC圖見(jiàn)圖1。

    4 線(xiàn)性關(guān)系考察

    圖1 對(duì)照品(A)及沙苑子供試品(B)的HPLC圖

    4.1 沙苑子苷A線(xiàn)性關(guān)系的考察 精密稱(chēng)定沙苑子苷A對(duì)照品0.00395 g,置10 mL量瓶中,加50%乙醇至刻度,從中精密量取1 mL置于5 mL量瓶中,加50%乙醇至刻度配制成0.0790 mg/mL沙苑子苷A 的對(duì)照品溶液,分別精密吸取 4、8、12、16、20 μL注入液相色譜儀,按上述色譜條件進(jìn)行分析,測(cè)定峰面積,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。結(jié)果表明沙苑子苷A在0.3160 ~1.580 μg呈線(xiàn)性關(guān)系,其回歸方程為 Y=112.14X+16.04,r=0.9999。

    4.2 鼠李檸檬素線(xiàn)性關(guān)系的考察 精密稱(chēng)定鼠李檸檬素對(duì)照品0.00413 g,置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,從中精密量取1 mL置于10 mL量瓶中,加甲醇至刻度配制成0.0413 mg/mL鼠李檸檬素的對(duì)照品溶液,分別精密吸取 4、8、12、16、20 μL 注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。結(jié)果表明鼠李檸檬素在 0.1652 ~0.8260 μg呈線(xiàn)性關(guān)系,其回歸方程為 Y=99.005X-2.2,r=0.9997。

    5 精密度試驗(yàn)

    精密吸取沙苑子苷A和鼠李檸檬素的對(duì)照品溶液各20 μL連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)定色譜峰面積。結(jié)果顯示沙苑子苷A和鼠李檸檬素的RSD分別為1.2%和 1.4%。

    6 重復(fù)性試驗(yàn)

    精密稱(chēng)取沙苑子粉末1 g(過(guò)60目篩),共6份,按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別精密吸取20 μL注入液相色譜儀,測(cè)定色譜峰面積。結(jié)果顯示沙苑子苷 A和鼠李檸檬素的 RSD分別為0.6%和1.5%,表明本試驗(yàn)測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

    7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

    精密稱(chēng)取沙苑子粉末1 g(過(guò)60目篩),按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別在 2、4、6、8、12 h 精密吸取20 μL注入液相色譜儀,測(cè)定色譜峰面積。結(jié)果顯示沙苑子苷A和鼠李檸檬素的RSD分別為0.9%和1.4%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在12 h內(nèi)供試品溶液化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。

    8 加樣回收率試驗(yàn)

    精密稱(chēng)取已知含量(沙苑子苷A和鼠李檸檬素的含量分別為0.0967%,0.0340%)的同一沙苑子正品藥材10 g,6份,分別精密加入沙苑子苷A對(duì)照品溶液(精密稱(chēng)取沙苑子苷A對(duì)照品11.00 mg,50%乙醇超聲溶解并定容至10 mL,即得)2 mL、鼠李檸檬素溶液(精密稱(chēng)取鼠李檸檬素對(duì)照品12.00 mg,甲醇超聲溶解并定容至10 mL,即得)2 mL,按2.3項(xiàng)下方法制備溶液,進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果平均回收率分別為 99.61%、98.98%;RSD 分別為 0.58%、1.28%。表明本法準(zhǔn)確度符合要求,見(jiàn)表1。

    表1 沙苑子苷A、鼠李檸檬素回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

    9 樣品含量測(cè)定

    取上述沙苑子生品及炮制品粉末各1 g,精密稱(chēng)定,按上述色譜條件測(cè)定沙苑子苷A和鼠李檸檬素的含量,每個(gè)樣品皆平行測(cè)定3次,以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量,其平均值和RSD,結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 沙苑子的含量測(cè)定結(jié)果

    10 討論

    10.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取沙苑子苷A對(duì)照品溶液和鼠李檸檬素對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描,結(jié)果在266 nm及337 nm處均有最大吸收,但在337 nm波長(zhǎng)下,干擾少,重現(xiàn)性好,故選擇337 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

    10.2 流動(dòng)相的選擇 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中分別以乙腈-0.2%磷酸(20∶80)、乙腈-0.4%磷酸 (20∶80)、乙腈-0.2%磷酸(采用梯度洗脫的方式:0~12 min,20% ~24%乙腈;12~40 min,24% ~70%乙腈)為流動(dòng)相進(jìn)行了比較,結(jié)果以乙腈-0.2%磷酸(采用梯度洗脫的方式:0~12 min,20% ~24%乙腈;12~40 min,24% ~70%乙腈)為流動(dòng)相所得峰形較好,分離度高,故選之。

    10.3 方法的選擇 沙苑子種子中含油脂量高,需進(jìn)行脫脂處理,試驗(yàn)中篩選了石油醚(30~60℃)、石油醚(60~90℃)和乙醚3種試劑,結(jié)果發(fā)現(xiàn)用石油醚(60~90℃)超聲處理既有良好的脫脂效果,又能保留目標(biāo)成分。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還對(duì)供試品溶液的其他提取方法進(jìn)行了考察,最終確定了前述提取方法。

    10.4 沙苑子苷A和鼠李檸檬素為苷和苷元的關(guān)系,沙苑子生品中沙苑子苷A的含量遠(yuǎn)高于鼠李檸檬素的含量;炮制品中兩者的含量變化皆不大,其中鹽炙沙苑子中沙苑子苷A和鼠李檸檬素的含量最高,分析其原因主要為在炮制加熱過(guò)程中酶解沙苑子苷A的自生酶被破壞,即“殺酶保苷”原理。而此酶在何種條件下完全失效以保苷以及何種條件下此酶活性最強(qiáng)以利用其苷元的抗腫瘤的作用,有待進(jìn)一步的研究。

    [1]中國(guó)藥典[S].一部.2005:127.

    [2]劉春宇,顧振綸.沙苑子的化學(xué)成分和藥理作用[J].中國(guó)野生植物資源,2002,21(2):1.

    [3]張建軍,閆興麗,張玉杰,等.HPLC測(cè)定沙苑子中沙苑子苷A的含量[J].中國(guó)中藥雜志,2005,30(8):600.

    [4]甄漢深,周燕園,袁葉飛,等.青天葵中黃酮類(lèi)化合物的體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2008,14(3):36.

    [5]Cui Baoliang,Nakamura M,Kinjo J.Chemical Constituents of Astragali Semen[J].Chem Pharm Bull,1993,41(1):178.

    猜你喜歡
    沙苑子目篩量瓶
    補(bǔ)肝益腎沙苑子
    鹽沙苑子標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
    Clinical and prognostic significance of CC chemokine receptor type 8 protein expression in gastrointestinal stromal tumors
    沙苑子總黃酮對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化潛能的影響
    土壤顆粒粒徑及進(jìn)樣量對(duì)TOC含量測(cè)定精度的影響
    高效液相色譜法測(cè)定甲磺酸多沙唑嗪控釋片含量
    山東化工(2018年15期)2018-09-20 08:55:34
    關(guān)于鋁酸鈉漿液細(xì)度分析的探討
    沙苑子不同規(guī)格炮制品中沙苑子苷A的含量比較研究
    不同蕎麥粉粒度及添加量對(duì)蕎麥餅干品質(zhì)的影響
    天丹通絡(luò)膠囊中總黃酮的含量測(cè)定
    宁远县| 绵阳市| 资溪县| 塔城市| 乌鲁木齐县| 洛宁县| 潍坊市| 郁南县| 台湾省| 阳泉市| 乐平市| 新绛县| 丰镇市| 屯昌县| 乌拉特前旗| 宜君县| 拜城县| 广昌县| 永清县| 驻马店市| 昔阳县| 岳阳县| 柳州市| 达日县| 当阳市| 连江县| 大冶市| 潞西市| 威海市| 团风县| 弥勒县| 隆化县| 泉州市| 申扎县| 茌平县| 鹰潭市| 大田县| 都安| 大港区| 博湖县| 申扎县|