HPLC法測(cè)定大豆異黃酮膠囊中金雀異黃素的含量

廣西桂林食品藥品檢驗(yàn)所（541002）黃海燕 鐘建理

參照保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003年版）保健食品中金雀異黃素的測(cè)定，筆者采用HPLC法測(cè)定大豆異黃酮膠囊中金雀異黃素的含量，并進(jìn)行方法學(xué)考察，根據(jù)考察結(jié)果制定了本品的檢驗(yàn)操作規(guī)程，結(jié)果較滿意，現(xiàn)報(bào)告如下：

1 試藥與儀器

金雀異黃素標(biāo)準(zhǔn)品（Genistein）（Lot:90213）購于上海安譜科學(xué)儀器有限公司；甲醇為色譜純，醋酸銨和冰醋酸均為分析純，水為高純水。大豆異黃酮膠囊：天津凱鏞藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。WATERS高效液相色譜儀及EASY3000色譜工作站；超聲波清洗器，離心機(jī)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：phenomenexRC18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.05mol.L-1醋酸銨緩沖液（pH4.6）（46:54）；檢測(cè)波長：260nm[1]；柱溫：35℃；流速：1ml·min-1。

2.2 溶液的配制 精密稱取金雀異黃素對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1ml約含10μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。精密稱取本品內(nèi)容物1g，置100ml量瓶中，加甲醇-水（80:20）50ml，超聲處理30min，放冷，加甲醇-水（80:20）至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得（供試品溶液）。

2.3 測(cè)試方法與結(jié)果

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密稱取金雀異黃素對(duì)照品（含量99.5%）10.21mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取0.1ml，0.5ml，1.0ml，3.0 ml，5.0ml，10.0ml，置20.0ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。按上述色譜條件，進(jìn)樣20μl。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程：Y=8.569×106X+7.986×104;γ=0.9999。表明金雀異黃素在0.02032～2.032 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品（1號(hào)樣品）6份，按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，按色譜條件測(cè)定。結(jié)果平均含量為0.8649mg.g-1。RSD為0.3%（n=6）。檢出限（LOD）按信噪比（S/N）為3計(jì)算，對(duì)照品溶液稀釋至0.01μg . ml-1，進(jìn)樣20μl，本法檢出限為0.01μg.ml-1。定量限（LOQ）按信噪比（S/N）為10計(jì)算，對(duì)照品溶液稀釋至0.027μg.ml-1，進(jìn)樣20μl，本法定量限為0.03μg.ml-1。

2.3.3 回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品（1號(hào)樣品）0.5g置100ml量瓶中，加入0.2032mg.ml-1的金雀異黃素對(duì)照品溶液2ml，加甲醇-水（80:20）50ml，超聲處理30min，放冷，加甲醇-水（80:20）至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液。以上述色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算。測(cè)得平均回收率99.33%，RSD為0.4%（n＝6）。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，自配制后分別在0，1，2，4，8，12，24h測(cè)定峰面積值，結(jié)果峰面積平均值為1548771，RSD為0.6%（n=7），說明供試品溶液在配制后24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 樣品測(cè)定 取樣品，分別按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，測(cè)定。按外標(biāo)法計(jì)算，批號(hào)20090803、20090918含量分別為0.086 g.100g-1、0.107g.100g-1；RSD分別為1.91%、1.80%。

3 討論

3.1 金雀異黃素（Genistein，又稱染料木素）是來源于豆類植物和齒狀植物的異黃酮類化合物，其化學(xué)名為4，5，7-三羥異黃酮，是大豆異黃酮的主要活性成分，為一種天然的植物雌激素，具有防止早期動(dòng)脈粥樣硬化及慢性血管疾病等多種藥理作用及生物活性。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)及流行病學(xué)均顯示，其對(duì)多種腫瘤均有抑制作用[2]。故有必要對(duì)制劑中金雀異黃素行質(zhì)量控制。

3.2實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果表明，應(yīng)用“保健食品中金雀異黃素的測(cè)定”是可行的，樣品提取方法簡(jiǎn)化使其更快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠。