基于形態(tài)和DNA條形碼的小火蟻檢疫鑒定

摘要

小火蟻Wasmannia auropunctata原產(chǎn)于新熱帶地區(qū)，被世界自然保護(hù)聯(lián)盟（International Union for Conservation of Nature，IUCN）列為全球最具威脅的入侵物種之一。2022年，小火蟻在廣東汕頭地區(qū)首次被發(fā)現(xiàn)，成為中國(guó)大陸一種新發(fā)現(xiàn)的重大外來入侵有害生物。為實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確鑒定小火蟻，本研究采用形態(tài)學(xué)方法對(duì)小火蟻標(biāo)本進(jìn)行分析，編譯了沃氏蟻屬Wasmannia 10種工蟻和10種蟻后的檢索表，并利用DNA條形碼技術(shù)對(duì)形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證。本研究為小火蟻的準(zhǔn)確鑒定提供了重要的技術(shù)參考。

關(guān)鍵詞

小火蟻; 形態(tài)特征; DNA條形碼; 鑒定; 入侵種

中圖分類號(hào)：

S 4130

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2024482

Quarantine identification of the little fire ant Wasmannia auropunctata based on morphology and DNA barcoding

HE Xunuo1， HUANG Jiaofen2， HU Shuqing1， LIN Li1， LI Xianfeng1， WEI Shuang1，XU Qiang1， WU Mutao1， LIU Haijun1*

（1. Guangzhou Customs Technology Center， Guangzhou 510623， China; 2. Foshan Customs

Integrated Technology Center， Foshan 528000， China）

Abstract

The little fire ant Wasmannia auropunctata， originally native to the Neotropical region， has been listed by the International Union for Conservation of Nature （IUCN） as one of the world’s most threatening invasive alien species. In 2022， W.auropunctata was detected for the first time in Shantou， Guangdong province， marking its emergence as a newly identified major invasive pest species in China’s mainland. To enable rapid and accurate identification of this species， a morphological method was employed to examine W.auropunctata specimens and dichotomous keys were compiled for workers and queen ants of 10 species within the genus Wasmannia. Additionally， DNA barcoding was subsequently used to verify the morphological identification. This study provides a valuable technical reference for the precise quarantine identification of W.auropunctata.

Key words

Wasmannia auropunctata; morphological identification; DNA barcoding; identification; invasive species

小火蟻Wasmannia auropunctata（Roger， 1863），又稱金刻沃氏蟻、小紅火蟻、電蟻、西印度毒刺蟻、可可樹蟻、光點(diǎn)小火蟻等［12］，隸屬于膜翅目Hymenoptera，蟻科Formicidae，切葉蟻亞科Myrmicinae，沃氏蟻屬Wasmannia Forel，1893。該蟻原產(chǎn)于中南美洲熱帶地區(qū)，可生存于熱帶和亞熱帶的廣大地區(qū)［34］，現(xiàn)已在北美洲、大洋洲、亞洲、非洲的多個(gè)國(guó)家和地區(qū)廣泛分布［1， 59］。小火蟻主要借助人類活動(dòng)特別是跨境貿(mào)易進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播［1011］。2021年，中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)首次報(bào)道發(fā)現(xiàn)小火蟻［2］，2022年，廣東汕頭發(fā)現(xiàn)其自然種群［12］，小火蟻成為我國(guó)新發(fā)重大外來入侵有害生物。

在入侵地，小火蟻可形成種群數(shù)量達(dá)數(shù)百萬頭的多蟻后型超級(jí)蟻群［13］，對(duì)人類社會(huì)和生態(tài)系統(tǒng)構(gòu)成巨大威脅。人類被其蜇咬可引起劇烈疼痛，甚至導(dǎo)致過敏反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)可能引發(fā)休克［1， 1416］。家畜和寵物眼部遭其蜇咬可能導(dǎo)致失明或角膜病變［15， 17］。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，小火蟻與蚧蟲、蚜蟲等半翅目害蟲形成共生關(guān)系，不僅增加了害蟲種群數(shù)量，還可能傳播植物病毒和真菌，間接加重農(nóng)作物病害發(fā)生，影響農(nóng)業(yè)產(chǎn)量［1820］。小火蟻還會(huì)對(duì)生態(tài)系統(tǒng)造成破壞，它通過掠奪食物資源和侵占棲息地，導(dǎo)致本地節(jié)肢動(dòng)物、爬行動(dòng)物和鳥類種群數(shù)量下降，破壞生態(tài)平衡，威脅生物多樣性［2122］。小火蟻具有繁殖能力強(qiáng)、擴(kuò)散速度快、適應(yīng)能力強(qiáng)、生態(tài)危害大等特點(diǎn)［23］，世界自然保護(hù)聯(lián)盟（International Union for Conservation of Nature，IUCN）將其列為全球100種最具威脅的入侵物種之一。

我國(guó)東南、華南及西南的大片區(qū)域均是小火蟻的適生區(qū)，潛在適生區(qū)面積達(dá)195.43萬 km2，涵蓋海南、廣東、廣西、云南、臺(tái)灣等省區(qū)［2425］，為防止小火蟻在我國(guó)進(jìn)一步擴(kuò)散蔓延，及早發(fā)現(xiàn)并準(zhǔn)確鑒定小火蟻顯得尤為重要。本研究旨在通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法提高小火蟻的鑒定準(zhǔn)確性。研究采集了小火蟻的形態(tài)學(xué)特征照片，豐富了其形態(tài)特征圖譜。同時(shí)，利用線粒體COⅠ基因的DNA條形碼技術(shù)對(duì)形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，從而建立一套綜合的小火蟻檢疫鑒定方法。這為小火蟻的預(yù)警監(jiān)測(cè)和口岸檢疫鑒定提供了重要的技術(shù)支持，有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)和準(zhǔn)確鑒定，對(duì)防止其進(jìn)一步擴(kuò)散，保護(hù)我國(guó)生態(tài)環(huán)境安全具有重要意義。

1 材料和方法

1.1 供試蟲樣

本試驗(yàn)所用小火蟻樣品（卵、幼蟲、蛹、工蟻和蟻后）于2022年6月采集自廣東汕頭，所有樣品均浸泡于無水乙醇中，放置在-30℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要儀器和試劑

DVM6超景深數(shù)碼顯微鏡（德國(guó)徠卡公司）、Stemi508體視顯微鏡（德國(guó)卡爾蔡司公司）、PowerCycler SL96 PCR儀（德國(guó)耶拿公司）、ChemiDoc XRS+凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)伯樂公司）、Dneasy血液及組織核酸提取試劑盒（德國(guó)凱杰公司）、高保真Taq酶（日本寶生物工程公司）、無水乙醇等。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 形態(tài)學(xué)鑒定

將待測(cè)蟲樣（卵、幼蟲、蛹、工蟻和蟻后）經(jīng)75%乙醇清洗后，利用Stemi508體視顯微鏡進(jìn)行整體形態(tài)觀察、解剖處理及樣本整姿，然后利用DVM6超景深數(shù)碼顯微鏡對(duì)蟲體關(guān)鍵形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行測(cè)量和拍照，最后結(jié)合文獻(xiàn)資料［3， 2627］依據(jù)工蟻形態(tài)特征進(jìn)行種類鑒定。

1.3.2 分子生物學(xué)鑒定

1.3.2.1 DNA提取和PCR擴(kuò)增

取待測(cè)蟲樣工蟻3頭，按照凱杰公司血液及組織核酸提取試劑盒說明書分別提取單頭工蟻全基因組DNA。PCR擴(kuò)增引物采用線粒體CO Ⅰ基因通用引物，LCO1490：5′GGTCAACAAATCATAAAGAT

ATTGG3′和HCO2198：5′TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA3′［28］。PCR反應(yīng)體系為：去離子水21.8 μL，10×buffer 3 μL，dNTP mixture 2.5 μL，100 μmol/L上、下游引物各1 μL，DNA模板0.5 μL，LA Taq酶0.2 μL，共30 μL。擴(kuò)增程序：94℃ 5 min;94℃變性40 s，50℃退火1 min，72℃延伸40 s，35個(gè)循環(huán);72℃延伸10 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析，將出現(xiàn)目標(biāo)條帶的PCR產(chǎn)物送廣州天一輝遠(yuǎn)生物科技有限公司進(jìn)行雙向測(cè)序。

1.3.2.2 序列分析和鑒定

通過SnapGene 6.0.2軟件修正雙向測(cè)序結(jié)果中出現(xiàn)的異常峰型堿基并剔除兩端引物序列，獲得待測(cè)蟲樣線粒體COⅠ基因序列片段。將試驗(yàn)獲得的核酸序列在NCBI（https：∥www.ncbi.nlm.nih.gov）的GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)和國(guó)際生物基因條形碼網(wǎng)站（www.boldsystems.org）的BOLDSYSTEM數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比對(duì)鑒定。

1.3.2.3 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹

下載NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中與待測(cè)蟲樣序列相似性排名前5的小火蟻COⅠ基因序列（登錄號(hào)為：MF925747.1、KR106300.1、KR106449.1、KR106448.1、KR106355.1），同屬另外2個(gè)近緣種W.rochai（登錄號(hào)為：EF459822.1、EF459824.1、MK767256.1、MK759603.1、EF459823.1）和W.scrobifera（登錄號(hào)為：MK767894.1、MK759135.1、MK769287.1、MK767750.1、MK767711.1），以及草地鋪道蟻Tetramorium caespitum（登錄號(hào)為：MK091886.1、JN294263.1、KT885054.1、MZ607404.1、HQ954639.1）的相應(yīng)序列片段各5條，共20條COⅠ基因序列片段。以草地鋪道蟻?zhàn)鳛橥馊?，用MEGA 11.0.13的Clustal W模型對(duì)所有序列進(jìn)行比對(duì)，剪除相似性較差的堿基區(qū)域后，采用鄰接法（neighborjoining，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（檢驗(yàn)方法選擇Bootstrap，檢驗(yàn)次數(shù)選擇1 000，計(jì)算模型選擇pdistance，空位處理選擇部分刪除，刪除比例設(shè)置為50%，其他參數(shù)為系統(tǒng)默認(rèn)）。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)鑒定結(jié)果

2.1.1 沃氏蟻屬工蟻主要形態(tài)特征

根據(jù)Longino等［26］、Cuezzo等［27］的研究，將沃氏蟻屬工蟻形態(tài)特征歸納總結(jié)如下：小型蟻類，體具立毛。頭部和并腹胸具有發(fā)達(dá)的網(wǎng)狀刻紋。頭長(zhǎng)略大于寬，頭寬大于并腹胸。頭頂緣中部微凹，額頂角鈍圓;復(fù)眼大，側(cè)生，復(fù)眼下緣平坦。上顎咀嚼緣具5齒或更少;須式為3∶2。唇基發(fā)達(dá)，分隔兩額葉。觸角窩被額葉遮蔽，額脊遠(yuǎn)離復(fù)眼（除W.scrobifera）。觸角溝淺窄、未達(dá)頭側(cè)緣，觸角溝上緣呈脊?fàn)盥∑稹Ｓ|角11節(jié)，柄節(jié)長(zhǎng)度不超過頭頂緣，觸角末2節(jié)膨大形成觸角棒。并腹胸肩角明顯，中并胸腹節(jié)縫不明顯，并胸腹節(jié)刺發(fā)達(dá)。前足基節(jié)稍大于中、后足基節(jié)，前足脛節(jié)刺呈梳櫛狀。腹柄節(jié)2節(jié)，前腹柄節(jié)具結(jié)前柄，腹柄結(jié)刻點(diǎn)明顯，側(cè)面觀前腹柄結(jié)高于后腹柄結(jié)，背面觀后腹柄結(jié)寬于前腹柄結(jié)，前腹柄節(jié)具腹柄下突。后腹部橢圓形，具立毛（除W.iheringi），第1節(jié)最長(zhǎng)，超過后腹部長(zhǎng)度的2/3，腹末具螫針。

2.1.2 小火蟻形態(tài)特征

2.1.2.1 工蟻

體長(zhǎng)1.0～1.5 mm。頭部具縱紋（在近后頭緣處交織成網(wǎng)狀），額區(qū)具刻點(diǎn)，覆蓋不規(guī)則橫紋，唇基具數(shù)條淺縱紋（圖1h）;并腹胸具復(fù)雜網(wǎng)狀刻紋和刻點(diǎn)（圖1e），腹柄節(jié)具鱗狀刻點(diǎn)（圖1g），觸角溝內(nèi)具淺刻紋和1條短縱紋（圖1d）。復(fù)眼位于頭兩側(cè)近中部，大而凸出（圖1d）;無單眼。額脊發(fā)達(dá)呈脊?fàn)钛由熘梁箢^緣，形成觸角溝上緣，觸角溝淺而明顯（圖1h）。觸角11節(jié)，柄節(jié)細(xì)長(zhǎng)，未達(dá)后頭緣，鞭節(jié)具豐富的毛狀感受器，觸角棒2節(jié)（圖1c）。唇基前緣弧形，后緣中央深凹（圖1h）。上顎咀嚼緣具5齒（端齒最大，基齒最小），基緣無齒突（圖1i）。前胸背板肩角明顯，無前中胸背板縫（圖1b）。并胸腹節(jié)具1對(duì)直立毛，短于前中胸立毛;并胸腹節(jié)刺長(zhǎng)而尖銳，背面觀略內(nèi)彎（圖1f）;并胸腹節(jié)氣孔圓形，位于刺基下方（圖1a）。腹柄節(jié)2節(jié)，具深棕色塊狀斑。前腹柄結(jié)側(cè)面觀強(qiáng)烈呈矩形（圖1g），高于后腹柄結(jié)，具1～2對(duì)與并胸腹節(jié)長(zhǎng)度相近的立毛;腹柄結(jié)的前、后面均明顯，前面幾乎垂直于結(jié)前柄和背面，呈明顯的階梯狀輪廓（圖1g）;結(jié)前柄與結(jié)近等長(zhǎng)，其腹前緣具短銳刺。后腹柄結(jié)背面觀寬于前腹柄結(jié)（圖1g）。后腹部刻點(diǎn)微弱，各節(jié)散生細(xì)長(zhǎng)彎曲立毛（圖1b）;第1節(jié)背板具近圓形毛基片，均勻分布（圖1f）;腹末螫針發(fā)達(dá)。體淺棕色至褐色，全身具稀疏針狀立毛，后腹部光亮（圖1a）。

2.1.2.2 蟻后

體長(zhǎng) 4.5～5.0 mm，顯著大于工蟻（圖2b）。體色呈棕褐色，顏色深于工蟻，并腹胸發(fā)達(dá)，背面觀，前中胸寬闊，表面密布細(xì)直條狀縱刻紋（圖2d）。頭近三角形，具2個(gè)復(fù)眼及3個(gè)單眼，復(fù)眼大而明顯，在頭近中部側(cè)緣凸出（圖2a）。前腹柄節(jié)結(jié)前柄與結(jié)近等長(zhǎng)（圖2c）。并胸腹節(jié)刺略尖，長(zhǎng)約等于基寬。雌蟻具兩對(duì)翅，產(chǎn)卵后翅折斷脫落，留有殘基（圖2b）。后腹柄結(jié)所占身體比例明顯小于工蟻。后腹部寬橢圓形;第1節(jié)被板無毛基片，近端部2/3深棕色（圖2d）。其余類似工蟻。

2.1.2.3 雄蟻

體長(zhǎng)接近蟻后，并腹胸發(fā)達(dá)（圖3a）。頭小，近圓形，具2個(gè)復(fù)眼及3個(gè)單眼，復(fù)眼大而凸出，在頭部占有較大比例，且顯著大于工蟻和蟻后（圖3c）。觸角13節(jié);柄節(jié)很短，不抵前單眼（圖3c）;鞭節(jié)末端不膨大成觸角棒（圖3b）。觸角溝短、淺，極不明顯（圖3c）。具兩對(duì)翅，無并胸腹節(jié)刺，前腹柄結(jié)不呈矩形（圖3b）。腹末無螫針，而是特化成發(fā)達(dá)的外生殖器，呈細(xì)長(zhǎng)指狀，向腹部彎曲，末端寬約0.05 mm（圖3b）。

2.1.2.4 卵、幼蟲和蛹

卵乳白色，橢圓形，長(zhǎng)約0.18 mm，寬約0.12 mm（圖4a）。幼蟲乳白色，呈蠕蟲狀，腹部微弱分節(jié)，體柔軟，體表具稀疏短毛，無附肢（圖4b）。蛹白色，蛹體通透，離蛹，復(fù)眼紅褐色，形態(tài)似工蟻（圖4c）。

2.1.3 沃氏蟻屬工蟻和蟻后分類檢索表

沃氏蟻屬目前共報(bào)道有11種。Longino等［26］于2007年首次發(fā)表了沃氏蟻屬工蟻（9種，不含W.villosa）和蟻后（10種）的形態(tài)分類檢索表。Cuezzo等［27］于2015發(fā)表了新種W.longiseta，并將工蟻檢索表擴(kuò)充至10種（新增該物種）。本文對(duì)Longino等的蟻后檢索表進(jìn)行了翻譯，工蟻檢索表是在Cuezzo等的基礎(chǔ)上，結(jié)合AntWeb官網(wǎng)（www.antweb.org）相關(guān)資料進(jìn)行了譯校修訂。因W.villosa工蟻、W.longiseta蟻后形態(tài)數(shù)據(jù)缺失，本文工蟻檢索表不含W.villosa，蟻后不含W.longiseta。

2.1.3.1 沃氏蟻屬工蟻分類檢索表

2.2 DNA條形碼鑒定結(jié)果

2.2.1 PCR擴(kuò)增及比對(duì)

以3頭供試?yán)ハx樣品DNA為模板的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)所得產(chǎn)物約為700 bp（圖5）。將雙向測(cè)序后的序列經(jīng)過堿基校對(duì)并剔除上下游引物后獲得658 bp的DNA片段，通過SnapGene比對(duì)分析，3頭供試?yán)ハx堿基序列完全一致（序列已上傳至NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)，登錄號(hào)為：PQ217979）。將測(cè)得的COⅠ基因序列在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST比對(duì)，與登錄號(hào)為MF925747.1的小火蟻樣品［29］序列相似性為99.54%。在國(guó)際生物基因條碼網(wǎng)站（www.boldsystems.org）的BOLDSYSTEM數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果同樣顯示為小火蟻。綜上所述，供試?yán)ハx為小火蟻。

2.2.2 系統(tǒng)進(jìn)化樹分析

系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果表明（圖6），供試?yán)ハx序列與5條小火蟻序列聚為一支，進(jìn)一步說明供試?yán)ハx樣品為小火蟻，同時(shí)這6條序列又與W.rochai和W.scrobifera聚為更大的一支，說明供試?yán)ハx隸屬沃氏蟻屬，上述16條序列和草地鋪道蟻T.caespitum分屬不同的兩個(gè)分支，系統(tǒng)進(jìn)化樹的屬級(jí)分類結(jié)果也和現(xiàn)有分類結(jié)果一致。

3 結(jié)論與討論

沃氏蟻屬是新大陸熱帶地區(qū)的特有屬［26］，該屬主要特征是觸角棒節(jié)2節(jié)，觸角溝明顯、并胸腹節(jié)刺發(fā)達(dá)，頭部有縱刻紋，體表有刻點(diǎn)，無中并胸腹節(jié)縫。與沃氏蟻屬形態(tài)相近的有火蟻屬Solenopsis、重頭蟻屬Carebara、Ochetomyrmex和睫蟻屬Blepharidatta，這些屬和沃氏蟻屬主要的相似特征是觸角棒節(jié)2節(jié)，但其他特征差異巨大，如火蟻屬無并胸腹節(jié)刺和觸角溝［30］，重頭蟻屬無觸角溝、頭部也無刻紋［3132］，Ochetomyrmex屬有明顯的中并胸腹節(jié)縫［3334］，睫蟻屬觸角溝上緣持續(xù)向后延伸并凸出后頭緣［35］，這些特征均與沃氏蟻屬不同，比較容易區(qū)分。鋪道蟻屬與沃氏蟻屬也有一些相似特征，Roger 1863年在古巴首次發(fā)現(xiàn)小火蟻時(shí)甚至將其命名為T.auropunctata［36］，該屬工蟻也具有頭部有縱脊紋、并胸腹節(jié)刺發(fā)達(dá)、觸角末端有膨大的棒節(jié)等特點(diǎn)，特別是雙隆骨鋪道蟻T.bicarinatum甚至具有和小火蟻一樣的矩形前腹柄結(jié)，但是鋪道蟻屬觸角棒節(jié)為3節(jié)，觸角溝更淺、觸角溝上緣脊更短，體表被毛更加豐富，體表刻點(diǎn)更深，體表顏色更深［37］，這些特征也和沃氏蟻屬比較容易區(qū)分。準(zhǔn)確掌握沃氏蟻屬的形態(tài)特征可以很容易地將其和其他屬的蟻類進(jìn)行區(qū)分。

沃氏蟻屬共報(bào)道有11種，只有小火蟻在世界范圍內(nèi)廣泛分布，其他種在原產(chǎn)地也不常見［27］。小火蟻與該屬其他種的區(qū)別主要是小火蟻前腹柄結(jié)強(qiáng)烈呈矩形，且結(jié)的前面幾乎垂直于結(jié)前柄和結(jié)的背面，呈明顯的階梯狀輪廓，

同時(shí)結(jié)前柄與結(jié)近等長(zhǎng)（圖1g），雖然W.scrobifera、W.sulcaticeps和W.longiseta前腹柄結(jié)也近似方形，但結(jié)的前面不垂直于結(jié)前柄，且結(jié)前柄長(zhǎng)度明顯長(zhǎng)于或短于腹柄結(jié)。小火蟻的體色與其他近緣種也有明顯的差異，如W.longiseta、W.lutzi、W.sulcaticeps和

W.williamsoni的體色要遠(yuǎn)深于小火蟻。小火蟻的蟻后體型要遠(yuǎn)大于工蟻（圖2b），是該屬中蟻后和工蟻體型差異最大的［2627］。另外小火蟻工蟻是單型蟻，沒有特化的大型兵蟻，可以利用這個(gè)特征很容易地將其與大頭蟻屬Pheidole進(jìn)行區(qū)分。

盡管形態(tài)學(xué)方法在小火蟻鑒定中具有直觀性優(yōu)勢(shì)，但其實(shí)際應(yīng)用中仍面臨多重挑戰(zhàn)。首先，受限于該類群個(gè)體微小，需依賴體視顯微鏡進(jìn)行精細(xì)解剖觀察，這對(duì)分類學(xué)經(jīng)驗(yàn)不足的技術(shù)人員構(gòu)成巨大挑戰(zhàn)。其次，形態(tài)鑒定高度依賴工蟻，存在蟲態(tài)受限的問題。最后，口岸檢疫場(chǎng)景下的時(shí)效性壓力與設(shè)備條件限制，使傳統(tǒng)形態(tài)鑒定難以滿足快速通關(guān)需求。DNA條形碼技術(shù)為物種識(shí)別提供了標(biāo)準(zhǔn)化解決方案，通過建立COⅠ基因等標(biāo)準(zhǔn)片段數(shù)據(jù)庫(kù)，可顯著降低技術(shù)推廣門檻，但需規(guī)范小火蟻無水乙醇低溫保存流程以防止核酸降解。值得關(guān)注的是，新興快速檢測(cè)技術(shù)［38］的引入，可顯著縮短分子鑒定周期，為實(shí)現(xiàn)小火蟻的快速鑒定提供了新思路。

小火蟻的早期監(jiān)測(cè)是阻斷其傳播的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。研究表明，花生醬和火腿腸在野外誘集小火蟻中表現(xiàn)最好［39］，這為野外監(jiān)測(cè)提供了有效方法。據(jù)筆者實(shí)地調(diào)查，小火蟻巢穴多分布于枯枝落葉層、喬木樹干裂隙及巖石縫隙等蔭蔽潮濕生境，尤其偏好粗大樹干等穩(wěn)定微環(huán)境。針對(duì)該蟻的隱蔽特性，環(huán)境DNA（eDNA）檢測(cè)技術(shù)為其快速發(fā)現(xiàn)提供了新途徑［40］。小火蟻的行為特征亦具一定辨識(shí)性，工蟻移動(dòng)速率顯著低于常見的大頭蟻、鋪道蟻和紅火蟻等，即使在誘集過程中受到干擾，仍表現(xiàn)出明顯的逃逸遲滯現(xiàn)象，這一特性可作為初步野外識(shí)別的行為學(xué)指標(biāo)。

隨著2024年小火蟻被正式列入我國(guó)進(jìn)境檢疫性有害生物名錄，其跨境擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)已成為生物安全防控的重點(diǎn)領(lǐng)域。鑒于此，亟須構(gòu)建“監(jiān)測(cè)鑒定防治”集成化技術(shù)體系：通過物聯(lián)網(wǎng)技術(shù)實(shí)現(xiàn)高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域?qū)崟r(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，結(jié)合分子鑒定與誘集技術(shù)提升入侵位點(diǎn)篩查效率，同時(shí)開發(fā)低毒高效的靶向生物防治劑以平衡防控效力與生態(tài)安全。精準(zhǔn)的小火蟻鑒定技術(shù)不僅是實(shí)施早期攔截的核心保障，更是踐行國(guó)家生物安全戰(zhàn)略的關(guān)鍵技術(shù)支撐。

參考文獻(xiàn)

［1］ WETTERER J K， PORTER S D. The little fire ant， Wasmannia auropunctata： distribution， impact and control ［J］. Sociobiology， 2003， 41（3）： 141.

［2］ 李錦城，徐伯瑋，許峰銓，等. 光點(diǎn)小火蟻 （Wasmannia auropunctata） （膜翅目： 蟻科）： 臺(tái)灣新記錄之入侵螞蟻及其潛在威脅［J］. 臺(tái)灣昆蟲， 2021， 41（3）： 172181.

［3］ MONTGOMERY M， VANDERWOUDE C， LINTERMANS M， et al. The little fire ant （Hymenoptera： Formicidae）： A global perspective ［J］. Annals of the Entomological Society of America， 2022， 115（6）： 427448.

［4］ HOLWAY D A， LACH L， SUAREZ A V， et al. The causes and consequences of ant invasions ［J］. Annual Review of Ecology and Systematics， 2002， 33（1）： 181233.

［5］ 陳乃中，王艷平，陳洪俊，等. 小火蟻及其在中國(guó)的適生區(qū)預(yù)測(cè)［J］. 昆蟲知識(shí)， 2007（6）： 855858.

［6］ FOUCAUD J， ORIVEL J， LOISEAU A， et al. Worldwide invasion by the little fire ant： Routes of introduction and ecoevolutionary pathways ［J］. Evolutionary Applications， 2010， 3（4）： 363374.

［7］ LUBIN Y D. Changes in the native fauna of the Galápagos Islands following invasion by the little red fire ant， Wasmannia auropunctata ［J］. Biological Journal of the Linnean Society， 1984， 21（1/2）： 229242.

［8］ BRETON J L， CHAZEAU J， JOURDAN H. Immediate impacts of invasion by Wasmannia auropunctata （Hymenoptera： Formicidae） on native litter ant fauna in a New Caledonian rainforest ［J］. Austral Ecology， 2003， 28（2）： 204209.

［9］ 馬駿，胡學(xué)難，李桂文，等. 警惕小火蟻的入侵［J］. 植物檢疫， 2007， 21（1）： 2324.

［10］VONSHAK M， DAYAN T， IONESCUHIRSH A， et al. The little fire ant Wasmannia auropunctata： A new invasive species in the Middle East and its impact on the local arthropod fauna ［J］. Biological Invasions， 2010， 12（6）： 18251837.

［11］WALSH P， HENSCHEL P， ABERNETHY K， et al. Logging speeds little red fire ant invasion of Africa ［J］. Biotropica， 2004， 36（4）： 637641.

［12］CHEN Siqi， ZHAO Yi， LU Yongyue， et al. First record of the little fire ant， Wasmannia auropunctata （Hymenoptera： Formicidae）， in Chinese mainland ［J］. Journal of Integrative Agriculture， 2022， 21（6）： 18251829.

［13］BRETON J L， JOURDAN H， CHAZEAU J， et al. Niche opportunity and ant invasion： the case of Wasmannia auropunctata in a New Caledonian rain forest ［J］. Journal of Tropical Ecology， 2005， 21（1）： 9398.

［14］WETTERER J K， WALSH P D， WHITE L J T. Wasmannia auropunctata （Roger）（Hymenoptera： Formicidae）， a destructive trampant， in wildlife refuges of Gabon ［J］. African Entomology， 1999， 7（2）： 292294.

［15］江幸福，任麒麟，戈悅，等. 外來入侵生物小火蟻國(guó)外研究進(jìn)展及我國(guó)應(yīng)對(duì)策略建議［J］. 植物保護(hù)， 2022， 48（4）： 7378.

［16］PAZ A， POTASMAN I. Acute ocular pain following contact with electrical ant’s （Wasmannia auropunctata） excretions ［J/OL］. International Journal of Clinical Research amp; Trials， 2016， 1： 109. DOI：10.15344/24568007/2016/109.

［17］ROSSELLI D， WETTERER J K. Stings of the ant Wasmannia auropunctata （Hymenoptera： Formicidae） as cause of punctate corneal lesions in humans and other animals ［J］. Journal of Medical Entomology， 2017， 54（6）： 17831785.

［18］HARA A H， CABRAL S K， NIINODUPONTE R Y， et al. Bait insecticides and hot water drenches against the little fire ant， Wasmannia auropunctata （Hymenoptera： Formicidae）， infesting containerized nursery plants ［J］. Florida Entomologist， 2011， 94（3）： 517526.

［19］FASI J， BRODIE G， VANDERWOUDE C. Increases in crop pests caused by Wasmannia auropunctata in Solomon Islands subsistence gardens ［J］. Journal of Applied Entomology， 2013， 137（8）： 580588.

［20］DELABIE J H C， DA ENACRNACA A M V， CAZOLA I M. Relations between the little fire ant， Wasmannia auropunctata， and its associated mealybug， Planococcus citri， in Brazilian cocoa farms ［M］∥WILLIAMS" D F. Exotic Ants： Biology， impact and control of introduced species. Colorado， USA： Westview Press， 1994： 91103.

［21］ARMBRECHT I， ULLOACHACN P. The little fire ant Wasmannia auropunctata （Roger）（Hymenoptera： Formicidae） as a diversity indicator of ants in tropical dry forest fragments of Colombia ［J］. Environmental Entomology， 2003， 32（3）： 542547.

［22］JOURDAN H， SADLIER R A， BAUER A M. Little fire ant invasion （Wasmannia auropunctata） as a threat to New Caledonian lizards： evidences from a sclerophyll forest （Hymenoptera： Formicidae） ［J］. Sociobiology， 2001， 38（3）： 283302.

［23］趙翊，冉浩，陸永躍，等. 小火蟻的形態(tài)特征、分布危害及監(jiān)測(cè)與防控［J］. 環(huán)境昆蟲學(xué)報(bào)， 2022， 44（6）： 13651372.

［24］徐強(qiáng)，顧渝娟，李盼畔，等. 基于最大熵模型預(yù)測(cè)小火蟻在我國(guó)的適生區(qū)［J］. 植物保護(hù)， 2023， 49（4）： 101107.

［25］MAO Mengfei， CHEN Siqi， KE Zengyuan， et al. Using MaxEnt to predict the potential distribution of the little fire ant （Wasmannia auropunctata） in China ［J/OL］. Insects， 2022， 13（11）： 1008. DOI： 10.3390/insects13111008.

［26］LONGINO J T， FERNNDEZ F. Taxonomic review of the genus Wasmannia ［C］∥SNELLING R R， FISHER B L， WARD P S. Advances in ant systematics （Hymenoptera： Formicidae）： Homage to E.O. Wilson50 years of contributions. Ann Arbor： American Entomological Institute， 2007， 80： 271289.

［27］CUEZZO F D C， CALCATERRA L， CHIFFLET L， et al. Wasmannia Forel （Hymenoptera： Formicidae： Myrmicinae） in Argentina： Systematics and distribution ［J］. Sociobiology， 2015， 62（2）： 246265.

［28］FOLMER O， BLACK M， HOEH W， et al. DNA primers for amplification of mitochondrial cytochrome coxidase subunit I from diverse metazoan invertebrates ［J］. Molecular Marine Biology and Biotechnology， 1994， 3（5）： 294299.

［29］HANISCH P E， LAVINIA P D， SUAREZ A， et al. Mind the gap！ Integrating taxonomic approaches to assess ant diversity at the southern extreme of the Atlantic Forest ［J］. Ecology and Evolution， 2017， 7（23）： 1045110466.

［30］SHARAF M R， ALDAWOOD A S. Ants of the genus Solenopsis Westwood 1840 （Hymenoptera： Formicidae） in the Arabian Peninsula with description of a new species， Solenopsis elhawagryi ［J/OL］. PLoS ONE， 2012， 7（11）： e49485. DOI： 10.1371/journal.pone.0049485.

［31］AZORSA F， FISHER B L. Taxonomy of the ant genus Carebara Westwood （Formicidae， Myrmicinae） in the Malagasy region ［J］. ZooKeys， 2018（767）： 1149.

［32］FERNANDEZ F. The American species of the myrmicine ant genus Carebara Westwood （Hymenoptera： Formicidae） ［J］. Caldasia， 2004， 26（1）： 191238.

［33］EMERY C. An analytical key to the genera of the family Formicidae， for the identification of the workers ［J］. The American Naturalist， 1902， 36（429）： 707725.

［34］FERNANDEZ C F. Myrmicine ants of the genera Ochetomyrmex and Tranopelta （Hymenoptera： Formicidae） ［J］. Sociobiology， 2003， 41（3）： 633662.

［35］PEREIRA J C， DELABIE J H C， ZANETTE L R S， et al. Studies on an enigmatic Blepharidatta Wheeler population （Hymenoptera： Formicidae） from the Brazilian Caatinga ［J］. Sociobiology， 2014， 61（1）： 5259.

［36］ULLOACHACN P， CHERIX D， MEIER R. Bibliografa de la hormiga colorada Wasmannia auropunctata （Roger）（Hymenoptera： Formicidae） ［J］. Noticias de Galápagos， 1991， 50： 812.

［37］RADCHENKO A， CZECHOWSKI W， CZECHOWSKA W. The genus Tetramorium Mayr （Hymenoptera， Formicidae） in Poland—a survey of species and a key for their identification ［J］. Annales Zoologici （Warszawa）， 1998， 48（1/2）： 107118.

［38］韓蕊， 滕祎， 李獻(xiàn)鋒， 等. 基于酶介導(dǎo)雙重指數(shù)擴(kuò)增技術(shù)（EmDEA）的小火蟻快速檢測(cè)方法的開發(fā)［J］. 環(huán)境昆蟲學(xué)報(bào)， 2024， 46（5）：10591067.

［39］李玉玲， 江秋瑩， 宋士成， 等. 4種餌料對(duì)小火蟻工蟻的誘集效果比較［J］. 環(huán)境昆蟲學(xué)報(bào)， 2022， 44（6）：13961401.

［40］劉明倩， 張政， 王尚， 等. eDNA技術(shù)監(jiān)測(cè)陸地生物多樣性：技術(shù)要點(diǎn)、難點(diǎn)與進(jìn)展［J］. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)， 2025， 36（3）： 927942.

（責(zé)任編輯：田 喆）