牛病毒性腹瀉病毒檢測與防控技術(shù)

牛病毒性腹瀉（BovineViralDiarrhea，BVDV）首次出現(xiàn)在1946年的美國，而后迅速在全球傳播。我國首例BVDV出現(xiàn)在1980年，隨著牛養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，其流行范圍、危害程度都出現(xiàn)了不同程度的擴(kuò)大?，F(xiàn)如今，更是給集約化牛養(yǎng)殖帶來了不小的影響。一般情況下，感染BVDV的牛會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)奶量、生長性能下降等情況，另外，該病毒突變率極高，控制難度大。因此，明確其臨床癥狀、掌握有效的檢測方法是成為疾病防控的關(guān)鍵和基礎(chǔ)。

1牛病毒性腹瀉病毒的臨床癥狀

牛病毒性腹瀉病毒的易感群體有兩個(gè)，一個(gè)是膘情好的成年母牛，一個(gè)是6～18個(gè)月齡的犢牛。由于這兩類牛群普遍具有較好的體質(zhì)，所以，經(jīng)常會(huì)成為BVDV的攜帶者，并在與其他健康牛接觸時(shí)將病毒傳播給對(duì)方。

牛感染BVDV的癥狀表現(xiàn)大體分為兩種，一種是急性感染，一種是慢性感染。

第一，急性感染：多見于新疫區(qū)或易感牛群，潛伏期最短為7d，一般不超過 10d 發(fā)病后，癥狀表現(xiàn)為超過40℃的高溫、食欲下降、呼吸急促、眼鼻處分泌物增多；發(fā)病后3d左右，病?？谇怀霈F(xiàn)黏膜糜爛、壞死，同時(shí)呼氣伴有惡臭味并開始出現(xiàn)流口水的癥狀。部分病牛還會(huì)出現(xiàn)消化系統(tǒng)癥狀，癥狀表現(xiàn)為水樣狀腹瀉、糞便伴有黏液且惡臭。若病癥嚴(yán)重，病牛還容易脫水死亡。若懷孕的母牛感染BVDV，其癥狀表現(xiàn)為流產(chǎn)、產(chǎn)下帶有先天性缺陷的牛犢。

第二，慢性感染：多見于老疫區(qū)或隱性感染的牛群，其癥狀表現(xiàn)為體溫略高、趾間皮膚糜爛、間歇性腹瀉、消化道彌漫性充血病變。對(duì)于病程長的病牛，后期還容易嚴(yán)重脫水，甚至是死亡。

2牛病毒性腹瀉病毒的檢測方法

2.1核酸檢測法

核酸檢測法可被用于各年齡段牛群的BVDV檢測，具有靈敏度高、定量快速、高特異性等特點(diǎn)2]。

第一，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種通過熒光探針或染料，實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR擴(kuò)增過程并根據(jù)循環(huán)閾值定量病毒核酸的核酸檢測法，其特點(diǎn)包括可檢測低至102copies/μL的病毒核酸、支持針對(duì)BVDV5-UTR保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物、可用于病毒載量監(jiān)測。目前，該檢測方法被用于BVDV研發(fā)中的病毒滴度測定。

第二，微滴式數(shù)字PCR是一種依托熒光信號(hào)統(tǒng)計(jì)數(shù)萬微滴中的陽性微滴數(shù)的核酸檢測方法，其特點(diǎn)包括最低檢測限達(dá)3.2copies/ μL ，適用于持續(xù)性感染牛（PI）的血液樣本檢測。目前，該檢測方法被廣泛用于PI牛的早期篩查以及病毒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的開發(fā)等場景中。

2.2血清學(xué)檢測法

血清學(xué)檢測法是通過檢測牛體內(nèi)針對(duì)BVDV的特異性 抗體或抗原，間接判斷感染狀態(tài)。

第一，病毒中和試驗(yàn)（VNT）其原理是先將待檢血清與BVDV混合孵育，然后接種細(xì)胞，通過觀察細(xì)胞病變（CPE）抑制情況，間接判斷牛感染BVDV的情況。其中，判斷標(biāo)準(zhǔn)為中和抗體效價(jià)不低于1：256。該檢測方法具有準(zhǔn)確性高、可區(qū)分抗體類型、病毒和細(xì)胞培養(yǎng)條件較為苛刻且耗時(shí)長、不支持對(duì)免疫耐受性的BVDV檢測。目前，被用于評(píng)估實(shí)驗(yàn)室抗體效價(jià)、驗(yàn)證疫苗免疫效果等場景中。

第二，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是一種常用的BVDV檢測方法，其原理是借助酶催化底物顯色反應(yīng)，定量檢測抗體或抗原，其優(yōu)勢在于操作便捷、檢測速度快、結(jié)果準(zhǔn)確率高。目前，該檢測方法在BVDV檢測領(lǐng)域的應(yīng)用包括基于BVDV重組E2蛋白檢測血清中的總抗體、基于BVDVNS3蛋白中1段具有免疫反應(yīng)型的重組片段檢測血清中的總抗體、基于超免疫血清的雙抗體夾心ELISA檢測方法等?，F(xiàn)階段，ELISA是臨床領(lǐng)域BVDV的常規(guī)檢測方法，其應(yīng)用場景包括組織及臟器培養(yǎng)物中的BVDV檢測、大規(guī)模牛群BVDV抗體水平監(jiān)測。不過，該方法的應(yīng)用受限于所需特異性抗原制備等，仍無法被廣泛應(yīng)用。

第三，膠體金免疫層析技術(shù)其原理是先將BVDV特異性抗體固定于試紙條的檢測線和質(zhì)控線，然后以肉眼觀察其顏色變化，從而判斷牛感染BVDV情況。其特點(diǎn)包括檢測快速、便捷，支持現(xiàn)場檢測，存在交叉反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。目前，該檢測方法被用于散養(yǎng)戶、運(yùn)輸環(huán)節(jié)的牛感染BVDV的快速初篩場景中。

在BVDV防控中，血清學(xué)檢測法具有不可替代的作用，表現(xiàn)為ELISA和膠體金試紙結(jié)合后，可被用于基層快速篩查場景中；免疫熒光抗體技術(shù)和雙抗體夾心ELISA結(jié)合后，可被用于直接檢測病毒場景中。

2.3病毒分離鑒定法

病毒分離鑒定法是實(shí)驗(yàn)室鑒定BVDV最為基礎(chǔ)的鑒別方法，其核心在于患病動(dòng)物組織樣本的獲取、培育與鑒定，其優(yōu)勢在于技術(shù)體系成熟、檢測流程完善、適用范圍廣、支持對(duì)多種組織樣本的培育與鑒定。據(jù)悉，已有學(xué)者通過反復(fù)凍融、研磨、離心處理、RT-PCR與間接免疫熒光檢測動(dòng)物組織樣本的病變情況；此外，還有學(xué)者通過破碎、離心處理、接種于MDBK細(xì)胞中盲傳5代、RT-PCR檢測、透射電鏡觀察等檢測細(xì)胞病變情況等。不過，由于該方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、檢測人員的身體素質(zhì)等有著較高要求，并且耗時(shí)長、檢測周期長，所以很難應(yīng)用于大規(guī)模樣本檢測場景。

3牛病毒性腹瀉病毒防控要點(diǎn)

3.1加強(qiáng)飼料及草料的儲(chǔ)存管理

由于縣四季分明，雨量充沛，濕度相對(duì)較大，所以，養(yǎng)殖戶在飼料和草料儲(chǔ)存方面面臨更高的要求。

第一，優(yōu)先選擇在干燥、通風(fēng)良好的倉庫中存放飼料和草料。考慮到當(dāng)?shù)貪穸容^大，故在設(shè)計(jì)倉庫時(shí)可考慮加入架空地板設(shè)計(jì)，以阻止飼料和草料與地面直接接觸的方式，降低其受潮的可能性。為實(shí)現(xiàn)對(duì)倉庫內(nèi)環(huán)境的有效控制，還需在倉庫內(nèi)安裝除濕機(jī)、通風(fēng)扇等溫濕度調(diào)節(jié)設(shè)備，以便于將室內(nèi)溫濕度控制在合適范圍內(nèi)，從而可以有效防范霉菌的滋生。為盡可能地消滅霉菌、病菌的生存空間，養(yǎng)殖戶還需定期清掃、消毒倉庫等。

第二，分區(qū)放置受污染和未受污染的飼料和草料，以避免飼料和草料出現(xiàn)交叉感染的情況；考慮到儀隴縣鼠害、蟲害相對(duì)較多，所以，在儲(chǔ)存飼料和草料時(shí)，還需在適當(dāng)位置設(shè)置防鼠板、防蟲網(wǎng)等設(shè)施，用于阻止鼠蟲進(jìn)入倉庫，破壞和污染飼料和草料。此外，還需加大飼料檢測力度，重點(diǎn)檢測其是否攜帶病毒或其他病原體，以實(shí)現(xiàn)從源頭有效控制飼料和草料的品質(zhì)。

第三，分層堆放飼料和草料，以確保堆垛間空氣流通；合理規(guī)劃堆垛間距，為通風(fēng)、檢查提供充足的操作空間；秉承“先進(jìn)先用”的原則使用飼料和草料，以合理縮短飼料和草料的在倉存放時(shí)間，從而避免其品質(zhì)下降嚴(yán)重；根據(jù)季節(jié)變化，調(diào)整堆放方式和儲(chǔ)存時(shí)間。比如，在5～9月降水集中期間，養(yǎng)殖戶應(yīng)根據(jù)該時(shí)期內(nèi)的降水頻率、降水量等，調(diào)整飼料和草料的防潮防澇措施，以免使其受潮、發(fā)霉。

3.2落實(shí)免疫接種

第一，由儀隴縣獸醫(yī)部門派遣專業(yè)人員到基層向養(yǎng)殖戶科普疫苗接種，同時(shí)，結(jié)合BVDV的覆蓋范圍、發(fā)病規(guī)律、疾病特征以及牛群的健康程度等，為養(yǎng)殖戶選擇疫苗提供專業(yè)化建議；為最大限度地發(fā)揮疫苗接種在BVDV防控中的作用，當(dāng)?shù)孬F醫(yī)部門在選擇疫苗種類時(shí)，還需優(yōu)先考慮適合本地牛群的疫苗，如BVDV滅活疫苗等。另外，還要仔細(xì)檢查疫苗的質(zhì)量檢測證書等，以確保其安全、可靠。

第二，規(guī)范免疫程序?；谝虻刂埔说睦砟?，制定個(gè)性化的免疫程序。一般情況下，在牛犢出生后的一段時(shí)間內(nèi)，需完成首次疫苗接種，而后在適當(dāng)時(shí)期完成加強(qiáng)針的接種。為確保免疫效果最優(yōu)，在制定和完善免疫程序時(shí)，獸醫(yī)部門需綜合考慮儀隴縣的氣候、交通、養(yǎng)殖規(guī)模、養(yǎng)殖環(huán)境等。

第三，為進(jìn)一步提高疫苗接種的規(guī)范性，儀隴縣需聯(lián)合獸醫(yī)有針對(duì)性組織養(yǎng)殖戶參加培訓(xùn)，以提高其疫苗接種意識(shí)和能力。

第四，持續(xù)監(jiān)控。在給牛接種疫苗后，養(yǎng)殖戶需要密切觀察牛的狀態(tài)，若出現(xiàn)異常，需立即聯(lián)系獸醫(yī)干預(yù)。此外，養(yǎng)殖戶還需重視對(duì)整個(gè)牛群的健康監(jiān)測，其內(nèi)容包括體溫、皮膚黏膜狀況等[3。另外，還要持續(xù)監(jiān)控PI牛，通過篩選、淘汰PI牛，減少感染BVDV的牛數(shù)量。

3.3合理養(yǎng)殖

第一，嚴(yán)格控制牛養(yǎng)殖密度，確保每平方米的牛數(shù)量不超過1.2頭，同時(shí)，按 12～16m² 頭控制飼養(yǎng)面積；第二，適時(shí)清理牛舍衛(wèi)生并通風(fēng)，以確保牛舍環(huán)境良好；第三，加強(qiáng)日常檢查，通過定期對(duì)牛進(jìn)行健康檢查，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理患病牛；第四，推廣牛健康檔案制度，詳細(xì)記錄牛的接種記錄、患病信息等信息，以實(shí)現(xiàn)對(duì)牛健康狀況的精準(zhǔn)掌握。

結(jié)語

綜上，牛病毒性腹瀉病毒會(huì)給養(yǎng)殖戶帶來巨大威脅，而檢測方法是獸醫(yī)部門聯(lián)合養(yǎng)殖戶落實(shí)病毒防控的基礎(chǔ)和前提。因此，基層要加深對(duì)各種檢測方法的認(rèn)知和理解，掌握其原理、適用場景等，以便在實(shí)際工作中準(zhǔn)確選擇和應(yīng)用合適的檢測方法。此外，還要組織養(yǎng)殖戶從飼料管理、免疫接種、合理養(yǎng)殖等角度入手，做好日常防控，從而降低牛的染病率，減少經(jīng)濟(jì)損失。

參考文獻(xiàn)：

[1] 舒磊.試論牛、羊、豬感染牛病毒性腹瀉病毒臨床癥狀、鑒別診斷以及防控[J].中國動(dòng)物保健，2021，23（10）：22+24.

[2] 賈偉娟，王海鋒，付明山，等.牛病毒性腹瀉病毒檢測方法研究進(jìn)展［J].養(yǎng)殖與飼料，2024，23（03）：81-85.

[3] 牟思洋，李焱，何小強(qiáng)，等.牛病毒性腹瀉病毒流行和防控研究進(jìn)展[J].養(yǎng)殖與飼料，2024，23（10）：90-94.收稿日期：2025-04-28

作者簡介：李開明（1970—），男，漢族，獸醫(yī)師。研究

方向：動(dòng)物疫病防控。