一測(cè)多評(píng)法測(cè)定舒肝顆粒中4種成分的含量

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號(hào)】1007-8517（2025）12-0062-05

DOI ： 10.3969/j . issn.1007-8517.2025.12. zgmzmjyyzz202512014

Abstract：ObjectiveTo establish aquantitativeanalysis of multi-components bysingle marker（QAMS）method forsimultaneousdeterminationoffourcomponents（geniposide，paeoniflorin，liquirin，andammoniumglycyrhizinate）inShuganGranules. Method High performance liquid chromatography（HPLC）was employed，using a JADE-PAK^°ledastKM-C₁₈ column （ 250mm× 4.6 mm， 5μm ），with methanol- 0.05% formic acid aqueous solution as the elution mobile phase for gradient elution. The flow rate was （204號(hào) 1.0mL/min ，the detection wavelength was 26Onm，and the column temperature was 40% .Geniposide was used as the internal referencesubstance toestablishtherelativecorrectionfactorsoftheoterthre componentsandcalculatethecontentsofthefourcomponents tobedetermined，achievingmulti-omponentdeterminationbyasinglemeasurement.Meanwhile，itwascomparedwiththeexteralstandardmethodtoverifytheaccuracyandfeasibilityoftheQAMSmethodResultsThefourcomponentshaveagoodlinearelationship within their respective ranges（ rgt;0.999 6 ）. The average sample recovery rate is 99.01% to 102.64% ，and the RSD is 0.54% to 1.5% .Theresults obtained bythequantitative analysisof multi-components by single marker method are close to those by theexternalstandardmethod.Conclusion Usinggeniposideas theinteralreferencesubstance，theQAMS metodforthefourcomponents in Shugan Granules is accurateand feasible，andcan be used to strengthen thequalitycontrolof Shugan Granules.

Key words： Shugan Granules;QAMS； Four Components

舒肝顆粒是昆明中藥廠有限公司研制生產(chǎn)的治療肝郁證的中成藥制劑，由當(dāng)歸、白芍、白術(shù)等10味中草藥制成，方中柴胡、香附為君藥，舒肝散郁，條達(dá)肝氣，理氣調(diào)中，調(diào)經(jīng)止痛；當(dāng)歸、白芍、茯苓、白術(shù)四藥為臣藥，養(yǎng)血柔肝；梔子、牡丹皮為佐藥，清熱涼血；甘草為使藥，健脾益氣，調(diào)和諸藥[1]。臨床研究[2-4]表明，舒肝顆粒能預(yù)防抑郁發(fā)作，并能改善輕度抑郁患者的抑郁癥狀，還能有效改善更年期患者臨床癥狀，且不良反應(yīng)較少。

舒肝顆?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十七冊(cè)[5]，標(biāo)準(zhǔn)僅有性狀、鑒別、制劑通則檢查項(xiàng)，缺少含量測(cè)定的質(zhì)控方法，且目前關(guān)于舒肝顆粒有效成分含量測(cè)定的報(bào)道有限，因此繼續(xù)完善舒肝顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于提高其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)有重要意義。一測(cè)多評(píng)法由中國中醫(yī)科學(xué)院王智民[提出，僅選定一個(gè)化學(xué)成分（內(nèi)參物），建立內(nèi)參物與其它多種成分間的相對(duì)校正因子，實(shí)現(xiàn)多個(gè)成分含量的測(cè)定[7]，該方法克服了對(duì)照品緊缺，降低了檢測(cè)成本，節(jié)約時(shí)間，操作簡便。本研究以梔子苷為對(duì)照，用QAMS同時(shí)測(cè)定舒肝顆粒中梔子苷、芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨的含量，為提高舒肝顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1儀器LC-2010AHT型高效液相色譜儀（日本島津）；UC－7100S 型超聲波清洗器（美瑞泰克）；MS105DU型電子天平（梅特勒、托利多）。1.2試藥梔子苷（批號(hào)110749－202320，98.1% ），芍藥苷（批號(hào)110736－202246，96.7% ），甘草苷（批號(hào)111610－202209，95.2% ），甘草酸銨（批號(hào)110731－202122，94.4% ）均購于中國食品藥品檢定研究院；5批舒肝顆粒（批號(hào)：531721、533429、532259、520723、532714），編號(hào)： ΔS1_Δ～S5 ，昆明中藥廠有限公司；甲醇色譜純，賽默飛世爾科技（云南）有限公司；超純水。

2方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1混合對(duì)照品溶液的制備精密稱取梔子苷19.86mg 、芍藥苷 21.70mg 、甘草苷 24.78mg 、甘草酸銨 22.03mg 分別置 50mL 量瓶中，加甲醇定容，按 1：1：1：1 的體積混合，制成濃度分別為97.413μg/mL 、 104.920μg/mL 、 117.953μg/mL 、103.982μg/mL 的混合溶液，搖勻，即得。2.1.2樣品溶液取舒肝顆粒適量，研細(xì)，精密稱取約 1.0g 置于具塞錐形瓶中，精密加入 50% 甲醇 50mL ，稱重，超聲（ 100W ， 53kHz ） 30min 補(bǔ)足減失的重量，過 0.45μm 微孔濾膜，即得。2.2色譜條件色譜柱： JADK-PAK^°ledcircKM-C₁₈ （2號(hào)（ 4.6mm×250mm ， 5μm ）；流動(dòng)相為甲醇（A）-0.05% 甲酸溶液（B），梯度洗脫時(shí)間程序（0～20min ， 15%～25%A ： 20～45min ， 25%～70% A;45～50min ， 70%～85%A ； 50～52min ， 85%～15% A; 52～60min ， 15%A ）；流速為 1.0mL/min ，檢測(cè)波長為 260nm ；柱溫： 40% ；進(jìn)樣量 10μL 。2.3系統(tǒng)適用性分別取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)條件進(jìn)樣測(cè)定，考察系統(tǒng)適用性。在“2.2”項(xiàng)色譜條件下，各成分色譜峰與相鄰峰的分離度均大于1.5。色譜圖如圖1所示。

圖1高效液相色譜圖

1．梔子苷；2.芍藥苷；3.甘草苷；4.甘草酸銨 A.對(duì)照品溶液；B.供試品溶液

2.4方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系 分別精密吸取混合對(duì)照品溶液

1μL 、2μL、 5μL 、 10μL 、 15μL ） 20μL 注人高效液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積。按“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定。所測(cè)4種成分的 回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表1。色譜圖如圖1所示。

表14種成分的回歸方程和相關(guān)系數(shù)

2.4.2精密度試驗(yàn)取混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得梔子苷、芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨色譜峰的峰面積RSD分別為 0.23%. 0.83% 、0.27%.1.2% 。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取舒肝顆粒（批號(hào)：531721），照“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別測(cè)定在 0h.2h.4h.8h.12h.24h 的峰面積。測(cè)得梔子苷、芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨的峰面積RSD分別為 0.66% 、 1.1% 、 0.86% ！0.93% ，表明樣品在 24h 的穩(wěn)定性良好。

2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)取舒肝顆粒（批號(hào)：531721），照“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備6份，測(cè)得梔子苷、芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨的含量RSD分別為 0.53% 、0.86% 、 1.3% 、 0.82% ，表明該方法重復(fù)性良好。2.4.5加樣回收率試驗(yàn)取各成分含量已知的本品內(nèi)容物（批號(hào)531721）6份，每份約 _0.5g ，分別精密加入對(duì)照品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率和RSD，結(jié)果見表2。表明該方法的回收率良好。

表2加標(biāo)回收率表

2.5相對(duì)校正因子的測(cè)定吸取“2.4.1”項(xiàng)下的6個(gè)線性標(biāo)準(zhǔn)溶液，照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，依據(jù)相對(duì)校正因子計(jì)算公式，采用多點(diǎn)校正法計(jì)算，以梔子苷作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，計(jì)算芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨的校正因子。芍藥苷校正因子分別為6.283、6.226、6.262、6.294、6.271、6.219，平均值：6.259，RSD為 0.49% ；甘草苷校正因子分別為0.623、0.639、0.626、0.630、0.635、0.622，平均值：0.629，RSD為 1.1% ；甘草酸銨校正因子分別為0.779、0.774、0.778、0.769、0.772、0.763，平均值：0.772，RSD為 0.78% 。2.6相對(duì)校正因子耐用性考察取適量混合對(duì)照品溶液適量，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，分別考察不同流速（ 0.8mL/min ： 1.0mL/min 1.2mL/min ）和不同柱溫（ 30^qC 、 35^qC 、 40% ）對(duì)相對(duì)校正因子的影響，結(jié)果見表3。表明不同色譜條件下芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨的相對(duì)校正因子無顯著影響。

表3不同色譜條件下3個(gè)成分的相對(duì)校正因子表

2.7待測(cè)成分色譜峰定位取混合對(duì)照品溶液適量，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，采用相對(duì)保留時(shí)間法對(duì)各成分色譜峰進(jìn)行定位。

本研究考察了相對(duì)保留時(shí)間在不同色譜柱和不同儀器上的重現(xiàn)性，結(jié)果見表4，表明不同條件下各成分RRT無顯著差異。

表4不同條件下3種成分的相對(duì)保留時(shí)間

2.8一測(cè)多評(píng)法與外標(biāo)法的比較先采用外標(biāo)法對(duì)不同批次舒肝顆粒的4種成分進(jìn)行含量測(cè)定，再用建立的一測(cè)多評(píng)法對(duì)以梔子苷為內(nèi)參的另外3種成分的含量進(jìn)行計(jì)算，并將兩種方法的結(jié)果進(jìn)行比較，以驗(yàn)證一測(cè)多評(píng)法的準(zhǔn)確性，結(jié)果見表5。結(jié)果表明2種方法測(cè)定的結(jié)果無顯著差異，QAMS法測(cè)定舒肝顆粒中4個(gè)成分的含量具有可行性。

表53種成分兩種計(jì)算方法的比較表（mg/g）

注：RMD為相對(duì)平均偏差（ % ）

3討論

3.1供試品處理方法選擇分別考察不同提取溶液（甲醇、乙醇、 50% 甲醇、 70% 甲醇溶液）及不同提取方式（超聲提取、回流提?。?duì)4個(gè)成分提取效率的影響，發(fā)現(xiàn) 50% 甲醇和 70% 甲醇提取效果較好，為節(jié)約成本，選用 50% 甲醇提取;回流提取和超聲提取差異不大，因此選擇操作方便的超聲提取。

3.2色譜條件選擇用文獻(xiàn)［8］中的條件甲醇-0.05% 甲酸水溶液為流動(dòng)相，通過流速和比例的調(diào)整優(yōu)化后，當(dāng)采用“2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定時(shí)，梔子苷、芍藥苷、甘草苷、甘草酸銨4個(gè)成分均能達(dá)到良好的分離，滿足分析要求。

3.3指標(biāo)性成分及內(nèi)參物選擇在2020版《中國藥典》9中，梔子苷是梔子的質(zhì)量控制指標(biāo)，具有抗炎、抗菌、降血糖、抗抑郁、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤等藥理作用[10]；白芍和牡丹皮均含芍藥苷，而芍藥苷具有抗抑郁的作用[]；甘草的主要成分甘草苷和甘草酸銨具有抗病毒、抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤等多種生物學(xué)作用[12-14]，其中甘草苷可改善抑郁模型中的快感缺乏癥狀并對(duì)抗絕望行為[15]。因此本研究選擇梔子苷、芍藥苷、甘草苷和甘草酸銨含量測(cè)定指標(biāo)。由于梔子苷對(duì)照品性質(zhì)穩(wěn)定，色譜峰峰形良好，保留時(shí)間附近干擾成分少，符合內(nèi)參物的選擇要求，故選擇梔子苷作為內(nèi)參物。

3.4方法評(píng)價(jià)本研究中建立的一測(cè)多評(píng)法操作簡便，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可同時(shí)測(cè)定舒肝顆粒中4種成分的含量，且測(cè)定結(jié)果與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果無顯著差異，可為制劑標(biāo)準(zhǔn)提升和質(zhì)量控制提供參考。

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（收稿日期：2024-09-20 編輯：劉斌）