胎兒生長受限患者血清與胎盤miR-1227-3p、 miR-212-3p的表達水平及其臨床意義

中圖分類號：R714.43 文獻標(biāo)志碼：A DOI：10.11958/20250839

Expression levels and clinical significance of miR-1227-3pand miR-212-3p in serum and placenta in puerperas with fetal growth restriction

CUI Huan， GAO Ying△，YANG Junjuan， GUO Ying， YE Qing DepartmentofObstetricsand Gynecology， Zhengzhou Maternal and Child Health Hospital， Zhengzhou 450ooo，China Corresponding Author E-mail： 33233837@qq.com

Abstract：ObjectiveTo investigate the expression levelsand clinical significance of serumand placental microRNA （miR） -1227- sp and miR-212-3p in puerperas with fetal growth restriction （FGR）. MethodsA total of 12O puerperas diagnosedwithFGRandcompleteddelivery inourhospital were includedasthe study group.Patients wereasigned into the mild group （ n =72） and the severe group（ n =48）according to the severity of their condition.Another 12O healthy puerperas who underwent prenatal check upsand delivered during the same period inour hospital were included as the control group. QRT-PCR was used to detect serum and placental miR-1227- 3p and miR- 2I2 二 3p . The pregnancy outcomes of both groups were recorded，including neonatal weight，1min Apgar score，placental weightand placental volume.ResultsSerumand placental miR-1227-3p expresion levels，neonatal weight，1minApgar score，placental weightand placental volume were significantly lower in the study group than those of the control group （ Plt;0.05 ），while serum and placental miR-212- ^βp （20 expression levels were significantly higher than those of the control group （ Plt;0.05 ）. The expression levels of miR-1227- 3p （20 in serum and placenta of the severe group were obviously lower than those of the mild group （ Plt;0.05 ），while the expression level of miR-212-3pwas obviously higher than those of the mild group （ Plt;0.05 ）.Theexpressionlevels of miR-1227-3p in serumand placenta werepositivelycorrelated withneonatal weight，1minApgarscore，placentalweightandplacental volume，and the expression levels of miR-212- 3p in serum and placenta were negatively correlated with the above indicators ΔPlt;0.05 ）.MultivariateLogisticregressionanalysis revealed thatelevatedserumandplacentalmiR-212-3plevelswererisk factors for FGR（ Plt;0.05 ），and increased serumand placental miR-1227- 3p ，neonatal weight，1 min Apgar，placental weight and placental volumewereprotective factors （ Plt;0.05 ）.Receiver operating characteristic （ROC） curve analysis showed that the diagnostic value of combined detection of serum and placenta miR-1227- 3p and miR-212-3p levels for FGR wasbetter than that of single diagnosis.ConclusionThe combined detection of miR-1227-3p and miR-212- 3p in serum and placenta of FGR puerperas has certain value in the clinical diagnosis of FGR.

Key words：fetal growth retardation; placenta; serum; pregnancy outcome; miR-1227-3p; miR-212-3p

胎兒生長受限（fetal growth restriction，F(xiàn)GR）是圍產(chǎn)期一種常見并發(fā)癥，可顯著增加不良妊娠結(jié)局風(fēng)險，表現(xiàn)為胎兒生長發(fā)育遲滯、宮內(nèi)死亡風(fēng)險升高及新生兒病死率上升[1]。FGR發(fā)病機制復(fù)雜，胎盤-臍帶系統(tǒng)異常是重要誘因之一，胎盤功能障礙（如發(fā)育異常、生長受限及功能受損）會直接影響胎兒的營養(yǎng)供給和生存狀態(tài)[2]。此外，多胎妊娠、遺傳缺陷、母體營養(yǎng)不良、妊娠期高血壓等慢性疾病以及宮內(nèi)感染等因素也被證實與FGR發(fā)生密切相關(guān)[3-4]。因此，探索FGR相關(guān)血清標(biāo)志物對其早期篩查和臨床診斷具有重要意義。近年研究發(fā)現(xiàn)，微小核糖核酸（microRNA，miR）作為一類高度穩(wěn)定的非編碼RNA，可通過調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡等生物學(xué)過程參與疾病進展，且在血液和組織中易于檢測[5-6]。其中，miR-1227-3p 被證實與FGR病理進程相關(guān)，而miR-2I2-3p 在FGR中高表達[8]。然而，目前關(guān)于miR-1227-3p 、miR-212-3p與FGR關(guān)系的研究尚鮮見?；诖耍狙芯客ㄟ^檢測FGR產(chǎn)婦血清及胎盤組織中miR-1227-3p和miR-212-3p的表達水平，探討二者在FGR臨床診斷中的應(yīng)用價值。

1對象與方法

1.1研究對象選取2022年6月一2024年6月于我院確診為FGR并完成分娩的產(chǎn)婦120例作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合FGR診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，足月新生兒患者體質(zhì)量 lt;2500g 或 lt; 同孕齡患者體質(zhì)量、腹圍的第10百分位數(shù)；（2）單胎妊娠；（3）自然受孕；（4）臨床資料完整；（5）自愿接受隨訪至分娩。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）重要器官功能不全者；（2）惡性腫瘤者；（3）存在FGR家族史；（4）有免疫、血液系統(tǒng)疾病；（5）孕期吸煙、飲酒者；（6）羊水異常；（7）胎盤早剝。另選取本院同期產(chǎn)檢并完成分娩的健康產(chǎn)婦120例為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡20＼～38歲；（2）單胎、孕周明確；（3）按時產(chǎn)檢;（4）在本院建檔并完成分娩。排除標(biāo)準(zhǔn)同研究組。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號：20220024），獲得所有研究對象知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1一般資料收集收集2組年齡、體質(zhì)量指數(shù)（bodymassindex，BMI）、身高、分娩孕周、分娩方式、孕次、產(chǎn)次等一般資料。

1.2.2血清與胎盤 miR-I227-3p.miR-2I2-3p 檢測采集患者孕9＼～12周入組當(dāng)日的空腹靜脈血 5mL ，經(jīng) 3500×_g 離心10min 后分離血清，保存至 -20^°C 樣品箱待檢；胎盤娩出后立即選取母體面中央?yún)^(qū)域（避開壞死及鈣化灶）切取 1cm³ 組織樣本，經(jīng)預(yù)冷PBS沖洗后液氮速凍 5min ，隨后轉(zhuǎn)移至 -80^°C 保存。采用Trizol試劑（北京凱詩源公司）分別提取血清及胎盤組織總RNA，使用超微量分光光度計（ThermoScientific）檢測RNA純度和濃度，符合標(biāo)準(zhǔn)者進行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，進行qRT-PCR反應(yīng)，引物序列見表1。反應(yīng)體系 （20μL） ：cDNA 2μL ，2×SYBRGreenMasterMix 10μL ，上、下游引物各0.5μL ，加 ddH₂0 至 20μL 。反應(yīng)條件： 95^°C 預(yù)變性 15min 95℃變性15s，65℃退火/延伸45s，40個循環(huán)，各樣本重復(fù)3次。以 Uδ 為內(nèi)參基因，采用 2^-ΔΔCt 法計算 miR-I227-3p 和miR-212-3p的相對表達量。

1.2.3妊娠結(jié)局指標(biāo)記錄2組妊娠結(jié)局，包括新生兒體質(zhì)量 .1minApgar 評分、胎盤質(zhì)量和胎盤體積。（1）新生兒體質(zhì)量：出生后即刻使用校準(zhǔn)電子秤測量。 2）1minApgar 評分：于出生后 1min 評估心率、呼吸、肌張力、喉反射及皮膚顏色5項體征，每項0＼～2分，總分10分。（3）胎盤質(zhì)量：新生兒娩出后待胎盤自然排出，清除表面殘留物，置于醫(yī)用電子秤上直接測量。（4）胎盤體積：測量胎盤長（L）、寬（W）、高（H）最大徑線，計算公式：胎盤體積 =0.523×L×W×H

1.2.4FGR嚴(yán)重程度評估根據(jù)FGR病情嚴(yán)重程度1將研究組患者分為輕度組（評估新生兒體質(zhì)量 ∠ 胎齡的第10百分位，且 L? 第3百分位）72例和重度組（評估新生兒體質(zhì)量 lt; 胎齡的第3百分位）48例。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS25.0軟件分析數(shù)據(jù)。計量資料以x±s表示，2組間比較采用獨立樣本 t 檢驗；計數(shù)資料以例（% 表示，組間比較采用 χ² 檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson法。采用Logistic回歸分析FGR的影響因素；繪制受試者工作特征（ROC）曲線分析血清和胎盤miR-1227-3p、miR-212-3p表達水平對FGR的診斷價值，曲線下面積（AUC）比較采用Delong檢驗。 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1研究組與對照組一般資料比較2組的年齡、BMI、身高、分娩孕周、分娩方式、孕次和產(chǎn)次比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（ （Pgt;0.05 ），見表2。

2.2研究組與對照組血清和胎盤 miR-I227-3p 、miR-212-3p表達水平比較與對照組比較，研究組血清和胎盤 miR-I227-3p 表達水平降低， ，miR-2I2- 3p 表達水平升高 （Plt;0.05） ，見表3。

2.3研究組與對照組妊娠結(jié)局指標(biāo)比較研究組新生兒體質(zhì)量、 1min Apgar評分、胎盤質(zhì)量和胎盤體積均低于對照組 （Plt;0.05） ，見表4。

2.4不同嚴(yán)重程度FGR血清和胎盤 miR-I227-3p 、miR-212-3p表達水平比較與輕度組比較，重度組血清和胎盤 miR-I227-3p 表達水平降低，miR-212-3p 表達水平升高 （Plt;0.05 ），見表5。

2.5研究組血清和胎盤 miR-I227-3p miR-212-3p與妊娠結(jié)局指標(biāo)的相關(guān)性血清和胎盤 miR-I227-3p 表達水平與新生兒體質(zhì)量 .1minApgar 評分、胎盤質(zhì)量、胎盤體積呈正相關(guān)，血清和胎盤 miR-2I2-3p 表達水平與上述指標(biāo)呈負(fù)相關(guān) ，見表6。

2.6FGR的影響因素分析以是否發(fā)生FGR（是 σ=σ 1，否 ₌₀ ）作為因變量，以血清和胎盤 miR-I227-3p 、miR-212-3p、新生兒體質(zhì)量， .1minApgar 評分、胎盤質(zhì)量、胎盤體積為自變量[經(jīng)檢驗方差膨脹因子（VIF） lt;5 ，不存在嚴(yán)重共線性]，進行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，血清和胎盤 miR-2l2-3p 表達水平升高為FGR的危險因素 （Plt;0.05 ，血清和胎盤miR-1227-3p表達水平、新生兒體質(zhì)量 .1minApgar 評分、胎盤質(zhì)量、胎盤體積增加為保護因素（ （Plt; 0.05），見表7。

2.7血清和胎盤 miR-I227-3p…miR-2I2-3p 對FGR的診斷價值ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清miR-1227-3p、miR-1227-3p聯(lián)合診斷FGR的AUC均高于單獨診斷（ Z 分別為 2.702，2.713，Plt;0.05） ，胎盤miR-I227-3p…miR-2I2-3p 聯(lián)合診斷FGR的AUC均高于單獨診斷（ Z 分別為 2.710，2.718，Plt;0.05， ，見圖1、2，表8、9。

3討論

FGR常見病理機制是胎盤功能不全，當(dāng)胎盤功能受損時，胎兒不能達到其內(nèi)在的生長潛力[1]。胎盤相關(guān)FGR的主要病理過程始于妊娠早期子宮螺旋動脈重塑異常，這一缺陷導(dǎo)致母胎血流灌注不足，進而引發(fā)胎盤血管阻力增高、局部梗死灶形成及營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運障礙，最終造成胎盤功能失代償[12]。有文獻報道，我國FGR發(fā)病率為 6.39% ，而早期診斷并干預(yù)可有效提高新生兒生存率[13]。因此，探索FGR特異性生物標(biāo)志物具有重要臨床價值。

人類胎盤發(fā)育過程中，滋養(yǎng)層細(xì)胞通過侵入子宮內(nèi)膜完成母胎物質(zhì)交換，因其與腫瘤細(xì)胞生長相似，胎盤生長發(fā)育受到嚴(yán)格的基因調(diào)控，故胎盤被認(rèn)為是假惡性組織，當(dāng)滋養(yǎng)層細(xì)胞發(fā)生異常時，可能會導(dǎo)致FGR等妊娠并發(fā)癥[14-15]。miRNA是由22個核苷酸構(gòu)成的高度保守的非編碼RNA，通過降解靶mRNA、抑制蛋白質(zhì)合成，廣泛參與真核生物的細(xì)胞增殖與凋亡調(diào)控[16]。研究發(fā)現(xiàn)，多種miRNA與滋養(yǎng)層細(xì)胞疾病有關(guān)，其通過調(diào)控靶mRNA參與調(diào)節(jié)胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的生長，其表達失衡時可能加重FGR[17]。miR-1227-3p位于人19號染色體上，在多種惡性腫瘤中均有表達，其在骨肉瘤中表達顯著下調(diào)，長鏈非編碼RNAOR3A4可通過海綿 miR-I227-3p 促進骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲[I8。胎盤HTR-8/SV細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞有較多相似之處（如快速增殖、血管浸潤等），胎盤HTR-8/SV細(xì)胞異常凋亡可導(dǎo)致胎盤功能障礙，從而影響胎兒發(fā)育9。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-1227-3p對滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8/SVneo具有重要調(diào)控作用，其表達下調(diào)可抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，是影響FGR發(fā)育的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子7]。miR-2I2-3p 與低出生體質(zhì)量等不良妊娠結(jié)局有關(guān)[20]。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信號通路在滋養(yǎng)層細(xì)胞中起著重要作用， miR–2I2– 3p 表達水平降低時可顯著上調(diào)HTR-8/SVneo細(xì)胞中PI3K和AKT的磷酸化水平，激活PI3K/AKT信號通路，進而調(diào)控細(xì)胞生物學(xué)功能2]。有研究表明，miR-212-3p在FGR中表達上調(diào)，其通過靶向抑制胎盤生長因子，抑制滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖、遷移和侵襲[8]。也有研究發(fā)現(xiàn)，妊娠期高血壓產(chǎn)婦血清 miR-2I2-3p 表達水平顯著升高，且與FGR發(fā)生密切相關(guān)，提示miR-212-3p對FGR具有潛在的預(yù)測價值22]。本研究結(jié)果顯示，與健康產(chǎn)婦相比，F(xiàn)GR產(chǎn)婦血清及胎盤組織中 miR-I227-3p 表達水平均降低， ?miR-2I2-3p 表達水平均升高；且與FGR輕度組比較，重度組血清和胎盤組織中 miR-I227-3p 表達水平降低，miR-2I2-3p 表達水平升高。由此提示 miR-I227-3p 和miR-212-3p可能通過調(diào)控下游靶基因，影響滋養(yǎng)層細(xì)胞分化、凋亡等關(guān)鍵過程，進而參與FGR的病理進展。

本研究進一步發(fā)現(xiàn)，研究組新生兒體質(zhì)量、1minApgar評分、胎盤質(zhì)量、胎盤體積顯著低于對照組，提示上述參數(shù)與FGR臨床嚴(yán)重程度存在病理關(guān)聯(lián)。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清和胎盤miR-1227-3p，miR-212-3p 表達水平與上述參數(shù)均有相關(guān)性，提示二者通過調(diào)控胎盤發(fā)育影響新生兒結(jié)局。多因素Logistic回歸分析顯示，血清和胎盤 miR-2I2-3p 、miR-1227-3p表達水平，新生兒體質(zhì)量， 1minApgar 評分，胎盤質(zhì)量以及胎盤體積均為FGR的影響因素；ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清和胎盤 miR-I227-3p 、miR-212-3p聯(lián)合診斷FGR的效能優(yōu)于單獨診斷，可有效提高對FGR的診斷價值。

綜上所述，F(xiàn)GR產(chǎn)婦血清和胎盤組織中miR-1227-3p 表達水平明顯降低， ，miR-212-3p 表達水平明顯升高，二者均與妊娠結(jié)局指標(biāo)有關(guān)，且二者聯(lián)合檢測對臨床診斷FGR有較高價值。后續(xù)有待多中心、大樣本研究進一步驗證。

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