肺炎克雷伯菌感染性肺炎患者外周血Toll樣受體4/核因子KB信號(hào)通路的表達(dá)特征及臨床意義

【中圖分類號(hào)】R563.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2096-2665.2025.12.0101.04

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2025.12.032

肺炎克雷伯菌（KP）是腸桿菌科中克雷伯菌屬的重要條件致病菌，相關(guān)流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示， 9% 的克雷伯菌屬感染病例由KP引起[1]。但近年來(lái)隨著抗生素的廣泛使用，抗菌藥物選擇性壓力增強(qiáng)促使細(xì)菌耐藥基因傳播與耐藥表型擴(kuò)散，導(dǎo)致傳統(tǒng)抗菌藥物對(duì)KP的體外敏感性及臨床療效顯著下降，進(jìn)而使KP感染相關(guān)疾病死亡率呈逐年上升趨勢(shì)[2-3]。Tol樣受體4（TLR4）核因子 κB（NF-κB ）信號(hào)通路在機(jī)體炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)控及抗感染過(guò)程中發(fā)揮核心作用[4-5]?；诖耍狙芯客ㄟ^(guò)分析TLR4/NF- κB 信號(hào)通路在KP感染性肺炎患者外周血中的表達(dá)特征及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2023年6月至2024年12月贛南醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的100例KP感染性肺炎患者為肺炎組，另選取同期于贛南醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的60例健康者為健康組，進(jìn)行回顧性分析。依據(jù)臨床肺部感染評(píng)分（CPIS）將肺炎組研究對(duì)象分為輕度組（64例， lt;6 分）和重度組（36例， ?6 分）。肺炎組和健康組研究對(duì)象一般資料比較，見(jiàn)表1。本研究經(jīng)贛南醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)。納人標(biāo)準(zhǔn)：（1肺炎組研究對(duì)象符合KP感染性肺炎的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[，且臨床標(biāo)本病原菌培養(yǎng)結(jié)果顯示 KP?1 次陽(yáng)性，同時(shí)排除其他病原菌混合感染；（②肺炎組研究對(duì)象KP感染部位均位于肺部；（3年齡 ?18 歲；（④健康組研究對(duì)象體檢報(bào)告正常，無(wú)基礎(chǔ)疾病；（5臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并嚴(yán)重腎臟疾病、心血管系統(tǒng)疾病者；（②合并認(rèn)知功能障礙或既往有嚴(yán)重精神病史者。

1.2研究方法收集肺炎組和健康組研究對(duì)象臨床資料，包括年齡、性別、吸煙史、飲酒史、降鈣素原（PCT）水平、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、嗜中性粒細(xì)胞百分比（ N% ）腫瘤壞死因子 ）水平、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）水平、C反應(yīng)蛋白（CRP）水平及TLR4mRNA、NF- κB mRNA表達(dá)水平。

（1）采集所有研究對(duì)象空腹靜脈血 5mL ，置于分離膠真空采血管中，在 4‰ 環(huán)境下以 3000r/min 的轉(zhuǎn)速（離心半徑10cm ）離心 15min ，分離血清，置于 -80^°C 環(huán)境下保存待檢，采用電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析儀（羅氏診斷公司，國(guó)械注進(jìn)20182222487，型號(hào)：cobase411）檢測(cè)PCT、CRP水平；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)TNF- σ?a 、IL- 1β 水平。（②采集所有研究對(duì)象空腹靜脈血 2mL ，置于EDTA-K2抗凝管中，采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀「貝克曼庫(kù)爾特（美國(guó)）股份有限公司，國(guó)械注進(jìn)20212220192，型號(hào)： DxH900] 檢測(cè)WBC、 N% 。（3）采集所有研究對(duì)象空腹靜脈血 5mL ，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)TLR4mRNA、NF-kBmRNA的表達(dá)情況，結(jié)果取3次平行檢測(cè)的平均值。

1.3觀察指標(biāo) （1）比較肺炎組和健康組研究對(duì)象臨床資料。（2采用多因素Logistic回歸模型分析影響KP感染性肺炎發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。（③繪制受試者操作特征（ROC）曲線，評(píng)估TLR4、NF-kB聯(lián)合檢測(cè)對(duì)KP感染性肺炎的診斷價(jià)值。（4比較輕度組和重度組研究對(duì)象的TLR4mRNA、NF-kBmRNA表達(dá)情況。（5分析TLR4、NF- σ_κB 表達(dá)水平與CPIS評(píng)分的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以[例 （%）] 表示，采用 x² 檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（ ）表示，采用 t 檢驗(yàn)；多因素采用Logistic回歸模型分析；預(yù)測(cè)價(jià)值采用ROC曲線分析；相關(guān)性使用Pearson檢驗(yàn)分析， ∣r 值越大表示相關(guān)性越強(qiáng)。當(dāng) Plt;0.05 時(shí)，提示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1肺炎組和健康組研究對(duì)象臨床資料比較肺炎組和健康組研究對(duì)象年齡、性別、吸煙史、飲酒史比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 Pgt;0.05 ）。肺炎組研究對(duì)象PCT水平、WBC、 N% 、TNF- σ?a 水平、 IL-1β 水平、CRP水平及TLR4mRNA、NF-kBmRNA表達(dá)水平均高于健康組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 Plt;0.05 ），見(jiàn)表1。

2.2影響KP感染性肺炎發(fā)生的多因素Logistic回歸分析將表1中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素作為自變量（原值輸入），將KP感染性肺炎發(fā)生情況作為因變量（ 0= 未發(fā)生， 1= 發(fā)生），進(jìn)行量化賦值，納入多因素Logistic回歸分析模型。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示：PCT水平高、WBC高、 N% 高、TNF- ??a 水平高、IL-1β水平高、CRP水平高、TLR4mRNA表達(dá)水平高、NF-κBmRNA表達(dá)水平高均為影響KP感染性肺炎發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（均Plt;0.05 ），見(jiàn)表2。

2.3TLR4、NF- ?κB 聯(lián)合檢測(cè)診斷KP感染性肺炎的ROC曲線分析ROC曲線分析結(jié)果顯示：TLR4、NF- ?κB 聯(lián)合檢測(cè)診斷KP感染性肺炎的曲線下面積（AUC）為0.939，敏感度為0.850，特異度為0.817，均高于二者單一診斷（均 Plt;0.05 ），見(jiàn)表3、圖1。

2.4輕度組和重度組研究對(duì)象的TLR4mRNA、NF- σ_κB mRNA表達(dá)情況比較重度組研究對(duì)象 TLR4mRNA 及NF-kBmRNA表達(dá)水平均高于輕度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 Plt;0.05 ），見(jiàn)表4。

2.5TLR4、NF- σ_?κB 表達(dá)水平與CPIS評(píng)分的相關(guān)性分析Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示：TLR4、NF- σ_?κB 表達(dá)水平與CPIS評(píng)分均呈正相關(guān)（ r 值 =0.383 、0.544，均Plt;0.05 ）。

3討論

肺炎是由病毒、細(xì)菌或其他病原體引發(fā)的感染性疾病，主要累及肺部遠(yuǎn)端氣管、肺泡及肺間質(zhì)等組織。細(xì)菌性肺炎是臨床常見(jiàn)類型，其中KP是醫(yī)院獲得性肺炎的常見(jiàn)病原菌，尤其好發(fā)于免疫力低下人群（如糖尿病患者、長(zhǎng)期臥床患者等），可導(dǎo)致劇烈咳嗽、咳痰（可呈膿性或血性）、胸痛等癥狀，嚴(yán)重時(shí)會(huì)損傷肺部組織[8]。因此，早期精準(zhǔn)診斷與治療對(duì)控制KP感染性肺炎病情進(jìn)展至關(guān)重要。

本研究多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示：PCT水平高、WBC高、 N% 高、TNF- σ?a 水平高、IL-1β水平高、CRP水平高、TLR4mRNA表達(dá)水平高、NF-κBmRNA表達(dá)水平高均為影響KP感染性肺炎發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。分析原因?yàn)?，PCT、WBC、 N% 、TNF- ??a 、 IL-1β 及CRP等均為典型的炎癥標(biāo)志物，與感染嚴(yán)重程度密切相關(guān)。在革蘭氏陰性菌（如KP）感染機(jī)體后，上述指標(biāo)水平顯著升高，可輔助臨床判斷感染性質(zhì)、評(píng)估病情進(jìn)展及預(yù)后，為臨床治療提供重要參考[9-1]。TLR4作為跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)受體，廣泛分布于巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面，可特異性地識(shí)別KP釋放的脂多糖等病原相關(guān)分子模式（PAMPs），啟動(dòng)下游NF- σ_κB 信號(hào)通路。NF-KB信號(hào)通路被激活后轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核，與促炎因子基因啟動(dòng)子結(jié)合，可促進(jìn)炎癥因子表達(dá)，引發(fā)局部及全身炎癥反應(yīng)[12-13]。

本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示：TLR4、NF-KB聯(lián)合檢測(cè)診斷KP感染性肺炎的AUC為0.939，敏感度為0.850，特異度為0.817，均高于二者單一診斷；重度組研究對(duì)象TLR4mRNA及NF-kBmRNA表達(dá)水平均高于輕度組；Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示：TLR4、NF-kB表達(dá)水平與CPIS評(píng)分均呈正相關(guān)。這提示TLR4/NF-KB信號(hào)通路在KP感染性肺炎中參與炎癥調(diào)控，且表達(dá)水平可反映病情嚴(yán)重程度，二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)疾病診斷具有較高應(yīng)用價(jià)值。分析原因?yàn)?，在病理機(jī)制層面，TLR4作為模式識(shí)別受體，可特異性地識(shí)別KP表面的脂多糖等致病分子，激活下游NF-KB信號(hào)通路，二者形成級(jí)聯(lián)反應(yīng)，協(xié)同調(diào)控炎癥因子網(wǎng)絡(luò)[14]。相較于單一指標(biāo)，聯(lián)合檢測(cè)能更全面地捕捉病原體刺激下宿主免疫應(yīng)答的整體狀態(tài)，減少因單一標(biāo)志物局限性導(dǎo)致的漏診、誤診，從而提升診斷的敏感度與特異度。在病情進(jìn)展層面，隨著KP感染加重，肺部組織損傷與炎癥反應(yīng)呈遞進(jìn)式發(fā)展。重度感染時(shí)，KP釋放的病原體相關(guān)分子持續(xù)刺激TLR4，使其激活NF-KB通路的強(qiáng)度與持續(xù)時(shí)間增加，促使炎癥因子大量釋放，進(jìn)一步加劇肺組織損傷，還會(huì)造成肺泡毛細(xì)血管通透性增加及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，從而導(dǎo)致CPIS評(píng)分升高，形成“感染－炎癥激活－肺損傷加重”的惡性循環(huán)[15]。因此，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)與炎癥通路相關(guān)的生物標(biāo)志物組合，有助于精準(zhǔn)評(píng)估病情嚴(yán)重程度及預(yù)后。TLR4/NF-kB聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果和表達(dá)水平與病情的相關(guān)性，為臨床評(píng)估KP感染性肺炎嚴(yán)重程度、進(jìn)行個(gè)體化治療提供依據(jù)，臨床可通過(guò)調(diào)控炎癥通路（如靶向抗炎治療）阻斷病情進(jìn)展，有望減輕肺損傷，改善患者預(yù)后。

綜上所述，PCT水平高、WBC高、 N% 高、TNF- σ?a 水平高、IL-1β水平高、CRP水平高、TLR4mRNA表達(dá)水平高、NF-kBmRNA表達(dá)水平高均為影響KP感染性肺炎發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，且TLR4、NF-kB聯(lián)合檢測(cè)診斷KP感染性肺炎的應(yīng)用價(jià)值較高，二者均與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可為臨床輔助診斷KP感染性肺炎患者提供新思路。

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