蔓柏生發(fā)方對(duì)雄激素性脫發(fā)小鼠Th1/Th2/Th17/Treg平衡的影響

[摘要]目的：探討蔓柏生發(fā)方對(duì)雄激素性脫發(fā)（Androgenetic alopecia，AGA）小鼠外周血中Th1/Th2/Th17/Treg的調(diào)節(jié)作用。方法：采用皮下注射丙酸睪酮液建立雄激素性脫發(fā)小鼠模型，按照不同分組進(jìn)行處理。30 d后記錄小鼠毛發(fā)的生長情況，留取外周血及脫毛區(qū)皮膚組織，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測其中Th1/Th2/Th17/Treg各亞群的比例，RT-PCR法檢測小鼠皮膚組織中細(xì)胞因子的表達(dá)。結(jié)果：與模型組比較，蔓柏生發(fā)方能夠促進(jìn)AGA小鼠脫毛區(qū)的毛發(fā)生長，蔓柏生發(fā)方干預(yù)的AGA小鼠外周血中Th1、Th17亞群比例上調(diào)，Th2、Treg亞群比例下調(diào)，小鼠皮膚組織中IFN-γ、IL-1β、IL-17A、IL-17F含量下降，IL-4、IL-10、TGF-β含量升高，伴有劑量依賴性。結(jié)論：蔓柏生發(fā)方能夠促進(jìn)AGA小鼠的毛發(fā)生長，與其調(diào)節(jié)小鼠外周血中T細(xì)胞亞群的分布有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]雄激素性脫發(fā)（AGA）；Th1/Th2/Th17/Treg平衡；蔓柏生發(fā)方；免疫調(diào)節(jié)

[中圖分類號(hào)]R285.5" " [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A" " [文章編號(hào)]1008-6455（2025）08-0001-06

Effect of Manbaishengfa Formula on Th1/Th2/Th17/Treg Balance in Androgenic Alopecia Mice

XIAO Changqing1，2， PENG Liqian1，2， WANG Yushi3， LI Yanhong1，2， HUANG Jiusui1，2， LIANG Bihua1，2， ZHAO Tie1，2， ZHU Huilan1，2， LU Yue3，LI Zhenjie1，2

（ 1. Department of Dermatology， Guangzhou Dermatology Hospital， Guangzhou 510095， Guangdong， China; 2.Institute of Dermatology， Guangzhou Medical University， Guangzhou 510095， Guangdong， China; 3.The Second Clinical Medical College， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510120， Guangdong， China ）

Abstract： Objective" To investigate the regulatory effect of Manbaishengfa formula on the balance of T cell subsets Th1/Th2/Th17/Treg in peripheral blood of androgenic alopecia mice. Methods" Testosterone propionate was injected subcutaneously into the shaving area on the back of mice to establish the model of androgenic alopecia. AGA mice were divided into blank group， model group， minoxidil tincture group and high/ medium/ low dose groups of Manbaishengfa formula. After 30 days， the growth of mouse back hair was observed and recorded. The peripheral blood of mice was taken， and the proportion of Th1/Th2/Th17/Treg subsets was detected by flow cytometry. The expression of cytokine in mouse skin was detected by RT-PCR. Results" Manbaishengfa formula could promote hair growth in depilation area of AGA mice compared with model group. The proportion of Th1 and Th17 subsets in Manbai shengfa formula group was up-regulated， and the proportion of Th2 and Treg subsets was down regulated compared with AGA mice. In addition， the content of IFN-γ， IL-1β， IL-17A and IL-17F in skin tissue decreased and the content of IL-4， IL-10 and TGF-β increased in Manbaishengfa formula group in a dose-dependent manner. Conclusion" Manbaishengfa formula can promote the hair growth of AGA mice， regulate the balance of Th1/Th2/Th17/Treg cell subsets in the peripheral blood， and normalize the distribution of T cell subsets in peripheral blood of AGA mice.

Key words： androgenic alopecia（ AGA ）; Th1/Th2/Th17/Treg; Manbaishengfa formula; immune regulation

雄激素性脫發(fā)（AGA），又稱脂溢性脫發(fā)或早禿，是最為常見的脫發(fā)類型，其發(fā)病與遺傳、雄激素水平/受體、分子機(jī)制等相關(guān)，是以進(jìn)行性毛囊微小化和免疫炎癥反應(yīng)異常為特征的慢性脫發(fā)性疾病[1]，毛干直徑差異＞20%是診斷AGA早期病程的重要依據(jù)[2]，額部發(fā)際逐漸后退和頂部頭發(fā)密度進(jìn)行性減少是其主要的臨床表現(xiàn)。免疫功能失調(diào)在病理性脫發(fā)中的作用在近年來得到進(jìn)一步的研究，其中炎癥細(xì)胞局部的浸潤聚集并作用于毛囊致使毛囊干細(xì)胞受損，是免疫介導(dǎo)脫發(fā)的常見形式[3]，而在AGA中重度患者毛囊周圍的炎癥以及纖維化的發(fā)生率升高明顯，這種現(xiàn)象被認(rèn)為是炎癥細(xì)胞浸潤影響到毛囊細(xì)胞的凋亡所引起[4]。有研究發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞功能失衡參與了AGA的發(fā)病及病程進(jìn)展[5-6]，并指出調(diào)節(jié)T細(xì)胞相關(guān)因子的表達(dá)可能對(duì)AGA發(fā)揮一定的治療作用[7]。

蔓柏生發(fā)方是廣州市名中醫(yī)李振潔教授治療雄激素性脫發(fā)的臨床經(jīng)驗(yàn)方，以疏風(fēng)清熱祛濕、補(bǔ)腎涼血化瘀為治法，全方由蔓荊子、側(cè)柏葉、何首烏、旱蓮草等八味中藥組成，在多年的臨床實(shí)踐中療效肯定，同時(shí)具備安全性高以及不良反應(yīng)小的優(yōu)點(diǎn)，已獲得國內(nèi)專利授權(quán)（ZL 202111364794.6）。蔓柏生發(fā)方作為臨床治療雄激素性脫發(fā)的良方，其作用機(jī)制尚未明確。本研究旨在探索雄激素性脫發(fā)小鼠外周血中T細(xì)胞亞群的變化及蔓柏生發(fā)方對(duì)雄激素性脫發(fā)小鼠Th1/Th2/Th17/Treg平衡的影響。

1" 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：選取36只雄性C57BL/6小鼠，6～8周齡，體質(zhì)量18～22 g，購于廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SYXK（粵）2018-0094]，于SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案已通過廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有的實(shí)驗(yàn)操作流程嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理的相關(guān)規(guī)定。

1.2 藥物與試劑：蔓柏生發(fā)方由蔓荊子、側(cè)柏葉、黃柏、旱蓮草、枸杞子、川芎、白芷、補(bǔ)骨脂8味中藥（購自廣東康美藥業(yè)股份有限公司）按照2∶2∶1∶2∶2∶1∶1∶1比例組成，取原料藥10倍重量的水煎煮3次，每次加水8～12倍量，武火煮沸后，文火煎30～45 min，合并水煎液，過濾，濾液減壓濃縮至25℃下相對(duì)密度為1.30的稠膏；5%米諾地爾酊購自浙江萬晟藥業(yè)有限公司（貨號(hào)：H20010714）；丙酸睪酮購于上海麥克林生化科技有限公司（貨號(hào)：T101368）；FITC anti-CD4抗體購自美國Biolegend公司（貨號(hào)：100509）；APC anti-CD25抗體購自美國Biolegend公司（貨號(hào)：102012）；PE anti-FoxP3抗體購自美國Biolegend公司（貨號(hào)：126404）；APC/Cyanine 7 anti-IFN-γ抗體購自美國Biolegend公司（貨號(hào)：505850）；PE/Cyanine 7 anti-IL-4抗體購自美國Biolegend公司（貨號(hào)：504118）；PerCP/ Cyanine 5.5 anti-IL-17A抗體購自美國Biolegend公司（貨號(hào)：506920）；Trizol購自美國invitrogen公司（貨號(hào)：15596026）；反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自日本Takara公司（貨號(hào)：RR047A）；SYBR Premix Ex Taq Ⅱ熒光定量PCR試劑盒購自Takara公司（貨號(hào)：RR820A）。

1.3 儀器：5810R型低溫高速離心機(jī)（德國Eppendorf公司）；Class Ⅱ型超凈工作臺(tái)（美國EscoAirstream公司）；流式細(xì)胞儀（美國Beckman公司）；ViiA7型熒光定量PCR儀（美國Thermo公司）。

1.4 方法

1.4.1 動(dòng)物造模及給藥：將C57BL/6小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性藥物組以及蔓柏生發(fā)方高、中、低組6組，每組6只。在SPF級(jí)動(dòng)物房適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，第1天剃除各小鼠背部2 cm×3 cm面積的毛發(fā)，除空白對(duì)照組外，其他組每日采用丙酸睪酮稀釋液在小鼠背部脫毛區(qū)域進(jìn)行皮下多點(diǎn)注射，總劑量為0.1 mg/d；此外，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組每日在小鼠剃毛處涂生理鹽水1.0 ml/d，陽性藥物組涂5%米諾地爾酊1.0 ml/d，蔓柏生發(fā)方高、中、低組分別外涂不同濃度（0.5 g/kg、0.25 g/kg、0.125 g/kg）的蔓柏生發(fā)方1.0 ml/d。連續(xù)造模并給藥30 d。

1.4.2 小鼠背部脫毛處毛發(fā)的生長情況觀察：停止給藥次日，采用數(shù)碼相機(jī)照相方法記錄各組小鼠背部毛發(fā)的生長情況。給藥30 d后，將各組小鼠脫頸處死，在背部脫毛處切取約2 cm×2 cm皮膚樣本，用4%多聚甲醛固定后，用石蠟包埋并切片。隨后切片經(jīng)過脫蠟染色、HE染色、脫水透明和封片固定處理，在顯微鏡下觀察小鼠脫毛處皮膚組織的組織形態(tài)學(xué)變化并拍照記錄。

1.4.3 小鼠外周血Th1/Th2/Th17/Treg細(xì)胞變化情況：采用流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠外周血中Th1/Th2/Th17/Treg細(xì)胞的變化情況，停止給藥次日，將實(shí)驗(yàn)小鼠處死后摘除眼球取血，用于檢測外周血中T細(xì)胞亞群的變化情況。將外周血與紅細(xì)胞裂解液按照1∶1混勻，靜置4～5 min，待紅細(xì)胞完全破碎后加入2 ml PBS緩沖液稀釋，1 200 rpm離心5 min，去除上清；將沉淀用PBS緩沖液洗滌兩遍后，加入5 ml FACS buffer重懸細(xì)胞，1 200 rpm離心5 min，去上清；收集細(xì)胞后進(jìn)行染色。染色步驟如下：①配置表面抗體染色工作液：包括CD4-FITC（1∶100）和CD25-APC（1∶200）抗體。將上述獲得的細(xì)胞，經(jīng)洗滌離心后，棄去上清。加入上述400微升/樣本的抗體工作液重懸細(xì)胞?；靹蚝?℃避光孵育30 min，孵育完成后使用FACs buffer洗滌。②加入固定破膜工作液重懸細(xì)胞，200微升/樣本（加入固定破膜液后立即輕輕混勻）。室溫放置60 min。完成后，使用1x perm wash buffer洗滌細(xì)胞。③配置胞內(nèi)染色工作液：400微升/樣本，使用1x perm wash buffer稀釋抗體工作液。稀釋比例分別為：IFN-γ-APC/Cy7（1∶100）、IL4-PE/Cy7（1∶100）、IL-17A -PerCP/Cy5.5（1∶100）、FoxP3-PE（1∶100）。使用1x perm wash buffer稀釋抗體工作液，加入上述400微升/樣本的抗體工作液重懸細(xì)胞。4℃避光孵育30 min。④洗滌（使用1x perm wash buffer洗滌）后，加入FACs buffer重懸，避光保存?zhèn)溆谩?zhǔn)備好的細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀進(jìn)行上機(jī)分析，采用Flowjo10.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理。

1.4.4 檢測小鼠皮膚中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-1β、IL-17A、IL-17F、IL-4、IL-10、TFG-β的表達(dá)：實(shí)驗(yàn)小鼠處死后將背部脫毛區(qū)的毛發(fā)褪去，留取脫毛區(qū)皮膚，制成組織勻漿，采用RT-PCR法檢測細(xì)胞因子IFN-γ、IL-1β、IL-17A、IL-17F、IL-4、IL-10、TGF-β的表達(dá)，引物序列如下表。見表1。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)采用SPSS25.0進(jìn)行分析，其中計(jì)量資料滿足正態(tài)分布的采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）表示，不滿足正態(tài)分布，則用M（P25～P75）表示。P＜0.05時(shí)認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2" 結(jié)果

2.1 蔓柏生發(fā)方對(duì)雄激素性脫發(fā)小鼠毛發(fā)生長情況的影響：停藥后觀察并拍照記錄了各組小鼠背部毛發(fā)的生長情況，空白組小鼠背部剃毛處的毛發(fā)較其他部位稍稀疏，毛發(fā)生長基本已完全覆蓋，外觀大致呈黑色；模型組小鼠脫毛處皮膚基本無毛發(fā)生長，外觀呈灰白色，脫毛皮膚邊緣處可見多個(gè)潰瘍面形成，提示丙酸睪酮能夠抑制小鼠的毛發(fā)生長；米諾地爾酊處理作為陽性藥物組，可見小鼠背部脫毛部分有新生毛發(fā)長出，呈斑片狀，皮膚完整未見皮損；蔓柏生發(fā)方各劑量組小鼠背部脫毛區(qū)面積縮小，可見到新生毛發(fā)，并呈明顯的劑量依賴性，在高劑量組小鼠脫毛區(qū)皮膚均有新生毛發(fā)長出，呈黑灰色，且三組小鼠的背部皮膚均無明顯皮損，表明蔓柏生發(fā)方促進(jìn)了雄激素性脫發(fā)小鼠的毛發(fā)生長。見圖1。

2.2 小鼠背部脫毛區(qū)域的皮膚毛囊組織形態(tài)學(xué)變化：空白對(duì)照組中，毛囊數(shù)量較多且分布均勻，多數(shù)為生長期毛囊，毛干色素深且粗壯，整體呈現(xiàn)較好的增生狀態(tài)；AGA模型組中毛囊多數(shù)為毛干色素淺的休止期毛囊，數(shù)量明顯減少且分布稀疏，整體呈現(xiàn)退行期或休止期狀態(tài)；米諾地爾酊組與AGA模型組相比可見毛囊數(shù)量增多、直徑變粗以及毛干色深現(xiàn)象；而在蔓柏生發(fā)方各劑量組中，與AGA模型組比較，均呈現(xiàn)毛囊數(shù)量增多及毛干色澤加深的現(xiàn)象，并呈明顯的劑量依賴性，且中、高劑量組還表現(xiàn)出毛囊直徑增粗和毛乳頭增大的趨勢，高劑量組毛囊呈現(xiàn)生長期樣形態(tài)，接近空白組毛囊形態(tài)，這表明蔓柏生發(fā)方能夠增加雄激素性脫發(fā)小鼠的毛囊數(shù)量，同時(shí)有促進(jìn)休止期毛囊向生長期毛囊轉(zhuǎn)化的作用，促進(jìn)雄激素性脫發(fā)小鼠的毛發(fā)生長。見圖2。

圖2" 給藥30 d后各組小鼠背部脫毛組織的病理變化

2.3 蔓柏生發(fā)方對(duì)雄激素性脫發(fā)小鼠外周血中Th1/Th17細(xì)胞亞群的影響：采用流式細(xì)胞術(shù)來檢測小鼠外周血中Th1/Th17細(xì)胞亞群變化情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3～4。圖3A顯示與空白組小鼠比較，丙酸睪酮誘導(dǎo)的AGA模型組小鼠外周血中Th1細(xì)胞亞群（CD4+IFN-γ+）比例增加；與模型組小鼠比較，陽性藥物米諾地爾酊組中AGA小鼠外周血中Th1細(xì)胞亞群比例下降，實(shí)驗(yàn)藥物蔓柏生發(fā)方高、中、低劑量組小鼠外周血中Th1細(xì)胞亞群比例表現(xiàn)出不同程度的下降，且呈現(xiàn)出明顯的濃度依賴性。圖3B中Th17細(xì)胞亞群（CD4+Th17+）比例呈現(xiàn)與Th1相似的情況，AGA模型小鼠中Th17亞群較正常小鼠明顯增加，陽性藥物和蔓柏生發(fā)方則均逆轉(zhuǎn)了這種趨勢，其中蔓柏生發(fā)方高劑量組對(duì)于Th17亞群的調(diào)節(jié)作用基本與米諾地爾酊相當(dāng)。圖4統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明，與空白組比較，模型小鼠的上述變化均表現(xiàn)出了顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.001）；與模型組比較，米諾地爾酊和蔓柏生發(fā)方各劑量組對(duì)Th1、Th17亞群的調(diào)節(jié)作用也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.4 蔓柏生發(fā)方對(duì)雄激素性脫發(fā)小鼠外周血中Th2/Treg細(xì)胞亞群的影響：對(duì)各組小鼠外周血中Th2/Treg細(xì)胞亞群的變化進(jìn)行分析，結(jié)果見圖3～4。與空白組小鼠比，Th2亞群（CD4+IL-4+）在雄激素性脫發(fā)小鼠中的比例表現(xiàn)出明顯的下降趨勢（P＜0.001），而米諾地爾酊和蔓柏生發(fā)方各劑量均能夠逆轉(zhuǎn)這種趨勢，米諾地爾酊對(duì)此表現(xiàn)出了上調(diào)的趨勢，但無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而蔓柏生發(fā)方中、高劑量較米諾地爾酊表現(xiàn)出更好的調(diào)節(jié)作用（P＜0.01），這種調(diào)節(jié)同時(shí)具備濃度依賴性。Treg細(xì)胞群以CD25+FOXP3+為特點(diǎn)，結(jié)果中模型小鼠Treg細(xì)胞亞群較正常小鼠中的比例下降明顯（P＜0.001），米諾地爾酊上調(diào)了Treg細(xì)胞群的比例（P＜0.05），而在蔓柏生發(fā)方干預(yù)組中，低劑量組未表現(xiàn)出明顯的調(diào)節(jié)作用，中、高劑量對(duì)Treg細(xì)胞群比例有明顯的上調(diào)作用（P＜0.01）。

2.5 蔓柏生發(fā)方對(duì)雄激素性脫發(fā)小鼠皮膚組織中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-1β、IL-17A、IL-17F、IL-4、IL-10、TGF-β的影響：檢測小鼠背部皮膚組織中各細(xì)胞因子的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組中炎癥因子IFN-γ、IL-1β、IL-17A、IL-17F的表達(dá)升高，炎癥負(fù)性因子IL-10、IL-4、TGF-β的表達(dá)下降，并且具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）；與模型組比較，米諾地爾酊組中IFN-γ、IL-1β、IL-17A、IL-17F明顯下調(diào)，TGF-β上調(diào)，其中IL-4表現(xiàn)出了下調(diào)趨勢，IL-10上調(diào)，但均無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，蔓柏生發(fā)方各劑量組與米諾地爾酊的調(diào)節(jié)趨勢基本一致，但對(duì)IL-10表現(xiàn)出了上調(diào)作用，并伴隨良好的濃度依賴性。在蔓柏生發(fā)方高劑量組中，對(duì)各因子的調(diào)節(jié)基本與米諾地爾酊相當(dāng)，對(duì)于IFN-γ、IL-17A、IL-4以及TGF-β的調(diào)節(jié)作用甚至超過了陽性藥物米諾地爾酊。見圖5。

3" 討論

作為臨床中最常見的脫發(fā)類型，雄激素性脫發(fā)的患者面臨多種危害，如動(dòng)脈粥樣硬化、心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)、肥胖、高尿酸血癥、代謝綜合征等[8-9]，心理失衡如焦慮、抑郁、自卑等不良情緒[10]，嚴(yán)重的影響患者的生活質(zhì)量，因此亟需有效的措施來干預(yù)AGA的發(fā)生和發(fā)展。對(duì)AGA發(fā)病機(jī)制的研究有益于尋找切實(shí)有效的治療方法，早期的研究指出，AGA的發(fā)生與多基因遺傳、雄激素水平升高、雄激素受體和5-a還原酶增加、包括Wnt/β-catenin、TGFβ/激活素/BMP等信號(hào)通路異常在內(nèi)的分子機(jī)制和微炎癥機(jī)制有密切關(guān)系[11]，其中機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)的破壞促使炎癥相關(guān)的毛囊細(xì)胞凋亡以及生長周期變化是近年來脫發(fā)的研究熱點(diǎn)之一[3]，與炎癥相關(guān)的研究對(duì)象主要有巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞產(chǎn)生的免疫應(yīng)答以及它們所產(chǎn)生的細(xì)胞因子等[5-7，12-13]。

本研究采用皮下多點(diǎn)注射丙酸睪酮來制備AGA小鼠模型，同時(shí)給予蔓柏生發(fā)方進(jìn)行干預(yù)處理，通過檢測小鼠外周血中T細(xì)胞亞群和皮膚組織中相關(guān)細(xì)胞因子的變化情況來探索蔓柏生發(fā)方的作用機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：首先，蔓柏生發(fā)方能夠有效促進(jìn)AGA小鼠脫毛區(qū)的毛發(fā)生長。其次，丙酸睪酮誘導(dǎo)的AGA模型小鼠外周血中Th1/Th17炎性T細(xì)胞亞群的比例升高，而抗炎性Th2/Treg細(xì)胞亞群比例較正常小鼠下降，皮膚組織中促炎因子表達(dá)升高，炎癥負(fù)性因子表達(dá)下降；蔓柏生發(fā)方則逆轉(zhuǎn)了這種變化，使得促炎性T細(xì)胞的比例下降，炎癥抑制性T細(xì)胞比例增加，同時(shí)皮膚組織中促炎因子含量降低，抑炎因子含量升高。

大量研究表明T細(xì)胞失衡參與了脫發(fā)的發(fā)生，其中包含了Th1/Th2比例上調(diào)、T相關(guān)的細(xì)胞因子（如IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17、IL-23等）以及通路分子（JAK2、JAK3）的變化[14]，而局部皮膚中Th1、Th17的下調(diào)、IFN-γ分泌減少與患者脫發(fā)癥狀的改善有關(guān)[15]。值得一提的是這些研究多數(shù)是圍繞斑禿及其他類型的脫發(fā)展開的，有關(guān)AGA中免疫細(xì)胞群體對(duì)治療的反應(yīng)是怎樣的研究有限，有研究表明米諾地爾聯(lián)合倍他米松應(yīng)用于AGA中療效比單獨(dú)使用米諾地爾更好，并指出在治療時(shí)適當(dāng)?shù)募尤肟寡姿幬锟赡苡兄谔岣逜GA患者新生頭發(fā)的生長[16]，這表明在AGA中針對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)能夠發(fā)揮一定的療效。IFN-γ、IL-4、IL-17、CD25FoxP3分別是Th1、Th2、Th17、Treg細(xì)胞亞群的重要代表分子[17]。本研究發(fā)現(xiàn)了蔓柏生發(fā)方治療AGA的機(jī)制與調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群有關(guān)，從上調(diào)炎癥抑制性Th2、Treg細(xì)胞亞群的比例，下調(diào)Th1、Th17細(xì)胞亞群的比例，與既往發(fā)現(xiàn)的其他類型脫發(fā)治療機(jī)制方面存在相似之處，提示通過調(diào)節(jié)Th1/Th2/Th17/Treg免疫細(xì)胞群體的平衡可能是治療AGA的一個(gè)靶點(diǎn)。胡俊等發(fā)現(xiàn)AGA小鼠皮膚組織中TGF-β的調(diào)節(jié)與脫發(fā)癥狀的改善有關(guān)[18]，促炎細(xì)胞因子（如白細(xì)胞介素-1、腫瘤壞死因子等）在體外能夠直接抑制毛發(fā)生長并誘導(dǎo)毛囊凋亡，且炎性細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)可能誘導(dǎo)毛發(fā)生長停滯及退化，本研究蔓柏生發(fā)方通過下調(diào)AGA小鼠局部皮膚中促炎因子IFN-γ、IL-1β、IL-17的分泌，上調(diào)負(fù)性炎癥因子IL-4、IL-10表達(dá)，來促進(jìn)新生毛發(fā)的生長。此外，本研究發(fā)現(xiàn)了蔓柏生發(fā)方能夠升高TGF-β的表達(dá)，它是Treg細(xì)胞的重要表達(dá)分子，在許多研究中被指出它能夠誘導(dǎo)毛囊的退行期，并且抑制上皮細(xì)胞的增殖，與AGA的發(fā)病有關(guān)[11，17]，但也有研究表明了TGF-β2在胚胎發(fā)育過程中能夠誘導(dǎo)毛囊形成，雖然它也可對(duì)毛發(fā)生長表現(xiàn)出一定的抑制作用，激活TGF-β信號(hào)通路能夠誘導(dǎo)毛發(fā)再生。針對(duì)AGA患者與性別相關(guān)的因子研究指出了TGF-β僅在男性中升高明顯，而在女性脫發(fā)患者中無明顯的意義[19]，這表明TGF-β在AGA發(fā)病中的作用仍需進(jìn)一步的探索。本研究從免疫學(xué)角度考慮到蔓柏生發(fā)方上調(diào)TGF-β分泌，同時(shí)表現(xiàn)出促進(jìn)毛發(fā)生長的作用，可能與其抑制炎癥，減輕炎癥誘導(dǎo)毛囊的凋亡作用有關(guān)，這需要進(jìn)一步的研究來證實(shí)。

藥物治療仍是AGA患者最常選用且有效的手段之一，F(xiàn)DA批準(zhǔn)用于AGA的藥物僅米諾地爾和非那雄胺，停藥后癥狀加重以及不良反應(yīng)是治療失敗的主要原因[20]。中醫(yī)藥治療遵從整體原則，對(duì)于AGA治療具有獨(dú)特的優(yōu)勢。歷代各家對(duì)于脫發(fā)的病因病機(jī)認(rèn)識(shí)不盡相同，但總體認(rèn)為其病因以本虛標(biāo)實(shí)為主，認(rèn)為實(shí)邪以濕、熱、瘀為主，虛多涉及肺肝脾腎四臟以及血虛風(fēng)燥、陰虛為主要病機(jī)。濕邪被認(rèn)為是居于首位的發(fā)病因素[21]，蔓柏生發(fā)方主要針對(duì)AGA的濕熱病機(jī)，在清熱祛風(fēng)除濕的同時(shí)兼顧補(bǔ)腎疏肝健脾，標(biāo)本兼顧，療效確切。

總之，本研究結(jié)果表明蔓柏生發(fā)方能夠有效促進(jìn)雄激素性脫發(fā)小鼠的毛發(fā)生長，并調(diào)節(jié)了AGA小鼠外周血中Th1/Th17/Th2/Treg細(xì)胞亞群的平衡，促使AGA小鼠外周血中T細(xì)胞亞群的分布向正常小鼠靠近，這可能是其發(fā)揮作用的機(jī)制之一。

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[收稿日期]2024-02-21

本文引用格式：肖常青，彭麗倩，王雨詩，等.蔓柏生發(fā)方對(duì)雄激素性脫發(fā)小鼠Th1/Th2/Th17/Treg平衡的影響[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2025，34（8）：1-6.