冬櫻花組培快繁技術研究

中圖分類號：S685.99 文獻標志碼：A 文章編號：1002-2910（2025）03-0013-05

Research on tissue culture and rapid propagation technology of Cerasus cerasoides

XULi1，ZHANGBing2，TANYuel，ZONGXiaojuan1， ZENG Peiyuan1，WEI Hairongl （1.ShandongInstituteofomologyai'an，handong2oo，China;.iyueistrictForestryProtectiod DevelopmentCenter，Tai’anCity，Tai'an，Shandong27ooo，China）

Abstract：A rapid in vitro propagation system was successfully established for Cerasus cerasoides（D.Don）Sok.using semi-lignified stem segments as explants.The optimal surface sterilization method involved sequential treatment with 75% ethanol for 30s and 5% sodium hypochlorite solution for 10min .Theinitial culturemediumwasMS basal medium supplemented with 1.0mg/L 6-benzylaminopurine（6-BA）and 0.1mg/L indole -3- butyricacid（IBA）.The optimal proliferation medium was MS containing 0.3mg/L 6-BAand 0.2mg/L IBA，yielding a multiplication coefficient of 4.6.Rooting was optimally induced in half-strength MS medium supplementedwith 0.5mg/L α-naphthalene acetic acid（NAA），resulting in 84% rooting rate with an average of 6.24 roots per plantlet.The survival rate of transplanting using perlite + peat soil + vermiculite （volume ratio 1：3：2 ）substrateis 92%

Key words：Cerasus cerasoides;proliferation culture;rooting cultivation; transplant

冬櫻花[Cerasuscerasoides（D.Don）Sok.]為薔薇科（Rosaceae）櫻屬（Cerasus）落葉喬木，又名冬海棠，小陽春，因冬季開花而得名，是中國野生櫻花資源中唯一在冬季開花的櫻花種類[1]。冬櫻花是云南特有的野生鄉(xiāng)土樹種，抗逆性強，耐干旱，耐貧瘠，具有很強的適應性，主要分布于高海拔地區(qū)的山坡、山谷、溪邊和叢林[2]。除了作為觀賞樹種，還可用作櫻屬植物的砧木，嫁接親和力強，成活率高，因此，冬櫻花是一種十分優(yōu)良的櫻屬種質(zhì)資源[3]。

目前，關于冬櫻花的研究主要集中在冬櫻花群落學特征、生態(tài)地理學、開花習性、物候及觀賞期和繁殖等方面[4-6]。冬櫻花的繁殖主要是通過種子繁殖，也可以通過捍插、嫁接等無性方式進行繁殖[7-10]。但是受種子本身質(zhì)量，播種條件以及管理情況的影響，種子繁殖存在發(fā)芽率低和出苗不整齊的問題。捍插繁殖受季節(jié)限制，同時需要大量的枝條，還存在捍插技術難度大等問題，不能短時間內(nèi)獲得大量苗木，無法滿足市場需要。與傳統(tǒng)繁殖方式相比，組培快繁技術不受季節(jié)影響，能縮短繁育周期，提高繁殖系數(shù)，滿足生產(chǎn)推廣的需求，而且能確保冬櫻花的穩(wěn)定遺傳。盡管冬櫻花的應用價值極高，但關于冬櫻花組培快繁的相關研究較少。僅有的報道是以冬櫻花的花梗、花托、子房、葉片和花苞等為外植體，研究了激素濃度對外植體出愈率的影響以及抑制褐化的措施[11]。筆者以冬櫻花半木質(zhì)化莖段為外植體，研究了不同培養(yǎng)基和植物生長調(diào)節(jié)劑在冬櫻花繼代培養(yǎng)以及生根培養(yǎng)過程的作用，建立了冬櫻花的穩(wěn)定組培快繁體系，可為冬櫻花的進一步開發(fā)利用提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

試驗材料為冬櫻花半木質(zhì)化新梢，一般于4月取自金牛山試驗示范基地。

1.2試驗方法

1.2.1外植體消毒處理 春季剪取冬櫻花的半木質(zhì)化新梢，去除葉片，剪成單芽莖段作為外植體，用洗潔精攪拌浸泡 20min ，在自來水下沖洗 40～60min 轉(zhuǎn)移至超凈工作臺，用 75% 酒精處理 30s 、無菌水沖洗，再用 5% 的次氯酸鈉分別浸泡 5min 、 8min 、10min 和 15min ，無菌水清洗5～6次，用無菌濾紙吸干莖段表面水分，將帶芽莖段接種到初代培養(yǎng)基，誘導腋芽萌發(fā)。

1.2.2初代培養(yǎng)初代培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，添加 糖和6.5g/L 瓊脂， pH 值為5.8。根據(jù)櫻屬植物常用初始培養(yǎng)基，預實驗證明該激素配比下，腋芽分生組織能夠啟動分化，苗端發(fā)育正常。培養(yǎng)溫度為（ 25± 1） C ，光/暗周期 16h/8h. 。28d后統(tǒng)計其污染數(shù)和成活數(shù)，計算污染率和成活率。

污染率 （%）= （污染外植體數(shù)/接種外植體數(shù)）×100

成活率 （%）= （成活外植體數(shù)/接種外植體數(shù)）×100 。

1.2.3繼代培養(yǎng)基篩選誘導出的腋芽長 1.0cm 以上時，剪取長勢一致的莖尖，分別以MS、WPM和QL為基礎培養(yǎng)基，添加 0.5mg/L6-BA 、 30g/L 蔗糖和 6.5g/L 瓊脂， pH 值為5.8，共計3個處理，每處理15株，重復3次。培養(yǎng)條件同初代培養(yǎng)， 28d 后觀察統(tǒng)計植株的生長表現(xiàn)及增殖系數(shù)。

1.2.4植物生長調(diào)節(jié)劑篩選以篩選出的MS為繼代基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA和IBA。6-BA濃度設置為 0.2， 0.3， 0.5， 0.8mg/L ，IBA濃度設置為0.05、0.1、 0.2mg/L ，共12個處理，每個處理20株，重復3次。培養(yǎng)條件同初代培養(yǎng)，培養(yǎng)28d后調(diào)查組培苗的增殖情況，并記錄其生長狀況，計算增殖系數(shù)。

增殖系數(shù) Σ=Σ 增殖總株數(shù)/接種株數(shù)。

1.2.5生根培養(yǎng)基篩選選取長勢一致的繼代苗，以1/2MS為基本培養(yǎng)基，分別添加不同濃度的IBA（0.5、 1.0mg/L ）和NAA（0.5、 1.0mg/L ）誘導生根。共4個處理，每個處理5瓶，每瓶接種6株，每處理重復3次。25d后統(tǒng)計生根情況，計算生根率、平均生根數(shù)和平均根長。

生根率 （%）= （生根株數(shù)/接種株數(shù)） ×100 平均生根數(shù) 總根數(shù)/生根植株總數(shù)；

平均根長（cm） Σ=Σ 總根長/植株總根數(shù)

1.2.6煉苗與移栽將不定根長度約 2cm 的健壯冬櫻花組培苗，進行煉苗馴化。移栽時，用鑷子輕輕取出組培苗，清水洗掉根部培養(yǎng)基，然后多菌靈500倍液蘸根處理 2～3min ，移栽到滅菌的育苗基質(zhì)中，覆膜保濕。育苗基質(zhì)為珍珠巖 + 草炭土 + 蛭石（體積比 1：3：2 ）。生長30d統(tǒng)計植株成活株數(shù)，計算成活率。

成活率 （%）= （成活株數(shù)/移栽株數(shù)） ×100

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析

數(shù)據(jù)采用Excel和SPSS20統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析和差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1初代苗的建立

在溫室播種冬櫻花種子，獲得實生苗（圖1-A），然后取冬櫻花半木質(zhì)化莖段接種到初代培養(yǎng)基（圖1-B），2周后腋芽萌發(fā)（圖1-C），4周后腋芽伸長形成綠梢（圖1-D）。MS培養(yǎng)基添加1.0mg/L 6-BA 和 0.1mg/L IBA適合冬櫻花莖段腋芽啟動和分化，新芽無玻璃化現(xiàn)象。

由圖2可知，次氯酸鈉不同消毒時間對冬櫻花的莖段污染和成活率有明顯的影響，隨著次氯酸鈉消毒時間的延長，污染率降低，成活率呈先上升再下降的趨勢。冬櫻花外植體最佳消毒方法為先用75% 的酒精消毒30s，再用 5% 次氯酸鈉消毒 10min 。

2.2.1基本培養(yǎng)基對繼代培養(yǎng)的影響分析了MS、WPM和QL3種基本培養(yǎng)基對冬櫻花組培苗繼代培養(yǎng)的影響，結(jié)果顯示以MS為基本培養(yǎng)基增殖系數(shù)最高，組培苗成簇增殖，但有些植株弱小。以QL和WPM為基本培養(yǎng)基，增殖系數(shù)較低，在QL培養(yǎng)基上組培苗葉片綠色，長勢好，而在WPM培養(yǎng)基上組培苗生長緩慢，植株矮小。因此選擇增殖系數(shù)高的MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基進行后續(xù)試驗。

2.2.2不同生長調(diào)節(jié)劑對增殖培養(yǎng)的影響以MS為基本培養(yǎng)基，當IBA濃度一定時，隨著6-BA濃度增加，增殖系數(shù)呈下降趨勢，6-BA濃度為 0.2mg/L 或 0.3mg/L 時，增殖系數(shù)比 0.5mg/L 或 0.8mg/L 的高，表明添加低濃度6-BA（ 0.2mg/L 或 0.3mg/L ）的MS培養(yǎng)基有利于冬櫻花增殖，高濃度的6－BA會抑制其增殖（表1）。當6-BA濃度一定時，添加IBA有助于增殖，增殖系數(shù)隨IBA濃度增加呈現(xiàn)上升趨勢。6-BA濃度為 0.2mg/L ，IBA為0.05、0.1、 0.2mg/L 時，增殖系數(shù)分別為 2.63，2.50，4.40 06-BA濃度為 0.3mg/L ，IBA為 0.05，0.1，0.2mg/L 時，增殖系數(shù)分別為1.90、4.20、4.60（表1）。選擇適宜濃度配比的6-BA和IBA，可以提高冬櫻花增殖系數(shù)和改善其健壯程度。綜上，冬櫻花適宜的增殖培養(yǎng)基為 MS+0.3mg/L6-BA+0.2mg/L IBA，植株生長健壯，葉片較大，顏色綠色。

2.3不同生根培養(yǎng)基對冬櫻花組培苗生根的影響

冬櫻花增殖組培苗在含IBA或NAA的1/2MS生根培養(yǎng)基上均能生根。添加IBA時的主根較長，且能產(chǎn)生側(cè)根，但生根率和生根數(shù)都不高（圖3-A），IBA濃度為 0.5mg/L 和 1.0mg/L （圖3-B）時生根率和生根數(shù)均無明顯差異。添加NAA時，冬櫻花組培苗的生根率和生根數(shù)優(yōu)于添加IBA的培養(yǎng)基（表2）。NAA濃度為 0.5mg/L 時，生根率最高為 84% ，根粗壯（圖3-C）；當NAA濃度增加到1.0mg/L 時，生根率下降，根較短，且根部出現(xiàn)愈傷組織（圖3-D）。綜合分析生根率、生根數(shù)和根的生長狀況，冬櫻花的最適生根培養(yǎng)基為1/2MS添加 0.5mg/LNAA 。

2.4移栽成活情況

選用基質(zhì)珍珠巖 + 草炭土 + 蛭石（體積比 1：3： 2）時，移栽成活率為 92% ，且移栽苗生長健壯，葉片綠色，生長狀況良好。

3小結(jié)與討論

櫻花具有重要的觀賞價值和經(jīng)濟價值，全世界約有150種，主要分布在北半球溫暖地區(qū)的中國及東北亞等地[12]。隨著櫻花產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，櫻花組培快繁技術日益受到人們的關注。中國櫻花的組培快繁取得成功的有高盆櫻桃[13]，迎春櫻和華中櫻的優(yōu)良品系[14]，天津野生山櫻花[15]，御殿場櫻[16]，郁金櫻[17]，福建山櫻花[18]，鐘花櫻[19]等。盡管櫻花的組培快繁研究取得了較大進展，但目前關于冬櫻花的組培快

繁還沒有成功的報道。

組織培養(yǎng)建立無菌體系外植體的處理至關重要。春季萌發(fā)新長出的半木質(zhì)化莖段表面微生物少，選擇半木質(zhì)化莖段作為外植體能夠減少污染。但半木質(zhì)化莖段比較幼嫩，消毒時間的選擇比較關鍵，太長容易受傷，太短消毒不徹底。本研究對4個消毒時間進行比較，發(fā)現(xiàn)先用 75% 的酒精消毒 30s ，再用 5% 次氯酸鈉消毒 10min 效果最佳。

植物組織培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基有MS、WPM、DKW和QL等。在櫻花組織培養(yǎng)中，MS是應用較為廣泛的培養(yǎng)基。御殿場櫻、郁金櫻、染井吉野櫻、山櫻花和紅花高盆櫻不定芽增殖均適合采用MS為基本培養(yǎng)基[16，17，20]，迎春櫻、華中櫻和喜馬拉雅櫻花增殖宜采用 WPM^{[14，21]} 。本研究對MS、WPM和QL培養(yǎng)基進行比較，以MS培養(yǎng)基誘導冬櫻花增殖效果較好。

生長調(diào)節(jié)劑類物質(zhì)對植物的生長發(fā)育起著至關重要的作用。通過調(diào)整生長調(diào)節(jié)劑的種類、濃度和配比，可調(diào)控植物的生長發(fā)育進程。櫻屬植物常用的生長調(diào)節(jié)劑有6-BA、IBA、NAA、TDZ和GA3等[22]。不同基因型的櫻花對細胞分裂素的敏感性存在差異，郁金櫻宜采用6-BA，濃度 2.0mg/L^[17] ，御殿場櫻和鐘花櫻宜采用6-BA，濃度3.0mg/L[16，19]。本研究中較高濃度 6-BA（0.5，0.8mg/L ）不利于冬櫻花增殖培養(yǎng)，低濃度6-BA（0.2、0.3mg/L ）可獲得較高的增殖率，表明冬櫻花對6-BA較敏感，高濃度6-BA會抑制冬櫻花增殖。這與陳劍勇關于河津櫻[23]、李水根關于喜馬拉雅櫻花[21]的研究結(jié)果一致，采用低濃度的6-BA更利于不定芽增殖。此外添加IBA可以促進冬櫻花增殖，隨著IBA濃度增加，增殖系數(shù)增加。冬櫻花適宜的增殖培養(yǎng)基為 MS+0.3mg/L6-BA+0.2mg/LI BA。

IBA和NAA是誘導木本植物形成不定根的常用生長調(diào)節(jié)劑。較低濃度的IBA和NAA配合使用可以促進天津野生山櫻花不定根的形成[15]。本研究以 1/2MS 為基本培養(yǎng)基，選擇不同濃度的NAA或IBA進行冬櫻花組培苗的生根試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用NAA生根的效果優(yōu)于IBA， 0.5mg/L NAA生根效果最好，組培苗的生根率最高，生根苗最健壯。生根苗移栽成活率 92% 。

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