牛病毒性腹瀉的流行病學特征、診斷技術(shù)及綜合防控策略研究

牛病毒性腹瀉又被稱為病毒性腹瀉黏膜病，是由牛病毒性腹瀉病毒感染所引發(fā)的一種接觸性傳染性疾病，屬于國家二類動物疫病，不同年齡階段的牛群都容易受到該種病毒的感染，尤其是對幼齡牛造成的危害最為嚴重，臨床上患病牛主要表現(xiàn)為腹瀉、胃腸炎、消化道黏膜糜爛，嚴重的壞死，對牛的正常生長發(fā)育造成嚴重威脅。西藏地處高海拔地帶，牦牛養(yǎng)殖業(yè)是當?shù)氐闹е援a(chǎn)業(yè)和主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)，隨著牦牛產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整力度的逐漸加大，牛養(yǎng)殖數(shù)量養(yǎng)殖規(guī)模逐漸增加和擴大，在此背景下以病毒性腹瀉為代表的傳染性疾病在養(yǎng)殖場中周期性傳播蔓延。

一、牛病毒性腹瀉的流行病學

1、病原特征

牛病毒性腹瀉病毒是一種屬于病毒科、腸道病毒屬的單股RNA病毒。BVDV病毒粒子呈球形，直徑約為 30～32nm 牛病毒性腹瀉病毒根據(jù)基因型和生物型的不同，可以分為不同的病毒株。BVDV基因型分為兩種，分別為NCP和SBP。這兩種基因型在病毒的生物學特性、流行病學特征和免疫原性方面存在一定差異。BVDV生物型分為三種，分別為BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3。這三種生物型在病毒的抗原性、宿主范圍和臨床表現(xiàn)方面有所不同。BVDV-1引起病毒性腹瀉和呼吸道癥狀。病毒具有較高的變異性，可能導(dǎo)致不同程度的臨床癥狀。BVDV-2主要引起病毒性腹瀉。病毒在牛群中的傳播速度較慢，但可能導(dǎo)致較為嚴重的腹瀉癥狀。BVDV-3感染牛、羊、兔等多種動物，引起病毒性腹瀉。病毒顆粒的外部包裹有一層由宿主細胞膜組成的囊泡，使其能夠在宿主細胞間進行傳播。病毒主要感染牛，引起牛病毒性腹瀉。病毒可通過直接接觸、飛沫傳播和糞一口途徑傳播。病毒在牛體內(nèi)的靶細胞為腸道上皮細胞，可導(dǎo)致腸道炎癥、糜爛和壞死。此外，BVDV還可以引起牛的先天性感染，導(dǎo)致胎兒發(fā)育異常、死亡或出生缺陷。BVDV的基因組為單股正鏈RNA，長度約為 11～12kb. 。病毒基因組編碼四種結(jié)構(gòu)蛋白，包括衣殼蛋白(VP1、VP2和VP3）核衣殼蛋白(NP)以及一種非結(jié)構(gòu)蛋白（NS2）。BVDV的復(fù)制過程主要發(fā)生在宿主細胞的核糖體中，病毒利用宿主細胞的生物合成機制合成自身蛋白和RNA。

牛病毒性腹瀉病毒對理化因素具有一定的抵抗力，可在室溫下長時間保持活性。病毒對酸、堿、洗滌劑等有一定的耐受性，但高溫、紫外線等條件可使其失活。

2、致病機理

BVDV通過直接接觸、飛沫傳播或糞一口途徑進入宿主牛的體內(nèi)。病毒首先感染腸道上皮細胞，然后進入血液和淋巴系統(tǒng)，進一步擴散到其他組織和器官。BVDV進入宿主細胞后，其基因組RNA被釋放并翻譯成病毒蛋白。病毒蛋白的合成和組裝過程在宿主細胞的核糖體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中進行。病毒基因組RNA在宿主細胞內(nèi)進行復(fù)制，形成新的病毒基因組RNA。新合成的病毒基因組RNA通過宿主細胞的核糖體進行轉(zhuǎn)錄和翻譯，生成新的病毒蛋白。這些蛋白包括結(jié)構(gòu)蛋白（如衣殼蛋白、核衣殼蛋白）和非結(jié)構(gòu)蛋白（如NS2蛋白）。病毒蛋白在宿主細胞內(nèi)組裝成完整的病毒粒子，并從細胞表面釋放到細胞外。釋放的病毒粒子可以進一步感染其他宿主細胞，引發(fā)病毒血癥和全身感染。BVDV病毒粒子表面的囊泡可以掩蓋病毒抗原，使其逃避免疫監(jiān)視和清除。病毒在宿主細胞內(nèi)繁殖過程中，會引發(fā)宿主細胞的炎癥、凋亡和壞死等病理損傷。炎癥反應(yīng)和病理損傷可導(dǎo)致腸道黏膜糜爛、脫落，從而引起腹瀉等癥狀。BVDV感染可導(dǎo)致慢性病毒血癥和持續(xù)性感染。在持續(xù)感染期間，病毒可侵犯多個組織和器官，引起不同程度的病理損傷。病理損傷的累積可能導(dǎo)致牛生長發(fā)育受阻、繁殖障礙和死亡等嚴重后果。

3、流行特點

牛病毒性腹瀉病毒的傳染源主要是感染牛和隱性感染牛。病毒存在于感染牛的糞便、尿液、唾液、血液和生殖道分泌物中。隱性感染牛雖無明顯臨床癥狀，但仍然可以排毒，成為重要的傳染源。此外，病毒還可以通過胎盤傳播，導(dǎo)致胎兒感染。牛病毒性腹瀉病毒的傳播途徑主要有直接接觸、間接接觸、飛沫傳播和胎盤傳播。感染牛與易感牛直接接觸，病毒通過分泌物和排泄物傳播；病毒可以通過污染的飼料、飲水、環(huán)境等媒介傳播；另外，病毒隨感染牛的呼吸道分泌物形成的飛沫傳播；病毒也可以通過感染母牛的胎盤傳播給胎兒。牛病毒性腹瀉病毒主要感染牛，包括肉牛、奶牛和役牛等。不同品種和年齡的牛均易感，但以犢牛和青年牛的易感性較高。隱性感染牛和康復(fù)牛也可以成為傳染源，導(dǎo)致其他牛感染。牛病毒性腹瀉病毒在不同地區(qū)和季節(jié)的流行特點不同，通常呈現(xiàn)地方性流行。病毒在牛群中傳播速度較慢，但易造成持續(xù)性感染。流行季節(jié)主要與病毒在環(huán)境中的存活時間和牛的飼養(yǎng)管理有關(guān)。病毒在溫暖、潮濕的環(huán)境中存活時間較長，因此，春夏季和秋季是該病的高發(fā)期。

二、牛病毒性腹瀉的臨床癥狀

牛病毒性腹瀉可分為急性型和慢性型。病毒性腹瀉的潛伏期一般為2\\~14d，但也有報道稱潛伏期可長達 21d 潛伏期長短與病毒株、感染強度、宿主免疫狀態(tài)等因素有關(guān)。急性病毒性腹瀉的發(fā)病速度較快，病程較短。牛感染后，通常在24\\~48h內(nèi)出現(xiàn)癥狀?；疾∨ｓw溫可達 40～42^°C ，持續(xù) 2～3d 出現(xiàn)嚴重腹瀉現(xiàn)象水樣便，惡臭，帶有大量黏液和泡沫。由于腹瀉導(dǎo)致水分丟失，病牛出現(xiàn)脫水癥狀，口渴、尿量減少。病牛精神沉郁，食欲減退或廢絕，反芻減少。部分病牛出現(xiàn)咳嗽、流鼻涕等呼吸道癥狀。病程中，病牛體重迅速減輕，消瘦。慢性型病毒性腹瀉的病程較長，通常在數(shù)周至數(shù)月內(nèi)逐漸加重。病牛長期排出水樣便，帶有黏液和泡沫，導(dǎo)致脫水和營養(yǎng)不良。一段時間之后患病牛體重逐漸減輕，體質(zhì)虛弱。慢性感染對犢牛和青年牛的生長發(fā)育影響較大，可能導(dǎo)致生長停滯、發(fā)育不良。此外，慢性感染可能導(dǎo)致母牛出現(xiàn)繁殖障礙，如受胎率降低、流產(chǎn)、產(chǎn)弱胎等。

三、牛病毒性腹瀉的病理變化

病毒主要侵犯牛的胃腸道和全身多個器官，導(dǎo)致病理組織學變化。病毒感染初期，腸黏膜上皮細胞變性、脫落，導(dǎo)致黏膜充血、水腫。病程中，腸黏膜出現(xiàn)糜爛、潰瘍，嚴重時可導(dǎo)致腸道出血。病毒感染導(dǎo)致淋巴濾泡和集合淋巴結(jié)充血、水腫，出現(xiàn)炎癥細胞浸潤。病毒感染還會導(dǎo)致肝細胞變性、壞死，出現(xiàn)肝細胞索紊亂、氣球樣變等。另外，病毒感染引起肝竇充血，伴有炎癥細胞浸潤。脾臟充血、腫大，邊緣鈍圓，脾髓充血，伴有點狀出血和炎癥細胞浸潤。肺泡充血、水腫，出現(xiàn)肺泡壁增厚、透明膜形成等。肺泡腔內(nèi)有炎癥細胞浸潤，導(dǎo)致肺泡壁增厚、實變等。腎小球充血，伴有腎小球毛細血管內(nèi)皮細胞增生和炎癥細胞浸潤。腎小管上皮細胞變性、壞死，出現(xiàn)腎小管萎縮、擴張等。

四、牛病毒性腹瀉的實驗室診斷

1、病毒分離鑒定

牛病毒性腹瀉病毒分類培養(yǎng)常用的培養(yǎng)細胞有牛腎細胞（BHK-21）、犢牛睪丸細胞(MDTC）、人胚肺細胞(MRC-5)和豬腎細胞(LLC-MK2)等。這些細胞系對BVDV具有良好的生長特性，可以用于病毒的分離和培養(yǎng)。在操作過程中從病牛的腹瀉糞便、腸黏膜或血液等樣本中取樣，將樣本接種到培養(yǎng)細胞中，如BHK-21或MDTC等。在適當?shù)臏囟群蜐穸认?，培養(yǎng)細胞一段時間(通常為3\\~7d)。通過顯微鏡觀察細胞病變特征，如細胞變性、壞死、凋亡等。收集培養(yǎng)后的細胞培養(yǎng)液，進行病毒濃縮和純化。通過血清中和試驗、免疫熒光抗體試驗、PCR等方法對病毒進行鑒定。病毒感染初期，細胞出現(xiàn)變性，細胞質(zhì)濃縮，細胞核濃縮。病毒感染加重時，細胞出現(xiàn)壞死，細胞質(zhì)溶解，細胞核碎裂。病毒感染導(dǎo)致細胞凋亡，出現(xiàn)凋亡小體，細胞核固縮，細胞質(zhì)溶解。

2、熒光定量PCR檢測

熒光定量PCR檢測儀器通常包括熱循環(huán)儀、熒光檢測儀和電腦等。熱循環(huán)儀能夠進行PCR反應(yīng)的加熱和冷卻循環(huán)，如95℃高溫滅活 ，55～60^°C 退火等。熒光檢測儀能夠檢測PCR反應(yīng)中的熒光信號，并將其轉(zhuǎn)換為數(shù)據(jù)。電腦用于控制儀器設(shè)備，運行相關(guān)的軟件程序，對檢測數(shù)據(jù)進行處理和分析。從病牛的腹瀉糞便、腸黏膜或血液等樣本中提取病毒RNA。根據(jù)BVDV的基因序列，設(shè)計特異性引物。將病毒RNA、引物、dNTPs、MgCI2、緩沖液和熒光染料等混合，形成反應(yīng)體系。將反應(yīng)體系放入熱循環(huán)儀中，進行PCR反應(yīng)，通常包括高溫滅活、變性、退火和延伸等步驟。將PCR反應(yīng)后的產(chǎn)物進行熒光檢測，通過熒光檢測儀收集熒光信號。熒光信號轉(zhuǎn)換為Ct值，用于判斷樣本中病毒含量。Ct值小于30表示病毒含量較高，病?？赡芴幱诩毙愿腥酒?。Ct值在30\\~35之間表示病毒含量較低，病牛可能處于慢性感染期。Ct值大于35表示病毒含量極低或檢測不到，病?？赡芤呀?jīng)康復(fù)或未感染。

3、環(huán)介導(dǎo)等溫擴增

環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)是一種快速檢測BVDV的方法，適用于現(xiàn)場和實驗室診斷。從病牛的腹瀉糞便、腸黏膜或血液等樣本中提取病毒RNA。將病毒RNA、引物、dNTPs、MgCI2、緩沖液和熒光染料等混合，形成反應(yīng)體系。將反應(yīng)體系放入恒溫擴增儀中，進行LAMP反應(yīng)，通常需要 1～2h LAMP反應(yīng)后的產(chǎn)物進行熒光檢測，通過熒光檢測儀收集熒光信號。將熒光信號轉(zhuǎn)換為Ct值，用于判斷樣本中病毒含量。Ct值小于30可以判定病毒含量較高，病?？赡芴幱诩毙愿腥酒?。Ct值在30\\~35表示病毒含量較低，病?？赡芴幱诼愿腥酒?。Ct值大于35可以判定病毒含量極低或檢測不到，病?？赡芤呀?jīng)康復(fù)或未感染。

五、牛病毒性腹瀉治療方案

1、西藥治療方案

牛病毒性腹瀉目前尚無特效治療方法，主要采取對癥治療和支持療法。緩解患病牛呼吸道癥狀，選擇使用氨茶堿每 10kg 體重使用 100mg ，一次用量。選擇使用藥用炭吸附毒素，緩解腹

118|農(nóng)天致富液

瀉癥狀，每 10kg 體重使用5g，每天用藥一次連續(xù)使用2\\~3次?？咕?，選擇使用磺胺類藥物和頭孢類藥物。常見的磺胺類藥物諸如復(fù)方磺胺嘧啶注射液，常用劑量為每 1kg 體重，家畜0.2\\~0.3mL ，每天肌內(nèi)注射2次，連用 5d 磺胺類藥物具有抗菌和抗炎作用，可以預(yù)防或治療細菌感染。頭孢類藥物具有抗菌作用，可以預(yù)防或治療細菌感染。在采用上述治療，同時還需要加強支持治療，補充電解質(zhì)推薦使用 5% 葡萄糖氯化鈉注射液500\\~1000mL ，并搭配使用 20% 的安鈉咖注射液 10mL，10% 的維生素C注射液 10mL ，用于補充病牛因腹瀉導(dǎo)致的電解質(zhì)丟失。每天用藥一次，連續(xù)使用 3～5d

2、中藥治療方案

在中醫(yī)治療方面，主要采取辨證施治的原則，根據(jù)病牛的不同癥狀和體質(zhì)，采取相應(yīng)的中藥組方進行治療。首先，濕熱內(nèi)蘊證。病牛表現(xiàn)為腹瀉、糞便呈水樣或糊狀，有腥臭味，食欲不振，口渴，舌苔黃厚。治療原則為清熱利濕。其次，脾胃虛弱證。病牛表現(xiàn)為腹瀉、食欲不振、精神不振、消瘦，舌質(zhì)淡、舌苔白。治療原則為健脾和胃。再次，氣血兩虛證。病牛表現(xiàn)為腹瀉、消瘦、乏力、食欲不振，舌質(zhì)淡、舌苔白。治療原則為益氣補血。濕熱內(nèi)蘊證推薦使用黃連 10g 黃芩 15g 黃柏 10g 厚樸 10g 、陳皮 10g 澤瀉15g 、車前子 15g 茯苓 15g_? 脾胃虛弱證推薦應(yīng)用黨參 20g 、白術(shù)15g 茯苓 15g 炙甘草 山藥 20g 砂仁 10g 薏苡仁 20g 、陳皮10g_? 。氣血兩虛證推薦使用當歸 15g 熟地黃 20g 川芎 10g 、白芍15g 黨參 20g 、白術(shù) 15g 茯苓 15g 炙甘草 6g_? 上述中藥組方加水 1500～2000mL ，文火煎煮 40～50min ，剩余藥液 1000～1200mL 每頭病牛每天口服中藥煎劑 500mL ，分2次喂服，連用5\\~7d。在使用中藥治療時，應(yīng)根據(jù)病牛的體重、年齡、病情等因素調(diào)整藥物劑量和周期。同時，注意中藥的副作用和相互作用，遵循獸醫(yī)規(guī)范，綜合采取多種治療措施，以提高病牛的康復(fù)率。

六、牛病毒性腹瀉的預(yù)防措施

1、加強檢疫

在預(yù)防期間，對牛群進行檢疫檢驗是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。對牛群進行臨床檢查，觀察動物的精神、食欲、體溫等狀況，發(fā)現(xiàn)疑似病例要及時隔離、檢測和治療。血清學檢測是檢測牛群BVDV感染的主要方法，包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和病毒中和試驗等。血清學檢測的優(yōu)點是操作簡便、結(jié)果快速，但可能會出現(xiàn)假陰性或假陽性結(jié)果。病毒核酸檢測是檢測牛群BVDV感染的金標準方法，可以直接檢測病毒的RNA，包括實時熒光定量PCR(qPCR)和巢式PCR等。病毒核酸檢測的優(yōu)點是靈敏度高、特異性強，但需要專業(yè)設(shè)備和較長時間。檢疫檢驗工作開展過程中應(yīng)該著重收集牛群的基本信息、來源、免疫記錄等，對牛群進行臨床檢查，發(fā)現(xiàn)疑似病例及時隔離。采集血清樣本，進行血清學檢測，采集疑似病例的樣本(如血液、乳汁等），進行病毒核酸檢測。對于病毒核酸檢測陽性的樣本，進行病毒分離培養(yǎng)。根據(jù)檢測結(jié)果，分析牛群的感染狀況，制定相應(yīng)的預(yù)防和控制措施。將檢測結(jié)果報告給養(yǎng)殖場主，指導(dǎo)其進行疫病防控。

2、強化免疫接種

根據(jù)當?shù)匾卟?、疫苗供?yīng)情況和牛群狀況，制定合理的免疫接種程序。一般來說，初次免疫接種應(yīng)在牛出生后3\\~5周進行，之后間隔3\\~4周進行一次強化免疫接種。對于已經(jīng)感染的牛群，可以根據(jù)抗體檢測結(jié)果，制定相應(yīng)的免疫接種計劃。目前市場上常用的BVD疫苗有多種，劑量和免疫程序也有所不同。一般而言滅活疫苗每頭牛初次免疫接種劑量為 2～4mL ，之后每次接種劑量為 1～2mL 對于懷孕母牛，可在產(chǎn)前1\\~2個月選擇滅活疫苗進行免疫接種，以保護新生犢牛。肌肉注射是最常用的接種方法，適用于各種年齡段的牛。皮下注射和口服接種方法適用于犢牛和懷孕母牛。疫苗接種之后要加強抗體檢測，對于多次免疫接種不達標的牛群作為帶毒牛淘汰處理。

牛病毒性腹瀉是一種由病毒性腹瀉病毒引起的常見牛類傳染病，對養(yǎng)殖業(yè)和畜牧業(yè)造成了嚴重影響。牛病毒性腹瀉是影響牛群健康和生產(chǎn)性能的重要因素之一，造成重大經(jīng)濟損失?；疾∨Ｖ簧a(chǎn)力下降，生長發(fā)育延遲，乳量減少，肉牛肉質(zhì)下降，導(dǎo)致養(yǎng)殖業(yè)主遭受經(jīng)濟損失。疫病暴發(fā)會給農(nóng)牧民造成心理壓力，增加養(yǎng)殖業(yè)主的經(jīng)營難度和負擔。由于該種疾病對養(yǎng)殖業(yè)造成極大威脅，防控疾病有助于保護養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展，維護農(nóng)牧業(yè)的經(jīng)濟收益和社會穩(wěn)定。為此在養(yǎng)殖管理期間，就需要加強對疾病的針對性防控。通過科學的預(yù)防和控制措施，減少疾病發(fā)生率，促進牛群生長發(fā)育，提高乳量和肉產(chǎn)量，增加養(yǎng)殖業(yè)主的經(jīng)濟利益。同時，政府也應(yīng)加強對畜牧業(yè)的指導(dǎo)和支持，持續(xù)推動養(yǎng)殖業(yè)的整體防控水平的提升。

（作者單位：851100西藏自治區(qū)浪卡子縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局）