《血液儲存標準》對冷沉淀和新鮮冰凍血漿解凍后儲存條件修改的研究

中圖分類號：R331.1 文獻標識碼：A

Abstract Objective To investigate thechanges in cryoprecipitate and fresh frozen plasma （FFP）after thawing due to modifiedstorageconditionsandtovalidatetherationalityof therevisions madetotheBloodStorageStandard.MethodsAtotalof 48 bags each ofcryoprecipitate andFFPpreparedfromOctober 2023 to August 2024at theNanjingRed Cross Blood Center wererandomlyselectedAftercomplete thawing，cryoprecipitate wasstoredunderfourconditions：4Cfor6hours，4Cfor24hours，24C for 6 hours，and 24^°C for 24 hours. The changes in fibrinogen（ Fbg^? ，coagulation factor VIII （FVIl），coagulation factor V（FV）， andcoagulationfactorII（FII）contentincryoprecipitateunderdiffrentconditionswerecompared.Aftercompletethawing，F(xiàn)FP was stored at 4^°C for 24 hours and 4^°C for l20 hours. The changes in total protein （TP），F(xiàn)bg，F(xiàn)VIl，，F(xiàn)V，and FII content were compared.ResultsAfter thawing，cryoprecipitate was stored under the four conditions. Compared with the initial F M content， the F M content decreased under all four conditions. The differences in F M content between the conditions of 4^°C for 6 hours， 4^°C for 24 hours，and 24^° C for 24 hours and the original test results were statistically significant （ Plt;0.05 ）. After thawing， FFP was stored at 4^°C for 24 hours and 4^°C for l20 hours.There were no statistically significant differences in TP and Fbg content compared with O hours after thawing （ Pgt;0.05 ）. The content of FVIll，F(xiàn)V，and FII decreased，and the differences were statistically significant （ P （20 lt;0.05 ）.ConclusionAfter the revision of the Blood Storage Standard（ ：WS399-2023∣ ，cryoprecipitate demonstrates better clinical efficacy，and FFP can be better utilized in clinical treatment while reducing waste.

Key words Blood Storage Standard;Cryoprecipitate;Fresh Frozen Plasma;Blood Quality; Blood Safety First-authorsaddress Nanjing Red Cross Blood Center，Nanjing，Jiangsu，2looO3，China

冷沉淀是由全血分離出的新鮮冰凍血漿（約 200mL 制備而成的白色絮狀物。冷沉淀中含有凝血因子VIll（CoagulationFactorVIll，F(xiàn)VIl）及纖維蛋白原（Fibrinogen，F(xiàn)bg），可治療因缺乏FV及Fbg而出血不止的患者或血友病患者，有時也用于手術后出血、嚴重外傷及彌散性血管內(nèi)凝血（Disseminated Intravascular Coagula-tion，DIC）等患者的替代治療[1-4]。新鮮冰凍血漿是指在 6h～8h 內(nèi)、4^°C 條件下將新鮮抗凝全血離心、分《中國衛(wèi)生質(zhì)量管理》第32卷第6期（總第211期）2025年6月離出血漿并迅速在一 以下冰凍成塊的血漿，是目前臨床應用較為廣泛的血液成分，也是制備凝血因子制劑的重要原料[5-6]。新鮮冰凍血漿含有正常人血漿蛋白的所有成分，包括全部凝血因子，特別是不穩(wěn)定凝血因子V（FV）和FV，對某些肝病患者、大量失血患者、顱內(nèi)出血患者或大手術患者等有較好的臨床療效[]

對比《血液儲存要求》（ ws_399- 2012），2024年9月實施的《血液儲存標準 對多種血液成分的儲存條件進行了修改，其中變化較大的是對冷沉淀和新鮮冰凍血漿的儲存溫度和時間的修改。冷沉淀由“解凍后 2^°C～6^°C 保存，應 24h 內(nèi)輸注”修改為“解凍后 保存，應 ⁶h 內(nèi)輸注”；新鮮冰凍血漿由“解凍后 2^°C～6^°C 保存，應 24h 內(nèi)輸注\"修改為“解凍后 2^°C～6^°C 保存，應 24h 內(nèi)輸注。在應對緊急大量輸血的情況下，解凍后 2^°C～6^°C 最多儲存5d，且不超過原保存期，不得反復凍融”。本研究通過檢測冷沉淀和新鮮冰凍血漿解凍后在不同儲存條件下FV和Fbg等質(zhì)量指標的含量，判斷冷沉淀和新鮮冰凍血漿解凍后最適宜的儲存條件，驗證《血液儲存標準》修改的合理性。

資料與方法

1.1 資料來源

隨機抽取南京紅十字血液中心2023年10月一2024年8月制備的冷沉淀和新鮮冰凍血漿各48袋。

1.2 儀器、試劑與器材

1.2.1儀器

水浴振蕩箱（德國GFL公司GFL—1083），海爾藥品保存箱（青島海爾特種電器有限公司 HYC- 360），低溫恒溫箱（上海愛朗儀器有限公司LT1—700），全自動血凝分析儀（日本希森美康公司CS一1300），亞甲藍萃取（生化）檢測系統(tǒng)（山東沃特公司W(wǎng)TS一9300），全自動細菌培養(yǎng)系統(tǒng)（美國BD公司BACTEC一FX200），無菌接管機（德國費森尤斯公司COMPODOCK），森通熱合機（CENTRONSE250）。

1.2.2試劑與器材

Fbg檢測試劑盒（德國西門子公司，批號R3118），F(xiàn)V活性測定試劑盒（德國西門子公司，批號560860A），F(xiàn)V活性測定試劑盒（德國西門子公司，批號575712B），F(xiàn)I活性測定試劑盒（德國西門子公司，批號503660A），總蛋白（TotalProtein，TP）測定試劑盒（北京瑞爾達公司，批號231020），校準品（德國西門子公司，批號563123B），正常范圍定值質(zhì)控血漿（德國西門子公司，批號507941），一次性使用無菌注射器（美國BD公司，批號2007140），一次性使用塑料血袋（山東威高公司，批號20231221），厭氧微生物培養(yǎng)瓶（美國BD公司，批號4023755），需氧微生物培養(yǎng)瓶（美國BD公司，批號3361737）。

1.3 研究方法

1.3.1冷沉淀研究方法

將從低溫冰箱中取出的48袋冷沉淀置入 37^°C 水浴中，輕輕搖動，使之在 10min 內(nèi)完全解凍。將48袋解凍的冷沉淀用無菌接管機分成兩袋（即a和b）。a立即取樣，用全自動血凝分析儀測定FVI、FV、FII和Fbg含量，并用全自動細菌培養(yǎng)系統(tǒng)連續(xù)監(jiān)測樣品瓶5d，檢測微生物生長情況。將a平分成兩等分，分別儲存于4^°C，24^°C 室溫條件下，按照 ⁶h 、24h 取樣檢測，比較 4C6h，4C 條件下冷沉淀中FV、FV、FⅡ和Fbg含量的變化情況。b儲存于 24^°C6 h條件下取樣做無菌試驗，用全自動細菌培養(yǎng)系統(tǒng)檢測，連續(xù)監(jiān)測樣品瓶5d，檢測是否出現(xiàn)微生物污染。

1.3.2新鮮冰凍血漿研究方法

將從低溫冰箱中取出的48袋新鮮冰凍血漿置入 37^°C 水浴中，輕輕搖動，使之在 10min 內(nèi)完全解凍。將48袋解凍的新鮮冰凍血漿用無菌接管機分成兩袋（即a和b）。a立即取樣，用全自動血凝分析儀測定FV、FV、FI和Fbg含量，用亞甲藍萃取檢測系統(tǒng)測定TP含量，并用全自動細菌培養(yǎng)系統(tǒng)連續(xù)監(jiān)測樣品瓶 5d 檢測微生物生長情況；然后將a儲存于 4^°C 條件下，并按照 24h，120h 進行檢測，比較 4^°C24h，4^°C120h 條件下新鮮冰凍血漿中的TP、FVI、FV、FⅡ和Fbg含量的變化情況。b儲存于 條件下取樣做無菌試驗，用全自動細菌培養(yǎng)系統(tǒng)檢測，連續(xù)監(jiān)測樣品瓶5d，檢測是否出現(xiàn)微生物污染。

1.4 統(tǒng)計分析方法

應用Excel2003軟件錄人數(shù)據(jù)，采用SPSS25.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。呈正態(tài)分布且方差齊的計量資料以 Mean±SD 表示，兩組間比較采用兩獨立樣本 Ψ_t 檢驗，三組及以上比較采用方差分析， Plt; 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 對冷沉淀解凍后儲存條件修 改的探討

與原始檢測結果相比， 4°C6h 、4^°C24h.24^°C6h.24^°C24h4 種儲存條件下FⅢ含量均下降，但 24^°C6h 條件下FV含量高于其他3組。 條件下FV含量與原始檢測結果比較，差異有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05） ；而 條件下FV含量與原始檢測結果比較，差異無統(tǒng)計學意義 （P=0，320） 。4種儲存條件下FV含量相比較，差異有統(tǒng)計學意義（ ?Plt;0. 05） 。多重分析結果顯示： 4^°C24hF V含量與 4^°C 6hF Ⅲ含量相比，差異有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05 ）； 24^°C6hF Ⅲ含量與 4^°C 24hF W含量相比，差異有統(tǒng)計學意義 Plt;0.05）;24^°C24hF 含量與24^°C6hF Ⅲ含量相比，差異有統(tǒng)計學意義 （Plt;0.05） 。而 24h.24^°C6h 和 24^°C24h4 種儲存條件下Fbg、FV、FI含量分別與原始檢測結果比較，差異均無統(tǒng)計學意義。 4^°C6h，4^°C24h，24^°C6h 和24°C 24h4 種條件下，F(xiàn)bg、FV、FII含量分別相比較，差異均無統(tǒng)計學意義。見表1。

無菌試驗結果顯示，冷沉淀解凍后 ^0h 和冷沉淀解凍后儲存 24°C6h 條件下需氧微生物培養(yǎng)瓶及厭氧微生物培養(yǎng)瓶均無菌生長。見表2。

2.2 對新鮮冰凍血漿解凍后儲存 條件修改的探討

新鮮冰凍血漿解凍后儲存于4^°C 條件下，分別檢測儲存 24h 和^120h 時血漿中的TP、Fbg、FV、FV和FⅡ含量，并與原始檢測結果作比較。結果顯示：儲存于 4^°C 條件下24h 和 ^120h 的新鮮冰凍血漿TP、Fbg含量與原始檢測結果比較，差異無統(tǒng)計學意義 （Pgt;0.05）：4^°C24h 條件下TP、Fbg含量分別與4^°C120h 條件下相比較，差異無統(tǒng)計學意義 （Pgt;0.05）;4^°C24h 與4‰ 條件下FV、FV、FⅡ含量與原始檢測結果比較均下降，且差異均有統(tǒng)計學意義（ Plt;0. 05） ；且 4^°C 24h 條件下FVI、FV含量與 4^°C ^120h 條件下相比較，差異有統(tǒng)計學意義 （Plt;0.05） ，而 4^°C24h 條件下FⅡ含量與 4‰ 條件下相比較，差異無統(tǒng)計學意義 （Pgt;0.05） 。見表3。

無菌試驗結果顯示，新鮮冰凍血漿解凍后 ^0h 和新鮮冰凍血漿解凍后儲存 4^°C120h 條件下需氧微生物培養(yǎng)瓶及厭氧微生物培養(yǎng)瓶均無菌生長。見表4。

3 討論

隨著血液制品及成分輸血費用占臨床治療費用的比例越來越大，血液成分的管理和使用也越來越重要。運行良好的輸血標準能夠更加合理、有效的管理血液成分的使用，從而最大限度地提升臨床治療效果，減少血液資源浪費。相較于《血液儲存要求》（WS399—2012），《血液儲存標準》（WS399－2023）中較大的變化是對冷沉淀和新鮮冰凍血漿的儲存溫度和時間進行了修改。然而，該標準的前言中并未明確說明為何做此修改，同時部分臨床工作者對此次標準修改理解得不夠透徹，這可能會影響血液制品的合理、有效使用，進而影響臨床工作。因此，本研究通過檢測冷沉淀和新鮮冰凍血漿解凍后在不同儲存條件下質(zhì)量指標的含量，驗證《血液儲存標準》（WS399－2023）修改的合理性，以更好地幫助臨床了解標準修改的意義。

更好地保存冷沉淀中的有效凝血成分對提高臨床療效有著重要意義?！堆簝Υ嬉蟆罚╓S399一2012）規(guī)定“解凍后 2^°C～6^°C 保存”。然而，部分醫(yī)療機構提出， 2^°C～6^°C 儲存溫度會使冷沉淀析出不溶物，直接輸注會附著在輸血器上，影響輸注效果[8]。借鑒美國血液與生物治療促進協(xié)會技術手冊等標準，根據(jù)臨床應用實際，《血液儲存標準》（WS399^-2023） 將冷沉淀修改為“解凍后 保存， 6h 內(nèi)輸注”。為驗證這一修改的合理性，本研究依據(jù)《全血及成分血質(zhì)量要求》（GB18469—2012）的質(zhì)量關鍵指標，檢測了解凍后分別儲存于 4^°C6h.4^°C24h. 24°C6h 和 24^°C24h 條件下冷沉淀中Fbg、FVI、FV和FⅡ的含量情況。結果顯示，相同溫度下，儲存時間越長，F(xiàn)V含量降低越顯著。4種儲存條件下， 24^°C6hF V含量最高，究其《中國衛(wèi)生質(zhì)量管理》第32卷第6期（總第211期）2025年6月原因，可能是因為冷沉淀融化后放置于 4^°C 條件下會析出不溶物，導致部分凝血因子析出或損耗，血漿內(nèi)FV濃度因此減低[8]。但是， 24°C 的儲存條件相較于 4^°C 可能更利于微生物繁殖，因此本研究在實驗中也對該儲存條件下冷沉淀的無菌情況進行了研究。結果表明， 條件下冷沉淀內(nèi)細菌繁殖的風險并沒有增加。這表明冷沉淀解凍后儲存于 24^°C6h 條件下更為合理，能更好地保存冷沉淀中FⅢ的含量，可能會在臨床治療中得到更好的效果[9]。

《血液儲存要求》（WS399一2012）規(guī)定“新鮮冰凍血漿儲存溫度低于一 18°C ，保存期自血液采集之日起1a，解凍后 2^°C～6^°C 保存，應24h 內(nèi)輸注”。然而，臨床上認為，在創(chuàng)傷和大出血情況下，早期積極使用血漿對治療效果有較大提升[10-11]新鮮冰凍血漿在冷凍狀態(tài)有 30min ～45min 的解凍延遲，耽誤治療時間，不能滿足臨床上早期積極使用的要求。同時，新鮮冰凍血漿解凍后只有 24h 的保存期限，因此，為滿足臨床搶救需求，可能存在新鮮冰凍血漿融化后未輸注的浪費現(xiàn)象。根據(jù)美國血庫協(xié)會《血站和輸血服務機構標準》和美國食品藥品監(jiān)督管理局《人血液和血液成分使用說明》，新鮮冰凍血漿在 2^°C～6^°C 的儲存期為從解凍起算 ^120h ，稱為融化血漿。有研究[12-13]報道，融化血漿仍有足夠的凝血因子和活性，可用于大量失血、急性出血患者的治療。因此，根據(jù)臨床應用實際，借鑒《血站和輸血服務機構標準》與《人血液和血液成分使用說明》，《血液儲存標準》（WS399—2023）進行了調(diào)整，將新鮮冰凍血漿修改為“新鮮冰凍血漿儲存溫度≤-18^°C ，保存期自血液采集之日起1a。解凍后 2^°C～6^°C 保存，應 24h 內(nèi)輸注。在應對緊急大量輸血的情況下，解凍后 2^°C～6^°C 最多儲存5d，且不超過原保存期，不得反復凍融”。為驗證這一修改的合理性，本研究將新鮮冰凍血漿解凍后儲存于4^°C 分別檢測 24h 和 ^120h 時血漿中TP、Fbg、FVⅢ、FV和FII含量，并進行無菌試驗。結果顯示：新鮮冰凍血漿解凍后 4^°C 儲存 24h，120h 的TP和Fbg含量與解凍后 含量相比較，差異無統(tǒng)計學意義； 4^°C24h ，4‰ 條件下FV、FV、FⅡI含量與解凍后 含量比較，均有較為顯著地降低（ Plt;0. 05） ，與原始數(shù)值相比，F(xiàn)V含量約下降36. 67% 和47.78% ，F(xiàn)V含量約下降 9.38% 和25. 00% ，F(xiàn)Ⅱ含量約下降 6.00% 。無菌試驗結果顯示，新鮮冰凍血漿解凍后 ^0h 和新鮮冰凍血漿解凍后儲存于 4‰ 條件下需氧微生物培養(yǎng)瓶及厭氧微生物培養(yǎng)瓶均無菌生長。《臨床輸血技術規(guī)范》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2000]184號）指出，只要Fbg濃度 gt; 0.8g/L ，凝血因子只有正常的 30% 凝血功能仍可能維持正常。因此，從臨床搶救和節(jié)約資源的角度考慮，F(xiàn)Ⅲ含量的下降在可接受范圍內(nèi)，《血液儲存標準》（WS399一2023）的調(diào)整更為科學、合理。但本標準中“解凍后 2^°C～6^°C 保存，最多存儲5d\"并未明確表述該血漿應當做新鮮冰凍血漿使用還是當作普通冰凍血漿使用，這在后期臨床應用時可能需要臨床醫(yī)師根據(jù)患者情況進行綜合評價并合理使用。本研究數(shù)據(jù)也可以為臨床醫(yī)師在緊急使用新鮮冰凍血漿時提供參考。

綜上，《血液儲存標準》（WS399-2023） 對于冷沉淀儲存條件的調(diào)整，能夠更好地保證冷沉淀輸注的安全性，保存Fbg和FV的含量，提高臨床療效；對于新鮮冰凍血漿解凍后儲存條件的修改，不僅能夠減少血液制品的浪費，而且能在一定程度上緩解日益增長的血液制品需求，滿足臨床大量使用血漿的要求，更好地服務于患者。因此，本次標準修改有著重要的臨床意義。但本研究也存在一定局限性。本研究中涉及的冷沉淀和新鮮冰凍血漿均來自南京紅十字血液中心生產(chǎn)，且數(shù)量有限。未來可以考慮選取多中心、增加檢測指標及實驗數(shù)量等，以更好地驗證此次標準修改的合理性。

說明：戴書明、艾俊為共同第一作者。

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通信作者：

閻兵：南京紅十字血液中心成分科科長E-mail：dzxz2o00@sina.com

杜明珠：南京紅十字血液中心體采科組長E-mail：609004751@qq.com

收稿日期：2024—11—07修回日期：2025—03-26責任編輯：吳小紅