鴨疫里默氏桿菌病是由鴨疫里默氏桿菌(Riemerellaanatipestifer,RA)引起的一種水禽急性接觸性敗血傳染病,主要感染鴨、鵝和火雞等禽類。鴨疫里默氏桿菌病主要危害1\~8周齡的幼禽,成年禽類通常不易感。該病可通過飲水、飼料以及帶菌成年禽類等多種途徑傳播,具有極高的發(fā)病率,死亡率可達 5%~75% ,且患病幼禽常表現(xiàn)為發(fā)育不良[1。隨著水禽養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展,該病的防控日益受到重視。然而,由于鴨疫里默氏桿菌病的血清型眾多,且各型之間缺乏交叉免疫保護,疫苗防控效果有限,因此藥物治療仍是關(guān)鍵手段。本研究以廣西靈山某鵝場為研究對象,通過細菌分離培養(yǎng)和藥敏試驗等方法,分析了該場鴨疫里默氏桿菌病的耐藥特性,為其臨床合理用藥提供了科學依據(jù)。
1方法
1.1病料
2025年廣西靈山某種鵝養(yǎng)殖場發(fā)生了大規(guī)模雛鵝死亡的情況。雛鵝在10日齡左右出現(xiàn)死亡,技術(shù)員進行小鵝瘟疫苗緊急接種,同時使用氟苯尼考、多西環(huán)素進行治療,治療后情況未出現(xiàn)好轉(zhuǎn),截至35日齡時死亡率達到 68.2% 出現(xiàn)坡腳、包心包肝等癥狀。養(yǎng)殖戶送檢生病雛鴨,無菌采集病鴨肝臟、脾臟、腎臟、腦等組織器官,置于4℃條件下低溫保存。
1.2檢測試劑
巧克力平板培養(yǎng)基購于環(huán)凱生物科技有限公司,胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA)、胰蛋白酶大豆肉湯(TSB)、麥康凱培養(yǎng)基(MAC)、LB營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基購自青島海博生物科技有限公司;100bpDNAMarker和2 × Rapid TaqPlusMasterMix購于諾唯贊生物科技有限公司;藥敏試紙片購自杭州微生物試劑有限公司。
1.3檢測引物序列信息
參考NCBI中鴨疫里默氏桿菌(RA)、鵝星狀病毒(GAstV)和鵝細小病毒(GPV)等保守基因,合成引物,引物序列如表1所示。
1.4細菌分離鑒定
使用接種環(huán)無菌采集肝臟內(nèi)部以及腦部細菌接種于巧克力平板和MAC平板上,置于 5% CO2 、 37°C 條件下的溫箱培養(yǎng)24h后,觀察菌落形態(tài),挑選純化后的單菌落進行革蘭氏染色,觀察細菌形態(tài)。
1.5病料PCR檢測
將收集的組織病料充分研磨,取上清,將組織上清和
培養(yǎng)的細菌菌液一起進行DNA提取,按照Taq酶說明書要求進行PCR擴增,擴增后的產(chǎn)物進行 2% 瓊脂糖電泳。
1.6細菌藥物敏感性測定
參照《獸醫(yī)微生物學實驗指導》圓紙片擴散法以及抗微生物藥物敏感性試驗執(zhí)行標準(CLSI)進行細菌藥物敏感性測定,檢測對獸醫(yī)常用17種抗生素的敏感性。
2結(jié)果分析
2.1細菌分離培養(yǎng)
病料分離細菌在巧克力平板上生長良好,在MAC平板上不生長,細菌菌落為白色、呈現(xiàn)濕潤圓形菌落,大小在1mm左右。革蘭氏染色發(fā)現(xiàn),細菌為革蘭氏陰性細菌,兩級濃染短桿菌,初步判斷為鴨疫里默氏桿菌。
2.2PCR檢測結(jié)果
PCR檢測發(fā)現(xiàn),對組織研磨上清以及細菌菌液均出現(xiàn)527bp條帶,判定為鴨疫里默氏桿菌感染陽性,鴨星狀病毒和鴨細小病毒陰性。
2.3藥敏試驗結(jié)果
藥敏試驗發(fā)現(xiàn),RA對阿莫西林、氨芐西林、頭孢吡肟、慶大霉素、卡那霉素、阿奇霉素、鏈霉素、新霉素、四環(huán)素、復方新諾明和甲氧芐氨嘧啶11種藥物不敏感,對大觀霉素、氟苯尼考、諾氟沙星和磺胺甲噁唑4種藥物中度敏感,對氯霉素和頭孢他啶2種藥物敏感。但因氯霉素為獸藥禁用藥物,因此選用頭孢他啶作為治療首選藥物。
結(jié)語
水禽養(yǎng)殖業(yè)在廣西家禽養(yǎng)殖中占有十分重要的位置,鵝養(yǎng)殖又在水禽養(yǎng)殖業(yè)占有很大比重,廣西鵝養(yǎng)殖主要集中在玉林、北海等地,飼養(yǎng)的主要品種有合浦鵝、獅頭鵝等[2]。在臨床診斷中,因為大腸埃希菌和鴨疫里默氏桿菌感染鵝都可能會導致有纖維素性滲出,出現(xiàn)“包心包肝”癥狀,為了區(qū)別兩種病原,采用MAC平板進行鑒別,大腸埃希菌在MAC平板上生長出粉紅色菌落,而鴨疫里默氏桿菌在MAC平板上不生長,在細菌培養(yǎng)階段就可以快速對兩種病原進行區(qū)分,可以加快診斷以及治療速度,減少細菌診斷誤判情況的出現(xiàn)。
鴨疫里默氏桿菌病及其繼發(fā)感染的防控需要采取綜合管理措施3。首先,應選用與當?shù)亓餍芯暄逍拖嗥ヅ涞囊呙邕M行免疫接種;其次,通過飼喂營養(yǎng)均衡的優(yōu)質(zhì)日糧,并添加微生態(tài)制劑和必需微量元素,全面提升禽群抵抗力;同時,要嚴格做好養(yǎng)殖環(huán)境的衛(wèi)生管理,包括日常定期消毒和疫情發(fā)生時的強化消毒;此外,針對當前抗生素濫用導致的耐藥性問題,建議在臨床用藥前先進行藥敏試驗,根據(jù)結(jié)果選擇敏感藥物進行精準治療。這種系統(tǒng)化的防控策略能有效控制疫病的發(fā)生和傳播。
參考文獻:
[1]呂澤昊,韓姍姍,秦立廷,等.3株鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定和耐藥性分析[J].中國獸醫(yī)雜志,2023,59(06):87-92.
[2]周英寧,郝潔,韋英益,等.廣西地區(qū)鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定與藥敏試驗分析[J].當代畜牧,2018,(33):35-39.
[3]黃海蓮,潘明輝,李烈東,等.一例鴨疫里默氏桿菌病的診斷報告[J].廣西畜牧獸醫(yī),2019,35(04):161-162.收稿日期:2025-03-28
作者簡介:周沛(1976一),女,漢族,助理獸醫(yī)師。研
究方向:動物疫病防控。*通訊作者:賀會利(1987一),女,漢族,碩士,高級獸
醫(yī)師。研究方向:動物疫病防控與病原分子生物學。