武威市某規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場奶牛乳房炎病原菌分離鑒定及防控效果研究

奶牛乳房炎是嚴(yán)重制約奶牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的全球性問題，從經(jīng)濟層面看，乳房炎致使奶牛產(chǎn)奶量顯著下降，研究統(tǒng)計表明，患乳房炎的奶牛單日產(chǎn)奶量平均下降幅度可達(dá) 20%～50% ，同時，牛奶品質(zhì)惡化，體細(xì)胞數(shù)大幅上升，乳蛋白、乳脂肪含量降低，提升了乳制品企業(yè)的生產(chǎn)成本和質(zhì)量風(fēng)險，治療患病奶牛需投入大量獸藥和人工成本，病死淘汰奶牛更是造成直接經(jīng)濟損失[]。從奶牛健康角度而言，乳房炎引發(fā)奶牛乳房紅腫、疼痛、發(fā)熱等癥狀，嚴(yán)重影響其正常生理機能和生活質(zhì)量，長期患病還會降低奶牛免疫力，增加其他疾病感染風(fēng)險，縮短使用壽命[2。武威市將奶產(chǎn)業(yè)作為現(xiàn)代農(nóng)業(yè)“首位產(chǎn)業(yè)”，奶牛存欄量、鮮奶日加工能力全省第一，2024年奶產(chǎn)量同比增長 18% ，其憑借優(yōu)越自然條件與良好產(chǎn)業(yè)基礎(chǔ)，獲得政策上的大力支持，通過建設(shè)奶源基地、提升加工能力、推動科技創(chuàng)新發(fā)展，目標(biāo)2025年建成甘肅乳都與百億級奶源基地[3-4。在武威市某規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖的快速發(fā)展中，奶牛乳房炎的頻繁發(fā)生成為產(chǎn)業(yè)發(fā)展的阻礙，據(jù)估算，武威市每年因奶牛乳房炎導(dǎo)致的經(jīng)濟損失達(dá)數(shù)千萬元。因此，深入探究武威市某規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場奶牛乳房炎病原菌的種類、分布及耐藥特性，制定有效防控措施，對降低發(fā)病率、保障奶牛健康、提升牛奶質(zhì)量和促進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展意義重大。

1材料與方法

1.1試驗?zāi)膛＿x擇

該養(yǎng)殖場奶牛存欄量達(dá)8000頭，采用現(xiàn)代化養(yǎng)殖模式，管理水平在當(dāng)?shù)靥幱谥械绕?，通過仔細(xì)的臨床觀察，挑選出100頭具有典型奶牛乳房炎癥狀的奶牛，癥狀涵蓋乳房局部紅腫、發(fā)熱、質(zhì)地變硬，乳汁呈現(xiàn)絮狀物、凝塊、變色或水樣化等，保證所選奶牛能較好反映該養(yǎng)殖場乳房炎發(fā)病狀況。

1.2病原菌分離鑒定試驗

對采集的奶樣逐一進(jìn)行詳細(xì)編號記錄，以保證樣品的可追溯性，在嚴(yán)格的無菌實驗室環(huán)境中，使用無菌涂布棒將奶樣均勻涂布于血瓊脂培養(yǎng)基表面，將涂布后的培養(yǎng)基置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24～48h ，期間定時觀察菌落生長情況。待菌落長出后，挑取形態(tài)各異的單個菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，反復(fù)劃線接種于新的血瓊脂培養(yǎng)基，直至獲得純培養(yǎng)物。

1.3藥物敏感性試驗

基于病原菌分離鑒定結(jié)果，篩選出感染同一種病原菌的奶牛，按照隨機分組原則分為4個實驗組，每組奶牛數(shù)量均衡，采用藥敏紙片瓊脂擴散法（K-B法）進(jìn)行藥敏試驗，將分離得到的病原菌用無菌生理鹽水制備成0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙?，相?dāng)于 1.5×10⁸ CFU/mL，用無菌棉簽蘸取菌懸液，均勻涂布于M-H瓊脂平板表面，確保菌液分布均勻，待平板表面稍干后，用無菌鑷子將藥敏紙片輕輕貼于平板表面，各藥敏紙片之間的距離不小于 ：24mm ，紙片距平板邊緣不小于 15mm ，將貼好藥敏紙片的平板置于37 C 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 16～18h 培養(yǎng)結(jié)束后，使用游標(biāo)卡尺精確測量抑菌圈直徑，根據(jù)美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）制定的標(biāo)準(zhǔn)判斷細(xì)菌對各種抗生素的敏感性，分為敏感（S）中介（I）和耐藥（R）三個等級，從而總結(jié)出針對該規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場奶牛乳房炎最有效的藥物。

1.4防控措施實施

在該規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場實施綜合防控措施，在環(huán)境衛(wèi)生管理方面，建立嚴(yán)格的清掃消毒制度，每天定時對牛舍進(jìn)行全面清掃，清除糞便、雜物和污水，采用干清糞工藝，避免污水和糞便長時間堆積；每周至少進(jìn)行3次徹底消毒，交替使用過氧乙酸、戊二醛等消毒劑，防止病原菌產(chǎn)生耐藥性；加強通風(fēng)換氣設(shè)施的維護(hù)和管理，確保牛舍內(nèi)空氣清新，控制牛舍內(nèi)溫度在 10～25°C ，相對濕度在50%～70% ，為奶牛創(chuàng)造良好的生活環(huán)境。

在擠奶操作規(guī)范方面，對擠奶員進(jìn)行專業(yè)培訓(xùn)，要求持健康證上崗，擠奶前，先用40＼～45 C 溫水清洗奶牛乳房，再用干凈毛巾擦干，然后用碘伏或?qū)Ｓ萌轭^消毒劑進(jìn)行乳頭藥浴，待干燥后進(jìn)行擠奶；采用機械化擠奶設(shè)備，定期對擠奶設(shè)備進(jìn)行清洗、消毒和維護(hù)，確保設(shè)備運行正常，擠奶真空度控制在 35～40kPa ，脈動頻率為60＼～70次/min；擠奶結(jié)束后，再次對乳頭進(jìn)行藥浴，防止病原菌侵入。

對于乳房炎的監(jiān)測與治療，建立完善的監(jiān)測體系，每周對奶牛進(jìn)行一次隱性乳房炎檢測，采用加州乳房炎檢測法（CMT）或其他快速檢測方法，及時發(fā)現(xiàn)潛在感染奶牛；每月進(jìn)行一次臨床型乳房炎排查，一旦發(fā)現(xiàn)感染奶牛，立即進(jìn)行隔離治療，根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，選擇敏感抗生素進(jìn)行治療，治療期間密切觀察奶牛病情變化，記錄治療效果，對于病情嚴(yán)重或久治不愈的奶牛，及時進(jìn)行淘汰處理，防止疾病傳播擴散。

2實驗結(jié)果

2.1病原菌分離鑒定結(jié)果

通過分離鑒定，從100份奶樣中成功分離鑒定出多種病原菌。其中，金黃色葡萄球菌35株，占比 35% ，其在血瓊脂培養(yǎng)基上形成圓形、隆起、濕潤、金黃色且具有 β -溶血環(huán)的菌落，革蘭氏染色鏡檢可見革蘭氏陽性球菌呈葡萄串狀排列（圖1）。大腸埃希菌28株，占比 28% ，在血瓊脂培養(yǎng)基上菌落呈灰白色，在麥康凱培養(yǎng)基上形成紅色菌落，革蘭氏染色為陰性桿菌（圖2）。鏈球菌20株，占比 20% ，在血瓊脂培養(yǎng)基上形成灰白色、半透明、表面光滑的小菌落，部分有 ∝ -溶血環(huán)，革蘭氏染色陽性球菌呈鏈狀排列（圖3）。其他病原菌17株，占比 17% ，包括大腸埃希菌屬、葡萄球菌屬其他種等。

2.2藥物敏感性試驗結(jié)果

針對金黃色葡萄球菌，頭孢噻呋的敏感率最高，達(dá)到75% ，抑菌圈直徑平均為 125mm ；對青霉素的耐藥率高達(dá)80% ，抑菌圈直徑多數(shù)小于 10mm 。大腸埃希菌對恩諾沙星敏感率為 70% ，平均抑菌圈直徑 23mm ；對鏈霉素耐藥率 75% 。鏈球菌對頭孢噻呋敏感率 80% ，平均抑菌圈直徑26mm ；對四環(huán)素耐藥率 60% ，具體數(shù)據(jù)詳見表1。

2.3防控效果評估

實施綜合防控措施前，該養(yǎng)殖場奶牛乳房炎發(fā)病率為10% （800/8000），實施防控措施后，第一個月發(fā)病率下降至 8.75% （700/8000），下降幅度相對較小，主要是因為部分慢性感染病例難以在短時間內(nèi)得到有效控制，且牛舍環(huán)境中病原菌的清除需要一定時間。隨著防控措施的持續(xù)實施，第二個月發(fā)病率下降至 6.25% （500/8000），到第三個月及以后，發(fā)病率穩(wěn)定在 5% （400/8000）左右，表明綜合防控措施在降低奶牛乳房炎發(fā)病率方面取得了顯著成效，同時，牛奶質(zhì)量得到明顯改善，體細(xì)胞數(shù)從實施前的50萬個/mL下降至30萬個/mL以下，乳蛋白和乳脂肪含量有所提高，分別達(dá)到 3.2% 和 13.8% 以上，提高了牛奶的商品價值和加工性能。

3分析討論

本研究中，該規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場奶牛乳房炎病原菌以金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和鏈球菌為主，與國內(nèi)其他地區(qū)的相關(guān)研究結(jié)果基本一致[57。金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生多種毒素和酶，如 ∝ -毒素、β-毒素、凝固酶等， ∝ -毒素和β-毒素可破壞乳腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜，導(dǎo)致細(xì)胞溶解和壞死，凝固酶則使血漿凝固，形成纖維蛋白屏障，有利于細(xì)菌在乳腺組織內(nèi)定植和繁殖，逃避機體的免疫防御機制，是引發(fā)臨床型乳房炎的重要病原菌[。如鄧波等研究發(fā)現(xiàn)上海地區(qū)患乳房炎奶牛乳樣中，金黃色葡萄球菌的全年檢出率為 13.33% ，且菌株多重耐藥情況普遍，這與本研究一致。大腸埃希菌細(xì)胞壁上的脂多糖（LPS）具有內(nèi)毒素活性，當(dāng)細(xì)菌侵入乳腺組織后，LPS釋放可引發(fā)機體強烈的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致乳房組織水腫、充血和白細(xì)胞浸潤，當(dāng)養(yǎng)殖場環(huán)境衛(wèi)生條件差，如牛舍糞便清理不及時、污水積聚等，會增加奶牛接觸大腸埃希菌的機會，通過乳頭管逆行感染乳腺，引發(fā)乳房炎。鏈球菌通過黏附素與乳腺上皮細(xì)胞表面受體結(jié)合，侵人細(xì)胞內(nèi)生長繁殖，引發(fā)炎癥，不同種類的鏈球菌致病機制有所差異，如無乳鏈球菌主要通過黏附素與乳腺上皮細(xì)胞表面受體結(jié)合，侵入細(xì)胞內(nèi)生長繁殖，引發(fā)炎癥；停乳鏈球菌則可產(chǎn)生多種酶類，降解乳腺組織中的蛋白質(zhì)和多糖，破壞乳腺結(jié)構(gòu)。

藥敏試驗結(jié)果顯示出病原菌對多種常用抗生素存在較高耐藥率，這一現(xiàn)象令人擔(dān)憂，金黃色葡萄球菌對青霉素、四環(huán)素等具有高耐藥率，主要是由于長期大量不合理使用抗生素，誘導(dǎo)細(xì)菌產(chǎn)生耐藥基因，如金黃色葡萄球菌攜帶的mecA基因可編碼是一種特殊的青霉素結(jié)合蛋白（PBP2a），該蛋白與青霉素的親和力極低，從而使細(xì)菌對青霉素產(chǎn)生耐藥性[10]。大腸埃希菌對鏈霉素、青霉素等耐藥嚴(yán)重，其耐藥機制包括產(chǎn)生氨基糖苷類修飾酶，使鏈霉素失去抗菌活性；通過外排泵系統(tǒng)地將青霉素等抗生素排出細(xì)胞外，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度[11]。這種嚴(yán)重的耐藥情況給奶牛乳房炎的臨床治療帶來極大挑戰(zhàn)，盲目使用抗生素不僅無法有效治療疾病，還會導(dǎo)致耐藥菌株的傳播和擴散，進(jìn)一步惡化耐藥形勢。因此，在臨床治療中，必須嚴(yán)格依據(jù)藥敏試驗結(jié)果，精準(zhǔn)選擇敏感抗生素，避免濫用抗生素，同時，應(yīng)研發(fā)新型抗菌藥物和治療方法，如噬菌體療法、抗菌肽等，成為解決耐藥問題的重要研究方向。

綜合防控措施實施后，奶牛乳房炎發(fā)病率顯著降低，充分證明了該措施的有效性和可行性，加強環(huán)境衛(wèi)生管理，能夠從源頭上減少病原菌的滋生和繁殖；定期徹底清掃牛舍、合理通風(fēng)換氣以及科學(xué)消毒，有效降低了牛舍內(nèi)病原菌的數(shù)量，減少了奶牛感染的機會；規(guī)范擠奶操作流程是預(yù)防乳房炎的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，擠奶前的乳房清洗、乳頭藥浴以及擠奶設(shè)備的定期維護(hù)與消毒，避免了擠奶過程中病原菌的侵入和傳播，嚴(yán)格的擠奶操作規(guī)范，如控制擠奶真空度和脈動頻率，能夠減少乳頭損傷，降低乳房炎的發(fā)生風(fēng)險；對奶牛乳房炎的定期監(jiān)測與及時隔離治療，實現(xiàn)了對疾病的早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療；通過每周的隱性乳房炎檢測和每月的臨床型乳房炎排查，能夠及時發(fā)現(xiàn)感染奶牛，將其隔離并根據(jù)藥敏結(jié)果進(jìn)行精準(zhǔn)治療，防止疾病在牛群中傳播擴散；這不僅提高了治療效果，還降低了整體發(fā)病率。

本研究也存在一定的局限性，如在采樣方面，僅選取了一家規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場，對于武威市其他養(yǎng)殖場的情況代表性不足，無法全面反映該地區(qū)奶牛乳房炎病原菌的分布和耐藥情況；在病原菌研究方面，僅進(jìn)行了常規(guī)的分離鑒定和藥敏試驗，未對病原菌的耐藥基因進(jìn)行深入檢測和分析，無法全面揭示耐藥機制。此外，防控措施的研究時間相對較短，對于長期防控效果以及防控措施實施成本一效益分析不夠完善。未來的研究可以進(jìn)一步擴大采樣范圍，涵蓋不同規(guī)模和養(yǎng)殖模式的奶牛養(yǎng)殖場，全面了解武威市奶牛乳房炎病原菌的分布情況，深入開展病原菌耐藥基因檢測和分析，明確耐藥機制，為開發(fā)新型抗菌藥物和治療方法提供理論依據(jù)。同時，開展長期的防控效果跟蹤研究，優(yōu)化防控措施，并進(jìn)行詳細(xì)的成本一效益分析，為養(yǎng)殖場提供更具操作性和經(jīng)濟性的防控方案。

結(jié)語

本研究系統(tǒng)地對武威市某規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場奶牛乳房炎病原菌進(jìn)行了分離鑒定，并評估了綜合防控措施的效果。明確了金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和鏈球菌是主要病原菌，且這些病原菌對常用抗生素存在不同程度的耐藥性。通過實施加強環(huán)境衛(wèi)生管理、規(guī)范擠奶操作流程、定期監(jiān)測與及時治療等綜合防控措施，奶牛乳房炎發(fā)病率顯著降低，牛奶質(zhì)量得到明顯改善。在實際生產(chǎn)中，養(yǎng)殖場應(yīng)高度重視病原菌監(jiān)測，嚴(yán)格根據(jù)藥敏結(jié)果合理用藥，持續(xù)強化綜合防控措施的落實，以切實保障奶牛健康，有效提高養(yǎng)殖效益和牛奶質(zhì)量安全，促進(jìn)武威市奶牛養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)、健康發(fā)展。同時，針對本研究的局限性，后續(xù)研究需進(jìn)一步深入探索，為奶牛乳房炎防控提供更全面、深入的理論與實踐支持。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃新強.規(guī)模奶牛場泌乳期奶牛常見疫病研究分析[J].中國動物保健，2024，26（09）：21-22.

[2]王向輝，王恩成，周笑世，等.奶牛乳房炎的流行病學(xué)特征與防治措施分析[J].吉林畜牧獸醫(yī)，2024，45（09）：112-114.

[3]張開棟，楊偉剛，王桃，等.武威市奶產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及建議[J].中國牛業(yè)科學(xué)，2024，50（06）：76-78.

[4]趙鑫.武威市奶產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及建議[J].甘肅畜牧獸醫(yī)，2023，53（02） ：86-89.

[5] 郭建超，劉建營，方露，等.廣東地區(qū)部分牧場奶牛乳房炎病原菌流行情況調(diào)查[J].中國奶牛，2025，（01）：31-34.

[6] 馬洪鵬，邵偉，婁肖肖，等.新疆部分地區(qū)奶牛源大腸埃希菌的流行性與耐藥性分析[J].中國畜牧獸醫(yī)，2025，52（01）：470-480.

[7]閆增軍，要甜甜，葛生虎.邢臺市某規(guī)模化奶牛場奶牛乳房炎流行病學(xué)調(diào)查及致病菌分離鑒定[J].青海畜牧獸醫(yī)雜志，2024，54（02）：40-42.

[8]廖毅婷，林嘉熙，龍淼.奶牛乳房炎源金黃色葡萄球菌噬菌體的分離鑒定、生物學(xué)特性及初步應(yīng)用[J].中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2025，30（06）：70-78.

[9]鄧波，王曉旭，江春鈴，等.上海地區(qū)乳源金黃色葡萄球菌耐藥特性及耐藥基因分型研究[J].中國奶牛，2025，（02）：21-26.

[10]王笑笑，馬小娟，胡嘉莘，等.新疆阿克蘇地區(qū)羊源耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的分離鑒定及毒力基因與耐藥性分析[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2024，46（05）：484-491.

[11]王靈，沈留紅，唐俊妮，等.奶牛場環(huán)境中耐藥大腸埃希菌的分離及耐藥基因遺傳環(huán)境分析[J].生態(tài)毒理學(xué)報，2025，20 （01） ：329-343.

收稿日期：2025-04-18

作者簡介：苗承霞（1990—），女，漢族，本科，獸醫(yī)師。研究方向：畜牧獸醫(yī)。*通訊作者：張延浩（1990—），男，漢族，本科，獸醫(yī)師。研究方向：畜牧獸醫(yī)。