31種中藥材水提取物對(duì)茄子綿疫病病原菌的抑制作用

中圖分類號(hào)：S641.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1673-2871（2025）06-203-06

Inhibitory effects of aqueous extracts from 31 traditional Chinese herbs on phytophthora blight of eggplant

TAN Zhiyong'，LI Yuzhu'， TAN Daxin2，XU Zaiqian'， CHEN Xiaoxiong

1.TongrenUiaicein

Abstract：This study investigates the inhibitoryefects of extracts from traditional Chinese herbs on phytophthora blight ofeggplant，aiming toprovidescientific basis fortheselectionandresearchanddevelopmentofbotanicalfungicideof phytophthora blightof eggplant.The efectsofaqueous extracts from31traditional Chinese herbsonPhytophthoracapsiciandPhytophthoranicotianae were measuredby mycelial growthrate method.Theresultsshowedthattheaqueous extractsofdiferentChineseherbshaddifferenteffectsonthemycelialgrowthofthetestedfungi，andtheinhibitionrates was 0-100% .Theaqueous extractsof Coptis chinensis Franch.hadthe most significant inhibitoryeffect on the two pathogens，and the inhibition rate was 100% .The EC₅₀ valuesof the aqueous extract of Coptischinensis Franch.onPhytophthoracapsiciandPhytophthoranicotianaewere 1.063mg?mL^-1 and 1.286mg?mL^-1 ，respectively.Thisstudy providesa new way and data support fortheprevention and controlof phytophthora blightof eggplant and the developmentof botanical fungicide .

KeyWords：Phytophthorablightofeggplant;Phytophthoracapsici;Phytophthoranicotianae;Botanicalfungicide

綿疫病為茄子三大病害之一，全生育期均可發(fā)生，苗期和成株期均可受害，一般會(huì)導(dǎo)致減產(chǎn) 20%～ 30% ，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)損失超過 50% ，主要危害茄果，也能危害葉、莖、花器等部位。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，辣椒疫霉菌[2-4]和煙草疫霉菌[4-5]均能引發(fā)茄子綿疫病。

對(duì)于茄子綿疫病的防治，目前仍以化學(xué)防治為主。唐可蘭等研究表明，使用 46% 氫氧化銅水分散粒劑與 1% 申嗪霉素水劑對(duì)防治茄子綿疫病具有較好的效果。莫定鳴為篩選防治茄子綿疫病效果較好的藥劑，在田間對(duì)幾種殺菌劑進(jìn)行了試驗(yàn)，結(jié)果表明， 687.5g?L^-1 霜霉威鹽酸鹽·氟吡菌胺懸浮劑800倍液處理對(duì)茄子葉片、果實(shí)綿疫病防治效果最好。朱輝等研究表明， 25% 烯菌酯乳油、 25% 吡唑醚菌酯乳油和 50% 烯酰嗎啉可濕性粉劑是防治辣椒疫霉菌的理想藥劑。葉玉濤通過室內(nèi)盆栽試驗(yàn)和田間小區(qū)試驗(yàn)的結(jié)果表明，丁吡嗎啉能有效防治辣椒疫病?；粜衃通過室內(nèi)篩選試驗(yàn)的結(jié)果表明，惡霜·錳鋅、氟菌·霜霉威、烯酰嗎啉·嘧菌酯、申嗪霉素、雙炔酰菌胺和氟噻唑吡乙酮等6種藥劑達(dá)到有效濃度 （ρ 后同） 10μg?mL^-1 時(shí)，對(duì)煙草疫霉菌菌絲生長有較好的抑制效果，其中氟噻唑吡乙酮在有效濃度降至 0.1μg?mL^-1 時(shí)，抑菌率仍達(dá)到 100% 。

化學(xué)防治雖然見效快，效果好，但是長期使用化學(xué)農(nóng)藥防治作物病蟲害，存在農(nóng)藥殘留超標(biāo)[11-14]、容易產(chǎn)生抗藥性[15]、污染環(huán)境[16-17等問題。因此，高效低毒低殘留的植物源農(nóng)藥的研究和開發(fā)將是未來農(nóng)藥發(fā)展的重要方向[18-20]。鑒于此，筆者采用菌絲生長速率法測定31種中藥材水提物分別對(duì)茄子綿疫病兩種病原菌（辣椒疫霉菌和煙草疫霉菌）的影響，以期為茄子綿疫病植物源農(nóng)藥選擇與研發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試病原真菌供試的辣椒疫霉菌由北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院提供，煙草疫霉菌由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)李強(qiáng)副教授饋贈(zèng)。

1.1.2中藥材料中藥材購于銅仁市大健康產(chǎn)業(yè)園，粉碎機(jī)粉碎后過20目篩，得到的粉末置于陰涼干燥處密封保存，備用。

1.2 方法

1.2.1中藥材提取液的制備稱取 20g 中藥材粉末，按料液質(zhì)量比1：20（即 20g 中藥材，加入 400g 的水）于 30^°C 搖床振蕩培養(yǎng) 24h ，抽濾，收集濾液，75^°C 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用無菌水定容至 50mL ，即得到中藥材的水提取物母液，濃度為 0.4g?mL^-1 （即每1mL 提取物中含 0.4g 中藥材干物質(zhì)），保存于 4^°C 備用。

1.2.2含提取物PDA培養(yǎng)基的制備在無菌條件下，將中藥材水提取物與已滅菌并冷卻到 50^°C 左右的PDA培養(yǎng)基均勻混合，制成中藥材水提取物濃度為 20mg?mL^-1 的含藥培養(yǎng)基。以此方法，得到不同種類中藥材水提取物的含藥培養(yǎng)基。

1.2.3中藥材提取物對(duì)疫霉菌抑制活性的測定采用菌絲生長速率法測定中藥材水提取物對(duì)供試菌菌落生長的抑制作用。用直徑 5mm 的打孔器在PDA平板上打取菌落邊緣的新鮮菌絲塊，接至含中藥的培養(yǎng)基中，重復(fù)3組，置于 25^°C 培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)，7d后，用十字交叉法測量菌落直徑。以培養(yǎng)基中未加入中藥提取物為對(duì)照（CK）。各指標(biāo)均重復(fù)測定3次，取平均值。抑菌率 1%= （CK菌落直徑-處理菌落直徑）/（CK菌落直徑 -0.5）×100 。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用WPSOffice對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步處理，采用SPSS19進(jìn)行方差分析和多重比較（LSD法）。毒力計(jì)算參照戴美玲等2的方法，以各提取物不同質(zhì)量濃度 （10，5，2.5，1.25，0.625mg?mL^-1） 的對(duì)數(shù)值（x） 和菌落生長抑制率的概率值 （y） 求取毒力回歸方程 y=a+bx ，并計(jì)算 EC₅₀ 值

2 結(jié)果與分析

2.1中藥材水提取物對(duì)辣椒疫霉菌菌絲生長的抑制效果

采用生長速率法測定了31種中藥材水提取物對(duì)辣椒疫霉菌的影響。由表1可知，不同中藥材水提取物對(duì)供試菌株菌絲生長的影響存在差異，抑制效果依次為黃連 gt; 五加皮 gt; 薄荷 gt; 魚腥草 gt; 穿心蓮 gt; 決明 gt; 甘草 gt; 苦參 gt; 蘆薈 gt; 大黃 gt; 蒲公英 gt; 紫草 gt; 細(xì)辛 gt; 陳皮 gt; 銀杏 gt; 丁香 gt; 黃柏 gt; 蒼術(shù) gt; 馬鞭草 gt; 半夏 gt; 當(dāng)歸 gt; 馬齒莧 紫蘇 gt; 獨(dú)活 gt; 百部gt; 牛蒡 gt; 側(cè)柏 gt; 黃精 gt; 蒼耳 gt; 天麻 gt; 天南星。當(dāng)水提物濃度為 20mg?mL^-1 時(shí)，黃連的抑制作用最為顯著，抑菌率為 100% 。抑菌率在 80% 以上的藥物有五加皮（ 96.18% ）、薄荷（ 88.26% ）、魚腥草（ 83.49% 和穿心蓮 83.01% 。

2.2黃連水提取物對(duì)辣椒疫霉菌的毒力

采用生長速率法測定了黃連水提取物濃度10、5.2.5，1.25，0.625mg^?mL^-1 對(duì)辣椒疫霉菌的影響，并計(jì)算其 EC₅₀ 值。由表2可知，黃連水提取物毒力回歸方程的決定系數(shù)在0.9以上，說明回歸方程擬合度較高， EC₅₀ 值為 1.063mg?mL^-1 ，黃連對(duì)辣椒疫霉菌有顯著的抑制作用。

2.3中藥材水提取物對(duì)煙草疫霉菌菌絲生長的抑制效果

由于蒼術(shù)、薄荷、天麻3中藥材處理對(duì)煙草疫霉無抑菌效果，且處理感染比較嚴(yán)重，因此，筆者采用生長速率法測定了其余28種中藥材水提取物對(duì)煙草疫霉菌的影響。由表3可知，不同中藥材水提取物對(duì)供試菌株菌絲生長存在差異，其對(duì)供試菌株菌絲生長的抑制效果依次為黃連 gt; 丁香 gt; 陳皮 gt; 大黃 gt; 五加皮 gt; 蘆薈 gt; 甘草 gt; 苦參 gt; 黃柏 gt; 馬鞭草 gt; 當(dāng)歸 gt; 魚腥草 gt; 百部 gt; 蒲公英 gt; 銀杏 gt; 黃精 gt; 細(xì)辛gt; 天南星 gt; 決明 gt; 側(cè)柏 gt; 穿心蓮 gt; 牛蒡。當(dāng)水提物濃度為 20mg?mL^-1 時(shí)，黃連的抑制作用最為顯著，抑菌率為 100% 。抑菌率在 50% 以上的藥物還有丁香0 58.95% ）、陳皮 （53.38% ）、大黃 52.03% 和五加皮（50.45% ）。而獨(dú)活、紫草、紫蘇、蒼耳、馬齒莧和半夏均對(duì)煙草疫霉菌菌絲生長無抑制作用。

2.4黃連水提取物對(duì)煙草疫霉菌的毒力

采用生長速率法測定了黃連水提取物濃度10、5.2.5，1.25，0.625mg?mL^-1 對(duì)煙草疫霉菌的影響，并計(jì)算其 EC₅₀ 值。由表4可知，黃連水提取物毒力回歸方程的決定系數(shù)在0.9以上，說明回歸方程擬合度較高， EC₅₀ 值為 1.286mg?mL^-1 ，黃連對(duì)煙草疫霉菌有顯著的抑制作用。

3 討論與結(jié)論

茄子起源于亞洲，營養(yǎng)價(jià)值高，食用方式多樣，深受廣大消費(fèi)者的歡迎，是我國一種重要的茄果類蔬菜，其質(zhì)量和安全問題也備受關(guān)注[22-23]。我國是世界中藥資源最豐富的國家，從中藥中發(fā)現(xiàn)具有殺菌活性的化合物，以其為先導(dǎo)合成新型化學(xué)農(nóng)藥，或直接將其開發(fā)成植物源農(nóng)藥，是新農(nóng)藥創(chuàng)制的熱點(diǎn)之一[24]。

筆者研究了中藥材水提物對(duì)茄子綿疫病的兩種病原菌辣椒疫霉菌和煙草疫霉菌的抑制作用，結(jié)果表明，濃度為 20mg?mL^-1 的黃連等31種中藥材水提取物對(duì)辣椒疫霉菌有抑制作用，抑菌率在6.61%～100% 。辣椒疫霉菌因首次在辣椒植株上發(fā)現(xiàn)、描述而被命名[25-26]，隨后發(fā)現(xiàn)可侵染茄子等多種作物，是茄子發(fā)生綿疫病的病原菌之一。關(guān)于植物提取物對(duì)辣椒疫霉菌抑制作用的研究較少，王瑞等[27研究表明，在韭菜汁液濃度達(dá)到 20% 時(shí)對(duì)辣椒疫霉菌的抑制作用才達(dá)到 100% ，且隨著時(shí)間的推移，韭菜汁中具有抑制作用的物質(zhì)會(huì)失活或者揮發(fā)，導(dǎo)致菌絲再生長。吳禮鵬[2研究了秦嶺地區(qū)金絲桃等143種植物的提取物在 100mg?mL^-1 濃度下對(duì)辣椒疫霉菌的抑制作用，結(jié)果表明，只有金絲桃等14種植物提取物對(duì)辣椒疫霉菌的抑菌率在 80% 以上，占總篩選植物的 9.79% ，未含有本文中研究的中藥材，抑制效果最好的為金絲桃，其抑菌率在96.3% ，低于本文篩選出來的黃連 20mg?mL^-1 濃度下對(duì)辣椒疫霉菌 100% 的抑菌率。吳康2研究發(fā)現(xiàn)，50mg?mL^-1 莧菜提取物對(duì)辣椒疫霉菌的抑菌率在51.24% ，低于本研究篩選出的黃連等17種中藥材提取物 20mg?mL^-1 濃度時(shí)的抑菌率。江茂生[]研究發(fā)現(xiàn)，艾蒿乙酸乙酯提取物對(duì)辣椒疫霉菌的 EC₅₀ 值為 16.73mg?mL^-1 ，高于本研究中篩選出來的黃連對(duì)辣椒疫霉菌的 EC₅₀ 值 （1.063mg?mL^-1） 。張永欣等[研究表明，黃連提取物在 0.1mg?mL^-1 濃度時(shí)對(duì)辣椒疫霉菌的抑制活性就達(dá)到 50.00% ，高于本研究中 0.625mg?mL^-1 黃連水提取物對(duì)辣椒疫霉菌的抑菌活性，這可能與黃連的提取和純化工藝不同有關(guān)。

濃度為 20mg?mL^-1 的黃連等22種中藥材水提取物對(duì)煙草疫霉菌有抑制作用，不同中藥材提取物對(duì)供試菌菌絲生長的影響存在差異，抑菌率在0.38%～100% 。煙草疫霉菌屬卵菌門疫霉屬，病菌為兼性腐生菌，喜高濕，在自然條件下還可以侵染煙草、草莓、茄子等植物[32-33]。關(guān)于植物提取物對(duì)煙草疫霉菌抑制作用的研究較少，賴榮泉等[34、商勝華等[5]和李繼偉等3研究發(fā)現(xiàn)，大蒜和蕓臺(tái)屬3種植物提取物對(duì)煙草疫霉菌有較好的抑菌效果，其中大蒜水提物對(duì)煙草疫霉菌的 EC₅₀ 值為 40mg?mL^-1 ，而不同濃度的蕓臺(tái)屬蕪菁、芥菜和油菜的醇提取液對(duì)煙草疫霉菌的 EC₅₀ 值分別為11.39、9.18和 5.88mg?mL^-1 ，均高于本研究篩選出來的黃連對(duì)煙草疫霉菌的EC₅₀ 值 （1.063mg?mL^-1） 。朱三榮等[7和萄劍渝等[38]對(duì)土黃連等多種中藥材乙醇提物對(duì)煙草疫霉菌的抑制效果進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，細(xì)辛、銀杏和苦參等中藥材的提取物對(duì)煙草疫霉菌菌絲生長有抑制效果，這與本研究結(jié)果一致，但是其相應(yīng)的抑菌率遠(yuǎn)高于本研究的抑菌率，可能是中藥材提取方式、濃度表示方式不一樣導(dǎo)致的，細(xì)辛等中藥材提取的工藝、主要抑菌活性成分等還有待進(jìn)一步深入研究。

本研究中對(duì)茄子綿疫病兩種病原菌都有顯著抑菌效果的是黃連水提取物，黃連為毛茛科黃連屬多年生草本植物，以根莖入藥，具有廣泛抗菌、抗病毒和抗化作用[39。黃連中主要抑菌成分小檗堿（又名黃連素）[40-42]是一種異喹啉生物堿，目前我國以小檗堿為主要有效成分生產(chǎn)的多種植物源農(nóng)藥已完成登記工作，并形成了產(chǎn)品，登記作物為黃瓜、番茄、桃樹、辣椒等，而關(guān)于黃連水提取物對(duì)茄子綿疫病菌抑制作用的報(bào)道尚屬首次，對(duì)于該植物源農(nóng)藥拓展使用范圍有一定的指導(dǎo)意義。

綜上所述，31種中藥材水提取物對(duì)辣椒疫霉菌菌絲生長的影響存在差異，抑菌率在 6.61%～ 100% 。當(dāng)水提物濃度為 20mg?mL^-1 時(shí)，黃連的抑制作用最為顯著，抑菌率為 100% ， EC₅₀ 值為1.063mg?mL^-1 ；抑菌率在 80% 以上的藥物有五加皮C 96.18% ）、薄荷 88.26% ）、魚腥草（ 83.49% 和穿心蓮 （83.01% ）。28種中藥材水提取物對(duì)煙草疫霉菌菌絲生長的影響存在差異，抑菌率在 0～100% 。當(dāng)水提物濃度為 20mg?mL^-1 時(shí)，黃連的抑制作用最為顯著，抑菌率為 100% ， EC₅₀ 值為 1.286mg?mL^-1 ；抑菌率在 50% 以上的藥物有丁香（ 58.95% ）、陳皮中 53.38% ）、大黃 52.03% 和五加皮 （50.45% ）；而獨(dú)活、紫草、紫蘇、蒼耳、馬齒莧和半夏均對(duì)煙草疫霉菌菌絲生長無抑制作用。

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