基于Fe2O3/氮摻雜碳納米材料類氧化酶活性的抗壞血酸比色檢測(cè)

摘要 以吡咯和1，2，3，4-丁烷四羧酸為原料、氯化鐵為氧化劑，采用濕化學(xué)法和熱解法合成了具有高類氧化酶活性的三氧化二鐵/氮摻雜碳納米材料（Fe2O3/N-C）。采用掃描電子顯微鏡、面掃描元素分析、X 射線衍射、X 射線光電子能譜和傅里葉變換紅外光譜對(duì)Fe2O3/N-C 的結(jié)構(gòu)及形貌進(jìn)行了表征。Fe2O3/N-C 能夠高效催化無色的的3，3′，5，5′-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）氧化為藍(lán)色的氧化態(tài)TMB（oxTMB），表現(xiàn)出類氧化酶活性?；诳箟难幔ˋA）可抑制Fe2O3/N-C 對(duì)TMB 的催化顯色反應(yīng)，致使體系顏色變淺且吸光度降低的原理，構(gòu)建了一種用于檢測(cè)AA 的靈敏且準(zhǔn)確的比色傳感器，線性范圍為0.25～30 μmol/L，檢出限為0.1 μmol/L，并成功應(yīng)用于飲料和片劑樣品中AA 的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 抗壞血酸；類氧化酶；比色傳感器；納米酶

抗壞血酸（Ascorbic acid， AA）又稱維生素C，是生命體成長不可缺少的維生素之一，在人體新陳代謝、酶促反應(yīng)和機(jī)體損傷修復(fù)等生理過程中發(fā)揮了重要作用[1-3]。人體缺乏自主合成AA 所需的酶，因此AA 不能在人體內(nèi)產(chǎn)生，只能通過攝入食物獲取。當(dāng)人體內(nèi)AA 含量不足時(shí)，會(huì)導(dǎo)致壞血病、動(dòng)脈粥樣硬化、肝臟疾病和白內(nèi)障等多種疾病；如人體攝入過量AA，容易出現(xiàn)腹瀉、結(jié)石和胃痙攣等癥狀[4]。因此，開發(fā)一種快速、靈敏和選擇性的AA 檢測(cè)方法對(duì)于保障人體健康具有重要意義。

目前，檢測(cè)AA 的方法包括高效液相色譜法[5]、氣相色譜法[6]和固相萃取與順序注射分析法[7]等。這些方法大多存在設(shè)備昂貴、操作繁瑣和成本高等缺點(diǎn)。相比而言，比色法因具有檢測(cè)成本低、操作簡便和可視化等優(yōu)點(diǎn)而備受關(guān)注[8]。但是，比色法仍存在靈敏度低和準(zhǔn)確度差的問題。因此，需要采用合適策略提高比色法的檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性。近年來，研究者發(fā)現(xiàn)利用酶可以顯著提高比色法的檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性[9]。然而，天然酶雖具有良好的催化活性，但存在制備復(fù)雜和穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，限制了其廣泛應(yīng)用。納米酶是一類具有類生物酶催化活性的納米材料，與天然酶相比，具有合成簡單、穩(wěn)定性好以及成本低等優(yōu)點(diǎn)，被認(rèn)為是天然酶的理想替代品[10-12]。

目前，研究者已發(fā)現(xiàn)多種納米材料具有類酶活性，如金屬硫化物[13]、貴金屬納米顆粒[14]、金屬有機(jī)框架[15]和碳納米材料[16]等。然而，大多數(shù)報(bào)道的納米酶均為類過氧化物酶納米酶，需要使用過氧化氫（H2O2） 作為氧化劑，而H2O2 通常不穩(wěn)定且易分解，從而造成環(huán)境污染；同時(shí)， H2O2 也易緩慢氧化無色底物，從而導(dǎo)致出現(xiàn)背景顏色，這些均限制了類過氧化物酶納米酶在傳感檢測(cè)中的應(yīng)用。相對(duì)而言，類氧化酶納米酶不需要H2O2 即可氧化無色底物，因此具有更廣闊的應(yīng)用前景[17-20]。目前，具有類氧化酶活性的納米材料主要以貴金屬納米材料為主，如鉑基納米材料[17-20]。然而，由于貴金屬價(jià)格高，在很大程度上限制了此類納米材料的廣泛應(yīng)用。因此，開發(fā)低成本且具有高類氧化酶活性的非貴金屬納米酶具有重要意義。Peng 等[21]采用鈷-鐵普魯士藍(lán)類似物納米立方體類氧化酶納米酶成功構(gòu)建了用于檢測(cè)AA 的傳感器，線性檢測(cè)范圍為1.0～15.0 μmol/L，檢出限為0.399 μmol/L。Han 等[22]采用鐵-錳雙金屬類氧化酶納米酶構(gòu)建AA傳感器，在8.0～56.0 μmol/L 濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，檢出限為0.88 μmol/L。Guo 等[23]使用含金屬卟啉的多孔有機(jī)聚合物類氧化酶納米酶構(gòu)建AA 傳感器，線性檢測(cè)范圍為20.0～400.0 μmol/L，檢出限為1.60 μmol/L。Li 等[24]基于銀納米粒子/單壁碳納米管復(fù)合材料類氧化酶納米酶構(gòu)建AA 傳感器，線性檢測(cè)范圍為0.4～5.0 μmol/L，檢出限為0.13 μmol/L。Zhou 等[25]采用雙金屬銅銀微花類氧化酶納米酶構(gòu)建檢測(cè)AA 的傳感器，線性檢測(cè)范圍為3.0～30.0 μmol/L，檢出限為0.34 μmol/L。然而，上述基于類氧化酶納米酶構(gòu)建的AA 傳感器的性能仍存在提升空間。

本研究采用吡咯和1，2，3，4-丁烷四羧酸（BTCA）為原料、FeCl3 為氧化劑，利用濕化學(xué)法快速合成水凝膠，經(jīng)冷凍干燥處理，得到固體粉末，然后于高溫條件下熱解，成功制備出具有高類氧化酶活性的三氧化二鐵/氮摻雜碳納米材料（Fe2O3/N-C）。在酸性緩沖溶液中， Fe2O3/N-C 能夠高效催化并產(chǎn)生大量的超氧自由基（·O2?）和羥基自由基（·OH）。這些自由基具有強(qiáng)氧化性，可將無色的的3，3′，5，5′-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）氧化為藍(lán)色的氧化態(tài)TMB（oxTMB）。當(dāng)向體系中加入具有還原性的AA 后， AA 會(huì)將藍(lán)色的oxTMB 還原為無色的TMB，致使oxTMB 含量減少，從而導(dǎo)致體系顏色變淺。基于上述反應(yīng)原理構(gòu)建了一種可用于靈敏、準(zhǔn)確檢測(cè)AA 的比色傳感器。Fe2O3/N-C 材料的合成和AA 檢測(cè)原理如圖1 所示。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

UV-8453 紫外可見分光光度計(jì)（美國Agilent 公司）；SU8100 掃描電子顯微鏡（日本Hitachi 公司）；傅里葉變換紅外光譜儀和X 射線衍射儀（XRD，德國Bruker 公司）；X 射線光電子能譜儀（XPS，美國Thermo Fisher 公司）。

TMB（上海生工生物工程有限公司）；BTCA 和吡咯（阿拉丁生物化學(xué)技術(shù)有限公司）；乙酸鈉（麥克林生化科技有限公司）；異丙醇（梯希愛化成工業(yè)發(fā)展有限公司）；FeCl3、AA、KCl、NaCl、CuSO4、CoCl2、MgCl2、ZnCl2、BaCl2、CaCl2、Na2SO4、NaNO3、Na2CO3、精氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、谷胱甘肽、煙酰胺、尿酸、葡萄糖、硫胺素、葉酸、牛血清白蛋白、多巴胺、核黃素、乙酸、對(duì)苯醌和色氨酸（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。所用試劑均為分析純；實(shí)驗(yàn)用水為超純水（18.2 MΩ·cm）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 Fe2O3/N-C 的制備

移取70 μL 吡咯和300 μL 1 mmol/L 的BTCA 溶液置于燒杯中，超聲混合均勻，加入1 mL 1 mol/L 的FeCl3 溶液，反應(yīng)2 min 后，以12000 r/min離心10 min，以乙醇和水各清洗1次，得到黑色水凝膠。將黑色水凝膠冷凍干燥，得到固體粉末。稱取0.5 g固體粉末置于管式爐中，于700 ℃下熱解3 h，得到Fe2O3/N-C。

1.2.2 Fe2O3/N-C 的穩(wěn)態(tài)動(dòng)力學(xué)研究

在HAc-NaAc 緩沖溶液（pH 4.5）中，通過監(jiān)測(cè)oxTMB 在652 nm 處的吸光度，研究Fe2O3/N-C 的類氧化酶活性的穩(wěn)態(tài)動(dòng)力學(xué)行為。依次加入50 μL Fe2O3/N-C（1 mg/mL）、100 μL HAc-NaAc緩沖溶液（0.2 mol/L，pH 4.5）和不同濃度的TMB，然后加入超純水稀釋至2 mL，混合均勻，所得溶液立即通過紫外-可見分光光度計(jì)記錄溶液在652 nm 處的吸光度。將上述吸光度隨時(shí)間變化的動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)通過Michaelis-Menten 方程的雙倒數(shù)Lineweaver-Burk 曲線進(jìn)行擬合和分析，獲得米氏常數(shù)（Km）和最大反應(yīng)速率（vmax），其計(jì)算公式如下：

其中， v0 是初始反應(yīng)速率，[S]是底物濃度。

1.2.3 比色法檢測(cè)AA

依次將50 μL 1 mg/mL 的Fe2O3/N-C、100 μL 0.2 mol/L 的HAc-NaAc 緩沖溶液（pH 4.5）加入到反應(yīng)體系中，再分別加入不同體積（0、5、10、15、20、50、100、150、200 和300 μL）的0.1 mmol/L AA 溶液，或不同體積（40、60、90、140 和200 μL）的1.0 mmol/L AA 溶液；向體系中加入100 μL 10 mmol/L的TMB，補(bǔ)加超純水至總體積為2 mL，充分混勻，在室溫下孵育3 min，采用紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)定其吸收光譜。

1.2.4 實(shí)際樣品中AA 的檢測(cè)

復(fù)合果汁飲料（其AA 含量標(biāo)示值為22.5 mg/100 mL）購自南昌本地超市。取適量飲料樣品，以12000 r/min 離心10 min，收集上清液，用超純水稀釋10 倍，過0.22 μm 濾膜，移取300 μL 濾液作為樣品溶液，利用本方法測(cè)定其AA 含量。

維生素C 片（其AA 含量標(biāo)示值為812.4 mg/g）購自南昌本地藥店。準(zhǔn)確稱量適量的維生素C 片，充分粉碎后，溶于200 mL 水中；將所得溶液以12000 r/min 離心10 min，收集上清液，用超純水稀釋10 倍后過0.22 μm 濾膜；移取20 μL 濾液作為樣品溶液，采用本方法測(cè)定其AA 含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 Fe2O3/N-C 的表征

Fe2O3/N-C 的掃描電子顯微鏡（SEM）和面掃描元素圖如圖2A～2E 所示， Fe2O3/N-C 含有高度交聯(lián)的球形納米顆粒且表面有褶皺，同時(shí)含有碳（C）、氮（N）、氧（O）和鐵（Fe）元素。由圖2B 和圖2C 可見， C 元素與N 元素幾乎重疊；由圖2D 和圖2E 可見， O 元素與Fe 元素幾乎重疊，表明可能存在氮摻雜碳納米材料以及鐵的氧化物。由Fe2O3/N-C 的XRD 圖譜（圖2F）可見，在14.9o、18.3o、23.7o、30.2o、33.8o、35.5o、37.2o、40.2o、43.2o、44.7o、53.7o、57.3o、62.9o和74.5o處出現(xiàn)衍射峰，分別對(duì)應(yīng)磁赤鐵礦Fe2O3（JCPDS No. 39-1346）的（110）、（111）、（210）、（220）、（310）、（311）、（222）、（321）、（400）、（410）、（422）、（511）、（440）和（533）晶面，而在26.3o處的衍射峰對(duì)應(yīng)石墨C（JCPDS No. 41-1487），表明所制備的材料主要含有Fe2O3 和碳材料。

采用XPS 對(duì)Fe2O3/N-C 表面含有的元素和基團(tuán)進(jìn)行研究。由Fe2O3/N-C 的XPS 全譜圖（圖3A）可見，F(xiàn)e2O3/N-C 中含有C、N、O 和Fe 元素。結(jié)合SEM 面掃描元素分析和XRD 分析結(jié)果，可以證明Fe2O3/N-C 為Fe2O3 和氮摻雜碳材料的復(fù)合物。C 1s 的高分辨率XPS 擬合曲線（圖3B）顯示有3 個(gè)峰，分別對(duì)應(yīng)C—C/C=C/C—H （284.8 eV）、C—N/C—O/C=N （285.99 eV） 和C=O （288.71 eV）[26]。N 1s 的高分辨率XPS 擬合曲線（圖3C）顯示有4 個(gè)峰，分別對(duì)應(yīng)吡啶氮（398.47 eV）、吡咯氮（400.53 eV）、石墨氮（401.69 eV）和氧化氮（406.71 eV）[27]。O 1s 的高分辨率XPS 擬合曲線（圖3D）顯示在530.23、531.82和532.88 eV 處有3 個(gè)峰，分別對(duì)應(yīng)Fe—O、C—O 和C=O[28]。Fe 2p 高分辨率XPS 譜（圖3E）中在711.12 和724.22 eV 處有2 個(gè)峰，分別對(duì)應(yīng)Fe 2p3/2 和Fe 2p1/2，在719.0 eV 處存在的衛(wèi)星峰為Fe2O3 的特征峰[29-30]。在傅里葉變換紅外（FT-IR）光譜（圖3F）中， 3431 cm?1 處的紅外吸收帶源于N—H 和O—H 的伸縮振動(dòng)；1627 cm?1 處的紅外吸收帶源于C=O、C=C 和C=N 的伸縮振動(dòng)；1404～1041 cm?1 范圍內(nèi)的紅外吸收帶源于C—O 和C—N 的伸縮振動(dòng)、C—H 的彎曲振動(dòng)和C—C 骨架振動(dòng)；586 cm?1 處的紅外吸收帶為Fe—O 的振動(dòng)峰[26，31]。

2.2 Fe2O3/N-C 的類氧化酶活性

通過監(jiān)測(cè)TMB 的顯色反應(yīng)考察Fe2O3/N-C 的類氧化酶活性。如圖4A 所示，當(dāng)TMB 溶液和Fe2O3/N-C溶液單獨(dú)存在時(shí)，無顏色變化；當(dāng)二者同時(shí)存在時(shí)，溶液顏色明顯變藍(lán)，并且在652 nm 處有1 個(gè)明顯的吸收峰。此外，由圖4B 可見， N2 存在時(shí)， 652 nm 處的吸光度下降；加入O2 后，吸光度明顯增強(qiáng)。上述結(jié)果證明Fe2O3/N-C 具有類氧化酶活性。為了進(jìn)一步評(píng)估Fe2O3/N-C 的類氧化酶活性，通過Lineweaver-Burk 雙倒數(shù)法估算了Michaelis-Menten 常數(shù)（Km）和最大反應(yīng)速率（vmax）。如圖5 所示， Fe2O3/N-C 對(duì)底物TMB 的Km 值為0.087 mmol/L， vmax 為7.3×10?8 mol/（L?s）。與已報(bào)道的類氧化酶納米酶相比， Fe2O3/N-C對(duì)底物TMB 具有更低的Km[18-25]，表明Fe2O3/N-C 對(duì)TMB 有更強(qiáng)的親和力。

2.3 Fe2O3/N-C 的類氧化酶活性的催化機(jī)理

如圖6A 所示，當(dāng)加入·O2?的特異性清除劑對(duì)苯醌（PBQ）[32]后， Fe2O3/N-C 對(duì)TMB 的催化活性顯著降低，這表明Fe2O3/N-C 納米酶在催化過程中會(huì)產(chǎn)生·O2?。加入AA 后， Fe2O3/N-C 納米酶將無色的TMB 催化氧化產(chǎn)生藍(lán)色oxTMB 的量有所減少。結(jié)合文獻(xiàn)[18-25]的研究結(jié)果，推測(cè)這可能由于AA 具有很強(qiáng)的還原能力，能夠?qū)⑺{(lán)色的oxTMB 還原為無色的TMB。此外，當(dāng)同時(shí)加入PBQ 和AA 后， Fe2O3/N-C 納米酶將無色TMB 催化氧化為藍(lán)色oxTMB 的量顯著減少。這可能是由于PBQ 消耗了Fe2O3/N-C 納米酶在催化過程中產(chǎn)生的·O2?，致使TMB 催化氧化為oxTMB 的量減少；AA 具有強(qiáng)還原性，會(huì)將oxTMB 還原，使得oxTMB 進(jìn)一步減少。為了確定Fe2O3/N-C 類氧化酶納米酶在催化過程中是否會(huì)產(chǎn)生其它活性氧物種，如·OH 或單線態(tài)氧（1O2），采用·OH 特異性清除劑異丙醇（IPA）[33]和1O2 特異性清除劑色氨酸（TRP）[34]進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見圖6B 和圖6C。由圖6B 可見，加入IPA 后， Fe2O3/N-C 納米酶對(duì)TMB 的催化活性受到抑制，這表明Fe2O3/N-C 在催化過程中生成了·OH。同樣，加入AA，或同時(shí)加入AA 和IPA，均會(huì)使Fe2O3/N-C納米酶催化產(chǎn)生藍(lán)色oxTMB 的量減少。這可能是IPA 消耗了Fe2O3/N-C 在催化過程中產(chǎn)生的·OH，導(dǎo)致TMB 催化氧化為oxTMB 的量降低；AA 也會(huì)還原oxTMB，使得oxTMB 的量進(jìn)一步減少。由圖6C 可見，加入TRP 后， Fe2O3/N-C 對(duì)TMB 的催化活性幾乎未受到抑制，說明催化過程中幾乎未產(chǎn)生1O2。此外，同時(shí)加入AA 和TRP 后， Fe2O3/N-C 對(duì)TMB 的催化活性與僅加入AA 時(shí)相當(dāng)，這進(jìn)一步表明Fe2O3/N-C 類氧化酶納米酶在催化過程中幾乎不產(chǎn)生1O2。基于上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以推斷， Fe2O3/N-C 類氧化酶納米酶在催化過程中產(chǎn)生了大量的·O2?和·OH，這些自由基具有強(qiáng)氧化性，能將無色的TMB 氧化為藍(lán)色的oxTMB；向體系加入AA 后， AA 將藍(lán)色的oxTMB 還原為無色的TMB，致使反應(yīng)體系中oxTMB 的量減少，導(dǎo)致體系顏色變淺。

2.4 檢測(cè)AA 的實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

考察了Fe2O3/N-C 濃度、反應(yīng)時(shí)間以及pH 值對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。如圖7 所示，在Fe2O3/N-C 濃度為25 μg/mL、反應(yīng)時(shí)間為3 min、pH=4.5 的HAC-NaAC 緩沖溶液條件下，向Fe2O3/N-C+TMB 體系中加入AA 后，體系在652 nm 波長處的吸光度變化值（ΔA，即加入AA 前后Fe2O3/N-C+TMB 體系在652 nm 處的吸光度差值）達(dá)到最大。因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)均在此最佳條件下進(jìn)行。

2.5 比色法檢測(cè)AA

基于AA 能夠抑制Fe2O3/N-C 對(duì)TMB 的催化顯色特性，構(gòu)建了用于檢測(cè)AA 的比色傳感器。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下，隨著AA 濃度增大，對(duì)Fe2O3/N-C 催化TMB 顯色反應(yīng)的抑制作用逐漸增強(qiáng)（圖8A）。在0.25～30 μmol/L 范圍內(nèi)， AA 濃度與檢測(cè)體系在652 nm 的ΔA 呈良好的線性關(guān)系（圖8B），線性回歸方程為ΔA=0.01C（μmol/L）+0.02（R2=0.9949），檢出限（3σ）為0.1 μmol/L。與文獻(xiàn)報(bào)道的基于類氧化酶納米酶檢測(cè)AA 的方法相比，本方法具有更寬的線性范圍以及較低的檢出限（表1）[21-25]。

考察了傳感器檢測(cè)AA 的選擇性和干擾性。對(duì)可能影響AA 檢測(cè)的一些物質(zhì)進(jìn)行了考察，比較了加入相同濃度（20 μmol/L）的K+、Na+、Cu2+、Co2+、Mg2+、Zn2+、Ba2+、Ca2+、SO42–、NO3–、Cl–、CO32–、精氨酸（Arginine）、脯氨酸（Proline）、谷氨酰胺（Glutamine）、丙氨酸（Alanine）、谷胱甘肽（GSH）、煙酰胺（Nicotinamide）、尿酸（Uric acid）、葡萄糖（Glucose）、硫胺素（Thiamine）、葉酸（Folic acid）、牛血清白蛋白（BSA）、多巴胺（Dopamine）和核黃素（Riboflavin）前后，體系在652 nm 處的ΔA。如圖9A 所示，只有AA 使吸光度明顯下降，其余物質(zhì)的加入幾乎未引起吸光度顯著變化，說明此比色傳感器對(duì)AA 具有良好的選擇性。如圖9B 所示，在AA 存在下，分別加入上述各干擾物后，體系的吸光度幾乎未發(fā)生顯著變化，表明此比色傳感器檢測(cè)AA 具有較強(qiáng)的抗干擾能力。

2.6 實(shí)際樣品中AA 的檢測(cè)

采用1.2.4 節(jié)的方法，對(duì)復(fù)合果汁飲料和維生素C 藥片進(jìn)行預(yù)處理，利用構(gòu)建的比色傳感器測(cè)定樣品中的AA 含量。測(cè)得復(fù)合果汁飲料中AA 含量為225.4 mg/L，與飲料中AA 的標(biāo)示值225.0 mg/L 接近；測(cè)得維生素C 藥片中AA 含量為869.9 mg/g，與藥片中AA 標(biāo)示值812.4 mg/g 相近。AA 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2，回收率為91%～108%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD） lt; 4%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，構(gòu)建的比色傳感器可用于實(shí)際樣品中AA 含量的準(zhǔn)確測(cè)定。

3 結(jié)論

以吡咯和BTCA 為原料、氯化鐵為氧化劑，通過濕化學(xué)和熱解法，制備了具有類氧化酶活性的Fe2O3/氮摻雜碳納米材料（Fe2O3/N-C）。Fe2O3/N-C 展現(xiàn)出良好的類氧化酶活性，可以將無色的TMB 氧化為藍(lán)色的oxTMB。加入AA 會(huì)顯著抑制Fe2O3/N-C 催化TMB 的顯色反應(yīng)，使反應(yīng)體系顏色變淺。基于此特性，構(gòu)建了靈敏且準(zhǔn)確的AA 比色傳感器。此傳感器具有線性范圍寬、檢出限低以及選擇性良好等優(yōu)點(diǎn)，可用于飲料及藥片樣品中AA 含量的檢測(cè)。本研究為低成本、高效的類氧化酶納米材料的開發(fā)提供了新思路。后續(xù)研究將進(jìn)一步優(yōu)化Fe2O3/N-C 的制備工藝，提升其類氧化酶活性及穩(wěn)定性，拓展其在食品安全檢測(cè)、環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)和疾病早期診斷等領(lǐng)域中的應(yīng)用。

References

[1] JIANG Y， XIAO X， LI C， LUO Y， CHEN S， SHI G， HAN K， GU H. Anal. Chem. ， 2020， 92（5）： 3981-3989.

[2] DONG H， ZHOU Y， ZHAO L， HAO Y， ZHANG Y， YE B， XU M. Anal. Chem. ， 2020， 92（22）： 15079-15086.

[3] CAO Cheng-Cheng， LIN Xiang-Fang， REN Chen-Yu， SU Lei. Chin. J. Anal. Chem. ， 2022， 50（6）： 932-939.

曹程程， 林祥芳， 任晨宇， 蘇磊. 分析化學(xué)， 2022， 50（6）： 932-939.

[4] LI X， ZHOU C H， ZI Q， CAO Q E. J. Electroanal. Chem. ， 2016， 780： 321-326.

[5] JIN P F， XIA L F， LI Z， CHE N， ZOU D， HU X. J. Pharm. Biomed. Anal. ， 2012， 70： 151-157.

[6] SILVA F O. Food Control， 2005， 16（1）： 55-58.

[7] LEGNEROVá Z， SATINSKY D， SOLICH P. Anal. Chim. Acta， 2003， 497（1-2）： 165-174.

[8] HUANG X W， ZOU X B， SHI J Y， LI Z H， ZHAO J W. Trends Food Sci. Technol. ， 2018， 81（4）： 90-107.

[9] SUN Z H， ZHANG B M， TU H J， PAN C Y， CHAI Y J， CHEN W W. Nanoscale， 2024， 16（3）： 1005-1024.

[10] YI G T， TAO Z W， FAN W F， ZHOU H， ZHUANG Q F， WANG Y. ACS Sustainable Chem. Eng. ， 2024， 12（4）： 1378-1387.

[11] LIAO D Y， ZHAO Y， ZHOU Y， YI Y H， WENG W C， ZHU G B. J. Food Meas. Charact. ， 2024， 18（11）： 9223-9232.

[12] YAN Y T， GE Y H， MAO H P， WANG Q R， LI Q L， LI H A. J. Environ. Chem. Eng. ， 2024， 12（5）： 113558.

[13] WU K L， YANG B C， ZHU X X， CHEN W， LUO X L， LIU Z X， ZHANG X， LIU Q Y. New J. Chem. ， 2018， 42（23）： 18749-18758S.

[14] ZHU S J， GUO Q， ZHENG Y， YUAN J X， ZUO D， WANG B. Microchim. Acta， 2024， 191（10）： 599.

[15] DU N J， WENG W C， XU Y Y， ZHOU Y， YI Y H， ZHAO Y， ZHU G B. Inorg. Chem. ， 2024， 63（35）： 16442-16450.

[16] WU W， NI C， HUANG Y L， CHENG H L， SHI Y H， ZHANG Y H， XU Z H， ZHANG G Q. Microchim. Acta， 2025， 192（2）：95.

[17] YAN G H， ZHANG S H， HAN Z， YI S S， WANG Y， ZHU L L， ZHANG L Y. Sens. Actuators， B， 2024， 419： 136272.

[18] YU C J， CHEN T H， JIANG J Y， TSENG W L. Nanoscale， 2014， 6（16）： 9618-9624.

[19] LEE J W， YOON S， LO Y M， WU H， LEE S Y， MOON B K. RSC Adv. ， 2015， 5（78）： 63757-63764.

[20] HE W W， LIU Y， YUAN J S， YIN J J， WU X C， HU X N， ZHANG K， LIU J B， CHEN C Y， JI Y L， GUO Y T. Biomaterials，2011， 32（4）： 1139-1147.

[21] PENG L J， YIN S J， CHEN L， TIAN T， ZHANG W Y， ZHOU H Y， YANG F Q. New J. Chem. ， 2023， 47（3）： 1156-1164.

[22] HAN Y R， LUO L P， ZHANG L， KANG Y， SUN H， DAN J， SUN J， ZHANG W T， YUE T L， WANG J L. LWT-Food Sci.Technol. ， 2022， 154： 112821.

[23] GUO D， LI C， LIU G Y， LUO X G， WU F S. ACS Sustainable Chem. Eng. ， 2021， 9（15）： 5412-5421.

[24] LI F F， YU Y J， XIAO F B， LIANG H， LIU C， FAN P F， YANG S Y. Luminescence， 2020， 35（7）： 1084-1091.

[25] ZHOU J H， CHEN H Y， HAN X Y， XU Y， MENG Y X， TIAN M M， DONG T W， CHAI F. Sep. Purif. Technol. ， 2025， 355：129819.

[26] ZHANG T， ZHUANG Q F， WANG Y. Chem. Commun. ， 2022， 58（93）： 12955-12958.

[27] SONG N， MA F Q， ZHU Y， CHEN S H， WANG C， LU X F. ACS Sustainable Chem. Eng. ， 2018， 6（12）： 16766-16776.

[28] WU X P， WANG Z C， LI D Y. Chin. J. Anal. Chem. ， 2023， 51（4）： 100243.

[29] HOU L， ZHANG C M， MA P， LI L， ZHU K K， KANG X F， CHEN W. Chin. J. Anal. Chem. ， 2018， 46（7）： e1854-e1862.

[30] HAVIV A H， GRENèCHE J M， LELLOUCHE J P. J. Am. Chem. Soc. ， 2010， 132（36）： 12519-12521.

[31] BORUAH P K， DAS M R. J. Hazard. Mater. ， 2020， 385： 121516.

[32] FONAGY O， SZABO-BARDOS E， HORVATH O. J. Photochem. Photobiol. ， A 2021， 407： 113057.

[33] CEDERBAUM A I， QURESHI A， MESSENGER P. Biochem. Pharmacol. ， 1981， 30（8）： 825-831.

[34] WANNA F S， SCHEPKIN V D， YOUNG J N， BUDINGER T F， DECAMPLI W M. Surg. Forum， 1995， 46： 254-257.

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（No. 32160600）、贛鄱俊才支持計(jì)劃—主要學(xué)科學(xué)術(shù)和技術(shù)帶頭人培養(yǎng)項(xiàng)目（No. 20232BCJ22017）、江蘇大學(xué)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)裝備與技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金（No. MAET202311）和江西省研究生創(chuàng)新專項(xiàng)資金項(xiàng)目（No. YC2023-S035）資助。