奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定與耐藥性分析

摘要：為了分析某地區(qū)規(guī)模奶牛場中引起奶乳房炎病原菌的分布情況及耐藥性情況。于2022-2023年跟蹤采集某地區(qū)規(guī)模奶牛場中，疑似患奶牛乳房炎的乳汁樣品197份，對采集的樣品進(jìn)行細(xì)菌（大腸桿菌、鏈球菌、金黃色葡萄球菌、腸球菌）分離鑒定，采用K-B藥敏紙片法分別檢測奶牛乳房炎病原菌對臨床中抗菌藥物的耐藥情況。結(jié)果顯示：從197份樣品中分離得到病原菌68株（34.5%），其中，大腸桿菌23株（11.7%）、金黃色葡萄球菌20株（10.2%）、鏈球菌15株（7.6%）和腸球菌10株（5.1%）；總體來看，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌檢出率較高。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，分離得到的大腸桿菌、腸球菌均對頭孢噻呋、頭孢喹肟、氟苯尼考等7種藥物敏感；分離得到的金黃色葡萄球菌、鏈球菌均對頭孢噻呋、頭孢喹肟、阿莫西林等8種藥物敏感。結(jié)果表明：引起該地區(qū)奶牛發(fā)生乳房炎的主要病原菌為大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，且該類菌對頭孢類抗菌藥物較為敏感，為該地區(qū)規(guī)模奶牛場中乳房炎病綜合防控及合理指導(dǎo)臨床用藥提供參考。

關(guān)鍵詞：奶牛；乳房炎；病原菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

在奶牛的養(yǎng)殖過程中隱性乳房炎常不表現(xiàn)典型的臨床癥狀，因不易診斷而往往被忽視，常導(dǎo)致產(chǎn)奶量下降和嚴(yán)重影響牛乳品質(zhì)，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，影響奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展[1-3]。相關(guān)研究表明，奶牛的乳房炎在不同國家地區(qū)養(yǎng)殖場內(nèi)均有流行，在中國隱性乳房炎的發(fā)病率在7%～95%之間，嚴(yán)重可以轉(zhuǎn)化為臨床性乳房炎，且呈現(xiàn)上升的趨勢[4-5]。目前，在我國不同養(yǎng)殖場中引起細(xì)菌性乳房炎的病原菌主要有金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎克雷白桿菌、鏈球菌、腸球菌、化膿棒狀桿菌等[6-7]。目前，在奶牛養(yǎng)殖過程中細(xì)菌性奶牛乳房炎主要通過抗菌藥物進(jìn)行治療，且耐藥性菌株不斷地出現(xiàn)，嚴(yán)重降低其治療效果，同時(shí)引起藥物在生鮮乳中殘留問題，嚴(yán)重危害著人們的健康和生物安全[8]。

本試驗(yàn)于2022—2023年跟蹤采集某地區(qū)規(guī)?；鲋幸伤苹寄膛Ｈ榉垦椎娜橹瓨悠?97份，進(jìn)行相關(guān)病原菌（大腸桿菌、鏈球菌、金黃色葡萄球菌、腸球菌等）分離鑒定，并測定其耐藥性，旨在為該地區(qū)規(guī)模奶牛場中奶牛乳房炎的預(yù)防及臨床用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1病理來源

2022—2023年采集某地區(qū)規(guī)模奶牛場中疑似患奶牛乳房炎的乳汁樣品197份。

1.2 細(xì)菌分離與培養(yǎng)

對采集的197份乳汁樣品進(jìn)行編號分裝，按照1：100比例加入含有5%犢牛血清普通營養(yǎng)肉湯中，在37 ℃恒溫培養(yǎng)振蕩培養(yǎng)8～12 h增菌后，在超凈工作臺(tái)中分別取增菌培養(yǎng)液分區(qū)劃線接種大腸桿菌顯色培養(yǎng)基、鏈球菌顯色培養(yǎng)基、金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基及哥倫比亞血培養(yǎng)基，分別在37 ℃培養(yǎng)條件下鑒別培養(yǎng)12～18 h后，挑取大腸桿菌顯色培養(yǎng)基、鏈球菌顯色培養(yǎng)基、金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基及哥倫比亞血培養(yǎng)基不同鑒別培養(yǎng)基上典型的菌落進(jìn)行革蘭氏染色，觀察其細(xì)菌形態(tài)。

1.3 生化試驗(yàn)鑒定

參照革蘭氏陰性和陽性菌的生化鑒定試劑說明書，分別接種于陰性和陽性菌的生化鑒定試劑盒中在37 ℃條件下恒溫培養(yǎng)12～18 h后，參照說明書對分離菌株的生化特性進(jìn)行比對。

1.4 藥敏試驗(yàn)

將1.3中分離菌株的對數(shù)期菌液，用無菌的營養(yǎng)肉湯調(diào)整菌液濃度為0.5～1個(gè)麥?zhǔn)蠞岫?，參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）2013年推薦的藥敏試驗(yàn)法標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)和結(jié)果判定。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

疑似分離得到的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌及腸球菌菌株的培養(yǎng)特性與形態(tài)學(xué)與《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》報(bào)道的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌及腸球菌培養(yǎng)特性和形態(tài)學(xué)基本上一致。

2.2 細(xì)菌生化試驗(yàn)

分離菌株的生化試驗(yàn)鑒定結(jié)果顯示，分離菌株分別被鑒定大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌及腸球菌，與《伯杰細(xì)菌鑒定手冊》報(bào)道的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌及腸球菌生化特性基本上一致。結(jié)果如表1可知，從197份樣品中分離得到68株病原菌（34.5%），其中23株大腸桿菌（11.7%）、20株金黃色葡萄球菌（10.2%）、15株鏈球菌（7.6%）和10株腸球菌（5.1%），其中，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌檢出率較高。

2.3 藥敏試驗(yàn)

采用K-B藥敏紙片法對臨床中分離的4種奶牛乳房炎源病原菌（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌）進(jìn)行藥敏試驗(yàn)并分析其耐藥性，結(jié)果由表2可知，分離大腸桿菌、腸球菌均對頭孢噻呋、頭孢喹肟、氟苯尼考等7種藥物敏感，分離的金黃色葡萄球菌、鏈球菌對頭孢噻呋、頭孢喹肟、阿莫西林等8種藥物敏感，對其他藥物耐藥；說明臨床分離的4種奶牛乳房炎源病原菌（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌）對臨床中常用的藥物表現(xiàn)出不同的耐藥性。

3 討論

目前，我國不同地區(qū)養(yǎng)殖場中的奶牛乳房炎發(fā)病率較高，尤其是隱性的乳房炎對奶牛的危害較高，給養(yǎng)牛生產(chǎn)中造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響我國養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展[3-5]。奶牛細(xì)菌性乳房炎發(fā)病率與奶牛的養(yǎng)殖環(huán)境具有一定相關(guān)性，在擠奶過程中感染環(huán)境中的病原菌通過乳房管進(jìn)入乳房內(nèi)并在乳房中定值，引起乳房炎。因此，在奶牛養(yǎng)殖過程中有效地控制奶牛養(yǎng)殖環(huán)境中的衛(wèi)生，在減少奶牛細(xì)菌性乳房炎相關(guān)疾病具有重要意義[7-9]。本試驗(yàn)研究表明，從197份樣品中分離得到68株病原菌（34.5%），其中23株大腸桿菌（11.7%）、20株金黃色葡萄球菌（10.2%）、15株鏈球菌（7.6%）和10株腸球菌（5.1%），總體表現(xiàn)為大腸桿菌和金黃色葡萄球菌檢出率較高，說明大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌及腸球菌4種病原菌是該地區(qū)引起奶牛乳房炎的主要病原菌。本試驗(yàn)?zāi)退幮栽囼?yàn)結(jié)果表明，分離得到的大腸桿菌、腸球菌均對頭孢噻呋、頭孢喹肟、氟苯尼考等7種藥物敏感，分離得到的金黃色葡萄球菌、鏈球菌均對頭孢噻呋、頭孢喹肟、阿莫西林等8種藥物敏感，對其他藥物耐藥。因此，在臨床治療細(xì)菌性奶牛乳房炎時(shí)，應(yīng)該根據(jù)藥敏試驗(yàn)合理選擇藥物與使用藥物，注意環(huán)境的消毒，提高細(xì)菌性奶牛乳房炎治療效果。

4 結(jié)論

通過對某地區(qū)規(guī)模奶牛場中疑似患乳房炎的奶牛進(jìn)行采樣檢測，從采集的197份乳汁樣品中，分離得到68株病原菌，檢出率占34.5%。其中，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌占比較高，說明這2種病原菌是引起該地區(qū)奶牛發(fā)生乳房炎的主要病原。對檢出的病原菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)頭孢類抗菌藥較為敏感。建議在生產(chǎn)實(shí)際中，通過強(qiáng)化產(chǎn)后護(hù)理、規(guī)范擠奶程序、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理等措施進(jìn)行預(yù)防，出現(xiàn)臨床病例及時(shí)對癥治療?！?/p>

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收稿日期：2023-10-21

基金項(xiàng)目：甘肅省奶牛健康養(yǎng)殖與主要疫病防控技術(shù)集成應(yīng)用（GNKJ-2023-12）；張掖市畜禽規(guī)模養(yǎng)殖場動(dòng)物疫病凈化關(guān)鍵技術(shù)集成和應(yīng)用（GNKJ-2023-31）。

作者簡介：麗娜（1987.10— ），女，甘肅高臺(tái)人，畜牧師，本科學(xué)歷，研究方向：畜牧獸醫(yī)學(xué)。

*通信作者：張學(xué)虎（1987.01— ），甘肅甘州人，碩士研究生學(xué)歷，高級獸醫(yī)師，研究方向?yàn)轭A(yù)防獸醫(yī)學(xué)，主要從事動(dòng)物疫病防控及技術(shù)推廣工作。