miR-625-5p靶向LASP1對結(jié)直腸癌細胞增殖、遷移、凋亡的作用

[摘要]"目的"探究微小RNA-625-5p（miR-625-5p）是否可靶向LIM和SH3結(jié)構(gòu)域蛋白1（LIM"and"SH3"protein"1，LASP1）影響結(jié)直腸癌（colorectal"cancer，CRC）細胞的增殖、遷移及凋亡。方法"CRC細胞轉(zhuǎn)染后分為空白對照組、陰性對照組、miR-625-5p類似物組、miR-625-5p"抑制劑組、miR-625-5p類似物+LASP1組。進行熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（quantitative"polymerase"chain"reaction，qPCR）檢測各組LASP1、miR-625-5p的mRNA表達，雙熒光素酶報告基因檢測基因靶向結(jié)合關(guān)系，細胞計數(shù)試劑盒（cell"counting"kit，CCK）-8檢測細胞活性，細胞平板克隆檢測細胞克隆能力，流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡，Transwell法檢測細胞遷移及侵襲，EDU實驗測定細胞增殖，蛋白免疫印跡（Western"blot）法檢測LASP1及侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白神經(jīng)型鈣黏蛋白（neural"cadherin，N-cadherin）和上皮型鈣黏蛋白（epithelial"cadherin，E-cadherin）的表達情況。結(jié)果"qPCR檢測證明細胞轉(zhuǎn)染成功，雙熒光素酶報告基因檢測到miR-625-5p可靶向結(jié)合LASP1。與陰性對照組比較，miR-625-5p類似物組的細胞活性和細胞克隆、遷移、侵襲、增殖數(shù)量及LASP1、N-cadherin表達水平降低（Plt;0.05），細胞凋亡率及E-cadherin表達水平上升（Plt;0.05），miR-625-5p抑制組上述指標的結(jié)果完全相反。與miR-625-5p類似物組比較，miR-625-5p類似物+LASP1組的細胞活性和細胞克隆、遷移、侵襲、增殖數(shù)量及LASP1蛋白表達水平升高（Plt;0.05），細胞凋亡率降低（Plt;0.01）。結(jié)論"miR-625-5p可靶向LASP1抑制結(jié)直腸癌細胞的增殖、遷移，并促進凋亡。

[關(guān)鍵詞]"miR-625-5p；LIM和SH3結(jié)構(gòu)域蛋白1；結(jié)直腸癌

[中圖分類號]"R735.3""""""[文獻標識碼]"A""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.35.003

miR-625-5p"targets"LASP1"to"inhibit"the"proliferation"and"migration"of"colorectal"cancer"cells"and"promote"apoptosis

XU"Yiping1，"ZHANG"Tingting1，"SHANG"Tao2

1.Department"of"Pathology，"Hangzhou"Cancer"Hospital，"Hangzhou"310005，"Zhejiang，"China;"2.Department"of"Anorectal"Diseases，"the"First"Affiliated"Hospital"of"Zhejiang"Chinese"Medicial"University，"Hangzhou"310018，"Zhejiang，"China

[Abstract]"Objective"To"investigate"whether"miR-625-5p"can"target"LIM"and"SH3"protein"1"（LASP1）"to"affect"the"proliferation，"migration"and"apoptosis"of"colorectal"cancer"cells."Methods"Colorectal"cancer"（CRC）"cells"were"transfected"into"control"group，"NC"group，"miR-625-5p"mimic"group，"miR-625-5p"inhibitor"group"and"miR-625-5p"mimic+LASP1"group."Quantitative"polymerase"chain"reaction"（qPCR）"assay"was"performed"to"detect"mRNA"expression"of"LASP1"and"miR-625-5p"in"each"group，"dual-luciferase"reporter"gene"was"used"to"detect"gene"targeting"binding"relationship，"cell"activity"was"detected"by"cell"counting"kit"（CCK）-8，"cell"cloning"ability"was"detected"by"cell"plate"cloning，"cell"apoptosis"was"detected"by"flow"cytometry，"and"cell"migration"and"invasion"were"detected"by"Transwell"assay."Cell"proliferation"was"measured"by"EDU"assay，"and"expression"of"LASP1"and"invasion"and"metastasis"related"proteins"neural"cadherin"（N-cadherin）"and"epithelial"cadherin"（E-cadherin）"were"detected"by"Western"blot."Results"qPCR"experiment"proved"that"cell"transfection"was"successful."The"dual"luciferase"reporter"gene"detected"that"miR-625-5p"could"target"LASP1."Compared"with"NC"group，"cell"activity，"cell"cloning，"migration，"invasion，"proliferation"and"protein"expression"levels"of"LASP1"and"N-cadherin"in"miR-625-5p"mimic"group"were"significantly"decreased"（Plt;0.05）."Apoptosis"rate"and"E-cadherin"protein"expression"level"were"significantly"increased"（Plt;0.05），"but"expression"of"above"indicators"was"completely"opposite"in"miR-625-5p"inhibitor"group."Compared"with"miR-625-5p"mimic+LASP1"group，"cell"activity，"cell"cloning，"migration，"invasion，"proliferation"and"LASP1"protein"expression"level"were"significantly"increased"（Plt;0.05），"and"cell"apoptosis"rate"was"significantly"decreased"（Plt;0.01）."Conclusion"miR-625-5p"can"target"LASP1"to"inhibit"the"proliferation"and"migration"of"CRC"and"promote"apoptosis.

[Key"words]"miR-625-5p;"LIM"and"SH3"protein"1;"Colorectal"cancer

結(jié)直腸癌（colorectal"cancer，CRC）是一種起源于結(jié)腸或直腸的胃腸道惡性腫瘤，早期治療以手術(shù)結(jié)合輔助治療為主[1]。近年來，靶向療法已廣泛應(yīng)用于腫瘤的臨床治療，但由于高耐藥和高轉(zhuǎn)移使得已有的靶向治療效果仍不理想，因此開發(fā)尋找新的作用靶點，探究其作用機制迫在眉睫[2-3]。

研究表明LINC01123是一種由c-Myc激活的長鏈非編碼RNA，在結(jié)直腸癌細胞系敲降LINC01123可抑制結(jié)直腸癌細胞的增殖能力和遷移能力[4]。微小RNA-625-5p（miR-625-5p）可與LINC01123形成競爭性內(nèi)源RNA（competing"endogenous"RNAs，ceRNA）機制，參與黑色素瘤的糖酵解過程[5]。由此推測，LINC01123通過結(jié)合miR-625-5p在結(jié)直腸癌中發(fā)揮分子海綿作用影響結(jié)直腸癌的增殖及轉(zhuǎn)移過程。研究表明高表達LINC01123可通過調(diào)節(jié)miR-625-5p/LASP1軸在CRC進展中發(fā)揮其致癌作用。LIM和SH3結(jié)構(gòu)域蛋白1（LIM"and"SH3"protein"1，LASP1）高表達于結(jié)直腸癌患者的組織標本中，細胞實驗顯示LASP1可促進結(jié)直腸癌細胞的增殖遷移[6-7]。本研究旨在探討miR-625-5p是否可靶向LASP1影響結(jié)直腸癌的細胞進程。

1""材料與方法

1.1""實驗材料與設(shè)備

LOVO人結(jié)腸癌細胞購自賽百慷（上海）生物技術(shù)股份有限公司。DMEM培養(yǎng)基購自Hyclone公司。EDU-594細胞增殖檢測試劑盒購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自康為世紀生物科技股份有限公司。細胞計數(shù)試劑盒（cell"counting"kit，CCK）-8試劑盒購自MCE公司。雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司。細胞凋亡試劑盒、基底膜基質(zhì)膠購自美國BD公司。LASP1抗體、神經(jīng)型鈣黏蛋白（neural"cadherin，N-cadherin）抗體、上皮型鈣黏素（epithelial"cadherin，E-cadherin）抗體、GAPDH"抗體購自美國Affinity公司。AE2000型光學顯微鏡（Motic公司），Ts2-FC型倒置熒光顯微鏡（日本尼康公司）。實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（quantitative"polymerase"chain"reaction，qPCR）（美國Bio"Rad公司），Nanodrop"one型mRNA定量儀（美國Thermo"Scientific公司），C6型流式細胞儀（美國BD公司）。EPS300型電泳儀、VE"180C型電泳槽、VE186型轉(zhuǎn)膜儀（天能集團）。610020-9Q型化學發(fā)光儀（上海勤翔科學儀器有限公司公司）。

1.2""實驗方法

LOVO細胞在DMEM培養(yǎng)基中生長，培養(yǎng)基含有10%胎牛血清和1%青霉素，環(huán)境條件為37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱。細胞分為空白對照組：不做轉(zhuǎn)染；陰性對照組：LOVO細胞轉(zhuǎn)染miR-NC；miR-625-5p"類似物組：LOVO細胞轉(zhuǎn)染miR-625-5p"類似物；miR-625-5p抑制劑組：轉(zhuǎn)染miR-625-5p"抑制劑；miR-625-5p"類似物+LASP1組：轉(zhuǎn)染miR-625-5p"類似物和過表達LASP1。取對數(shù)生長期細胞，接種于12孔板中，每孔1×105個細胞，加入miR-625-5p類似物和miR-625-5p抑制劑孵育并按照分組要求進行細胞轉(zhuǎn)染，24h后進行觀察，待轉(zhuǎn)染效率達到70%時進行實驗處理。取1×107個細胞并加入1000μl"Trizol到勻漿管以提取RNA，后在42℃、15min和85℃、5min條件下進行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，進行PCR反應(yīng)見表1引物序列，檢測LOVO細胞中LASP1、miR-625-5p"mRNA表達情況。

分別構(gòu)建LASP1-3'UTR"WT和LASP1-3'UTR"MUT，細胞鋪板16h后轉(zhuǎn)染熒光素酶報告質(zhì)粒和miR-34c類似物，每個樣品設(shè)置3個復(fù)孔，轉(zhuǎn)染6h后更換新鮮完全培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染48h后，進行Luciferase活性檢測。將轉(zhuǎn)染48h后的LOVO細胞以1×104個細胞/孔加入10μl"CCK-8。通過檢測450nm"處的吸光度監(jiān)測細胞活力。將轉(zhuǎn)染后的細胞用胰酶消化，按每孔500～1000個細胞接種于6孔板進行培養(yǎng)，37°C和5%"CO2下孵育14d后進行拍照觀察并統(tǒng)計細胞克隆數(shù)量。取對數(shù)生長期細胞種植于6孔板，2ml/孔工作體積，細胞接種密度為1.2×106個細胞/孔，PBS潤洗后調(diào)整細胞濃度為1×106個/ml，加入5μl"Annexin"V-FITC與10μl"PI避光孵育15min，加入結(jié)合緩沖液上流式細胞儀檢測細胞凋亡率。DMEM高糖培養(yǎng)液按3：1比例稀釋基質(zhì)膠，取30μl基質(zhì)膠稀釋液，包被Transwell小室，4℃孵育。細胞按上述分組處理24h后，Transwell小室放入24孔培養(yǎng)板，上室加入細胞，培養(yǎng)24h，固定，PBS潤洗，0.1%結(jié)晶紫染液染色30"min后拍照并計數(shù)。取細胞進行細胞爬片，貼壁后加入EDU工作液孵育，孵育結(jié)束后固定。再次加入0.5ml點擊反應(yīng)液避光孵育，PBS潤洗后封片拍照觀察。將各組細胞用RIPA裂解緩沖液提取蛋白質(zhì)樣品，然后用12%"SDS/PAGE處理并電泳轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，加入一抗山羊抗兔IgG二抗避光孵育，之后進行ECL化學發(fā)光儀顯影。檢測LASP1及侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)神經(jīng)型鈣黏蛋白（neuro"cadherin，N-cadherin）和上皮型鈣黏蛋白（epithelial"cadherin，E-cadherin）。

1.3""統(tǒng)計學方法

采用SPSS"20.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析，計量資料以均數(shù)±標準差（"）表示，組間比較采用t檢驗，多組間比較采用One-way"ANOAY單因素方差分析，進一步組間兩兩比較采用Tukey檢驗。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2""結(jié)果

2.1""各組LASP1、miR-625-5p"mRNA表達情況

與空白對照組比較，miR-625-5p"類似物組LOVO細胞中LASP1"mRNA表達水平降低，miR-625-5p"mRNA表達升高（Plt;0.01）。miR-625-5p"抑制劑組LOVO細胞中LASP1"mRNA表達水平升高，miR-625-5p"mRNA表達降低（Plt;0.01）。與miR-625-5p"類似物組比較，miR-625-5p"類似物+LASP1組LOVO細胞中LASP1"mRNA表達水平升高，miR-625-5p"mRNA表達降低（Plt;0.01），見表2。

2.2""LASP1與miR-625-5p的相關(guān)關(guān)系

miR-625-5p類似物與LASP1基因3’-UTR結(jié)合后的熒光素酶檢測比值（0.53±0.05）相較于NC類似物組（1.01±0.11）明顯降低，miR-625-5p類似物組可降低LASP1的相對熒光素酶活性（Plt;0.01），但對LASP1-Mut，差異無統(tǒng)計學意義（Pgt;0.05）。

2.3""各組LOVO細胞活性變化情況

與陰性對照組比較，miR-625-5p類似物組的LOVO細胞活性降低（Plt;0.01），miR-625-5p抑制劑組的LOVO細胞活性升高（Plt;0.01）。與miR-625-5p類似物組比較，miR-625-5p類似物+LASP1組的LOVO細胞活性升高（Plt;0.01），見表3。

2.4""各組LOVO細胞的克隆能力變化情況

與陰性對照組比較，miR-625-5p類似物組的LOVO細胞克隆數(shù)量減少（Plt;0.01），miR-625-5p抑制劑組的LOVO細胞克隆數(shù)量增加（Plt;0.01）。與miR-625-5p類似物組比較，miR-625-5p類似物+LASP1組的LOVO細胞克隆數(shù)量增加（Plt;0.01）。見表4、圖1。

2.5""各組LOVO細胞的凋亡影響

與陰性對照組比較，miR-625-5p類似物組的LOVO細胞凋亡率升高（Plt;0.01），miR-625-5p抑制劑組的LOVO細胞凋亡率降低（Plt;0.01）；與miR-625-5p類似物組比較，miR-625-5p類似物+LASP1組的LOVO細胞凋亡率降低（Plt;0.01）。見表5。

2.6""各組的LOVO細胞遷移、侵襲能力變化情況

與陰性對照組比較，miR-625-5p類似物組的LOVO細胞遷移數(shù)量、侵襲數(shù)量減少（Plt;0.01），miR-625-5p抑制劑組的LOVO細胞遷移數(shù)量、侵襲數(shù)量增加（Plt;0.01）；與miR-625-5p類似物組比較，miR-625-5p類似物+LASP1組的LOVO細胞遷移數(shù)量、侵襲數(shù)量增加（Plt;0.05）。見表6和圖2。

2.7""各組的LOVO細胞增殖影響

與陰性對照組比較，miR-625-5p類似物組合并通道橘紅色熒光細胞數(shù)減少，細胞增殖率降低（Plt;0.01），miR-625-5p抑制劑組合并通道橘紅色熒光細胞數(shù)增加，細胞增殖率升高（Plt;0.01）；與miR-625-5p類似物組比較，miR-625-5p類似物+LASP1組merge通道橘紅色熒光細胞數(shù)量增加，細胞增殖率升高（Plt;0.01）。見表7。

2.8""各組的LOVO細胞中LASP1、N-cadherin和E-cadherin表達水平

與陰性對照組比較，miR-625-5p類似物組LOVO細胞中LASP1、N-cadherin表達水平降低（Plt;0.05），E-cadherin表達水平升高（Plt;0.05），而miR-625-5p抑制劑組LOVO細胞中上述蛋白表達則完全相反（Plt;0.05）。與miR-625-5p類似物組比較，miR-625-5p類似物+LASP1組LOVO細胞中LASP1表達水平升高（Plt;0.05）。見表8、圖3。

3""討論

CRC是臨床病理診斷中常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率及死亡率常年位于腫瘤疾病前列[8]。但與其相關(guān)的靶向治療等研究還不夠深入，使得疾病治療及患者預(yù)后還存在較大問題，因此研究其作用靶點將為患者提供更好的指導。

本研究表明miR-625-5p有抑制LOVO腫瘤細胞活力、同時降低其克隆能力、增殖能力及遷移、侵襲能力的作用，還可促進LOVO細胞發(fā)生凋亡。加入LASP1后，細胞的各項進程實驗結(jié)果與miR-625-5p類似物組所得的實驗結(jié)論相反，提示miR-625-5p靶向結(jié)合LASP1后，LASP1部分逆轉(zhuǎn)miR-625-5p對這些結(jié)果的影響。朱海龍等[9]的研究表明，LASP1積聚在黏著斑及片狀脂膜的前端和絲狀偽足的尖端，這是實現(xiàn)細胞黏附、遷移及細胞通訊的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，進一步為miR-625-5p可靶向結(jié)合LASP1進而影響CRC細胞進程提供理論依據(jù)。

miRNA在消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到關(guān)鍵作用。miRNA可與靶基因mRNA以不完全互補的方式配對結(jié)合，形成沉默復(fù)合體，誘導mRNA的降解或影響其翻譯進程，使得靶基因的表達被沉默或降低[10]。既往研究表明miR-625-5p可影響多種類型的癌癥細胞的增殖和侵襲，與癌癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[11-12]。本研究首先通過細胞轉(zhuǎn)染miR-625-5p類似物及抑制劑構(gòu)建CRC實驗細胞株，用于CRC靶點及其作用機制的探究。qPCR實驗各mRNA的表達情況可證明細胞轉(zhuǎn)染成功，為后續(xù)實驗奠定良好基礎(chǔ)。雙熒光素酶報告基因檢測結(jié)果表明，miR-625-5p類似物與LASP1基因3’-UTR結(jié)合后，相較于空載類似物"NC組，熒光素酶檢測比值明顯降低，說明miR-625-5p類似物可結(jié)合LASP1，對LASP1表達水平進行調(diào)控，提示LASP1是miR-625-5p靶向結(jié)合的關(guān)鍵基因。LASP1是一種肌動蛋白結(jié)合蛋白，研究表明LASP1可促進細胞的增殖、遷移及黏附能力，且能在胰腺癌、食管癌等惡性腫瘤中過度表達，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[13]。LASP1表達上調(diào)與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，敲除LASP1將抑制結(jié)直腸癌的增殖和轉(zhuǎn)移[9]。

E-cadherin及N-cadherin均為癌組織上皮細胞的常見表達蛋白，其表達異常與CRC病情進展及腫瘤侵襲程度密切相關(guān)[14-15]。E-cadherin是一種Ca2+依賴性跨膜糖蛋白分子，在腫瘤細胞內(nèi)表達可致細胞黏性下降，對腫瘤細胞轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響[16]。E-cadherin表達缺失是上皮細胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化發(fā)生的重要標志，與多種腫瘤的不良預(yù)后密切相關(guān)[17]。與E-cadherin相似，N-cadherin也是一種鈣依賴性蛋白，其與細胞的遷移能力呈正相關(guān)[18-19]。Western"blot法檢測表明，miR-625-5p可降低LASP1、N-cadherin表達水平，升高E-cadherin表達水平，起到降低細胞的黏附及遷移能力，阻礙腫瘤細胞的生長及增殖。而miR-625-5p類似物+LASP1組中由于miR-625-5p與LASP1的靶向結(jié)合作用，各蛋白的表達與上述miR-625-5p類似物組結(jié)果完全相反。進一步驗證miR-625-5p可靶向結(jié)合LASP1影響CRC細胞進程。綜上，miR-625-5p可靶向結(jié)合LASP1抑制結(jié)直腸癌細胞的生長、增殖、遷移，并促進凋亡。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻]

[1] 曾嘉琪，"王麗茹，"邢杰，"等."基因突變在結(jié)直腸癌診療及預(yù)后中的研究進展[J]."生物信息學，"2022，"20（2）："84–90.

[2] ARAN"V，"VICTORINO"A"P，"THULER"L"C，"et"al."Colorectal"cancer："Epidemiology，"disease"mechanisms"and"interventions"to"reduce"onset"and"mortality[J]."Clin"Colorec"Cancer，"2016，"15（3）："195–203.

[3] MARLEY"A"R，"NAN"H."Epidemiology"of"colorectal"cancer[J]."Int"J"Mol"Epidemiol"Genet，"2016，"7（3）："105.

[4] HUA"Q，"JIN"M，"MI"B，"et"al."LINC01123，"a"c-Myc-activated"long"non-coding"RNA，"promotes"proliferation"and"aerobic"glycolysis"of"non-small"cell"lung"cancer"through"miR-199a-"5p/c-Myc"axis[J]."J"Hematol"Oncol，"2019，"12（1）："1–18.

[5] TAY"Y，"RINN"J，"PANDOLFI"P"P."The"multilayered"complexity"of"ceRNA"crosstalk"and"competition[J]."Nature，"2014，"505（7483）："344–352.

[6] SHANG"T，"ZHOU"X，"CHEN"W."LINC01123"promotes"the"progression"of"colorectal"cancer"via"miR-625-5p/"LASP1"axis[J]."Cancer"Biother"Radiopharm，"2021，"36（9）："765–773.

[7] GAO"Q，"TANG"L，"WU"L，"et"al."LASP1"promotes"nasopharyngeal"carcinoma"progression"through"negatively"regulation"of"the"tumor"suppressor"PTEN[J]."Cell"Death"Dis，"2018，"9（3）："393.

[8] 嚴萍萍."LASP1相互作用蛋白N-WASP誘導腫瘤出芽促進結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的機制[D]."廣州："南方醫(yī)科大學，"2020.

[9] 朱海龍，"朱旭友，"張龍，"等."miR-218-5p靶向LASP1對結(jié)直腸癌細胞侵襲和遷移影響的機制[J].nbsp;中華腫瘤防治雜志，"2022，"29（1）："27–33.

[10] 方洪生，"駱洋，"林海萍，"等."miR-106b-5p靶向調(diào)控細胞周期蛋白D1抑制結(jié)直腸癌細胞增殖，"遷移與侵襲[J]."現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，"2022，"30（6）："949–955.

[11] WANG"Y，"YIN"L"L，"SUN"X"F."CircRNA"hsa-circ-"0002577"accelerates"endometrial"cancer"progression"through"activating"IGF1R/PI3K/Akt"pathway[J]."J"Exp"Clin"Cancer"Res，"2020，"39（1）："169.

[12] FANG"L，"KONG"D"D，"XU"W."MicroRNA-625-3p"promotes"the"proliferation，"migration"and"invasion"of"thyroid"cancer"cells"by"up-regulating"astrocyte"elevated"gene"1[J]."Biomed"Pharmacother，"2018，"102："203–211.

[13] 范學亮，"鄭鶴，"徐海元，"等."免疫組化法測定LASP1蛋白在鼻咽癌組織中的表達及影響因素分析[J]."臨床研究，"2020，"28（9）："12–13.

[14] 馬瑛，"羅登，"劉首記."結(jié)直腸癌患者癌組織CTEN，"E-cadherin及Vimentin蛋白表達水平的意義探討[J]."臨床和實驗醫(yī)學雜志，"2021，"20（5）："501–504.

[15] 陳寧，"宋立偉，"袁曉圓，"等."Ajuba與Twist相互作用調(diào)控N-cadherin表達對結(jié)直腸癌細胞遷移的影響[J]."上海交通大學學報（醫(yī)學版），"2015，"35（4）："465–469.

[16] 武鴻彪，"袁旦平，"曹躍鵬，"等."結(jié)直腸癌患者血清MMP-9，"TIMP-1，"E-cadherin"水平與臨床特征及預(yù)后的關(guān)系研究[J]."浙江醫(yī)學，"2019，"41（10）："985–990.

[17] DAULAGALA"A"C，"BRIDGES"M"C，"KOURTIDIS"A."E-cadherin"beyond"structure："A"signaling"hub"in"colon"homeostasis"and"disease[J]."Int"J"Mol"Sci，"2019，"20（11）："2756.

[18] 黃鳳仙."Twist，"E-cadherin及N-cadherin蛋白在聲門上型喉癌組織中的表達及意義[D]."長沙："中南大學，"2013.

[19] 王敏."聯(lián)合檢測結(jié)直腸癌患者組織中N-cadherin，"CDX2，"P120ctn及血清中CK18的表達和意義[D]."張家口："河北北方學院，"2012.

（收稿日期：2024–08–22）

（修回日期：2024–11–07）