• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同氧療方案對小鼠急性腎損傷保護作用的比較

    2024-11-29 00:00:00徐峰夏靜邵雅楠李丹吳新賀
    南通大學學報(醫(yī)學版) 2024年2期
    關(guān)鍵詞:氧療急性腎損傷高壓氧

    [摘" "要]" "目的:比較不同給氧方案對脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)誘導(dǎo)的急性腎損傷(acute kidney injury, AKI)模型小鼠腎組織炎癥性損傷及外周血炎癥因子的影響。方法:采用ICR雌性小鼠,腹腔注射LPS(5 mg/kg)建立小鼠AKI模型,隨機分成:(1)空白組(Control組),注射同等量的生理鹽水;(2)模型組(LPS組);(3)純氧治療組(LPS+100%O2組);(4)2.0 絕對大氣壓(atmosphere absolute, ATA)高壓氧(hyperbaric oxygen, HBO)治療組(LPS+2.0 ATA HBO組);(5)3.0 ATA HBO治療組(LPS+3.0 ATA HBO組),治療后24 h,通過流式微球技術(shù)及實時熒光定量PCR(real-time PCR, RT-PCR)實驗分別檢測腎組織和外周血中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α,以及抑炎因子IL-10水平。此外,通過HE染色法觀察腎組織炎癥性損傷的組織形態(tài)變化。結(jié)果:IL-1β、IL-6和TNF-α在LPS誘導(dǎo)24 h后均顯著增加;100%O2和2.0 ATA HBO治療均可抑制促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的釋放,且2.0 ATA HBO抑制作用更顯著(Plt;0.05或Plt;0.01);此外,LPS+2.0 ATA HBO組抑炎因子IL-10水平顯著增高(Plt;0.01)。HE染色結(jié)果表明,與LPS組相比,100%O2和2.0 ATA HBO治療后,腎組織炎癥性損傷均有所減輕,且LPS+2.0 ATA HBO組改善效果最好(Plt;0.05或Plt;0.01),而LPS+3.0 ATA HBO組腎組織損傷未改善。結(jié)論:100%O2和2.0 ATA HBO治療均可明顯改善AKI小鼠炎癥性損傷,且2.0 ATA HBO改善作用更好。

    [關(guān)鍵詞]" "急性腎損傷;氧療;高壓氧;常壓氧;炎癥;細胞因子;小鼠

    [中圖分類號]" "R692" " " " " " " "[文獻標志碼]" "A" " " " " " " "[文章編號]" "1674-7887(2024)02-0154-05

    Comparison of the protective effects of different oxygen therapy regimens against

    acute kidney injury in mice*

    XU Feng1**, XIA Jing2, SHAO Yanan2, LI Dan2, WU Xinhe2***" " " " (1Department of Nephrology, 2Department of Rehabilitation Medicine, the Affiliated Rehabilitation Hospital of Nantong University, Jiangsu 226002)

    [Abstract]" "Objective: Comparison of the effects of different oxygen therapy regimens on renal tissue inflammatory injury and peripheral blood inflammatory factors in a mouse model of lipopolysaccharide(LPS)-induced acute kidney injury(AKI). Methods: ICR female mice were injected intraperitoneally with 5 mg/kg of LPS to establish a model of AKI. They were randomly divided into the following groups: (1)Control group(injected with the same amount of physiological saline); (2)Model group(LPS group); (3)Pure oxygen treatment group(injected with LPS and 100%O2); (4)2.0 atmosphere absolute(ATA) hyperbaric oxygen(HBO) treatment group(LPS+2.0 ATA HBO group); (5)3.0 ATA HBO treatment group LPS+3.0 ATA HBO group). The pro-inflammatory cytokines IL-1β, IL-6, and TNF-α and the anti-inflammatory cytokine IL-10 in peripheral blood and kidney tissue were detected by flow cytometric bead array and real-time PCR(RT-PCR) assays. The histomorphological changes of kidney tissue were observed by HE staining. Results: IL-1β, IL-6, and TNF-α levels were significantly increased after 24 hours of LPS induction. 100%O2 and 2.0 ATA HBO could inhibit the release of IL-1β, IL-6, and TNF-α, and 2.0 ATA HBO had a more pronounced impact, with a significantly increased IL-10 level in this treatment group. HE staining showed that compared with LPS, 100%O2 and 2.0 ATA HBO could alleviate the inflammatory injury of kidney, and 2.0 ATA HBO showed a better effect. Nevertheless, 3.0 ATA HBO did not reverse the damage to the kidney tissue. Conclusion:" The above results suggested that both 100%O2 and 2.0 ATA HBO treatments significantly improved inflammatory injury in AKI mice. Moreover, 2.0 ATA HBO had a superior effect on inhibiting tissue inflammation.

    [Key words]" "acute kidney injury; oxygen therapy; hyperbaric oxygen; normobaric oxygen; inflammation; cytokines; mouse

    急性腎損傷(acute kidney injury, AKI)是臨床上常見的危急重癥之一,具有高發(fā)病率和高死亡率的特點;其發(fā)病機制與炎癥反應(yīng)有關(guān),即促炎因子與抑炎因子的不平衡引起組織損傷,最終導(dǎo)致病情惡化及死亡率升高[1-3]。在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)誘導(dǎo)的AKI模型中,觀察到多種促炎因子浸潤導(dǎo)致腎臟組織損傷;因此,抑制機體炎癥過度反應(yīng)對LPS誘導(dǎo)的AKI的保護作用極為重要。

    越來越多的研究[4]表明,氧療可調(diào)控炎癥反應(yīng),對組織炎癥性損傷具有保護作用。高壓氧(hyperbaric oxygen, HBO)治療是一種基于在增強大氣壓下暴露于純氧的治療方法,通常作為感染等不同疾病的主要或輔助療法,特別是深部或頑固性感染,如壞死性筋膜炎、骨髓炎和慢性軟組織感染以及感染性心內(nèi)膜炎等[5-7]。實驗動物研究[8]表明,2.0 絕對大氣壓(atmosphere absolute, ATA)HBO治療可減輕砷誘導(dǎo)的肝臟和腎臟組織損傷;2.5 ATA HBO治療可有效改善LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷[9];100%O2和3.0 ATA HBO預(yù)處理均可減輕膿毒血癥模型大鼠急性肝組織損傷[10]。臨床研究[11]表明,2.0 ATA HBO治療減少AKI患者的住院時間,改善了腎血流動力學;2.5 ATA HBO治療可加速傷口愈合,改善糖尿病足潰瘍并提高患者的生存率[12];3.0 ATA HBO可有效治療頸部壞死性感染[13];但當壓力>3.0 ATA時,通常報道更多的不利影響[5]。然而AKI臨床常需依靠醫(yī)師經(jīng)驗選擇治療方案,關(guān)于腎組織損傷對于不同氧療方案的應(yīng)答反應(yīng)是否有差異也缺乏研究。因此,需要探究腎臟器官組織對不同氧療應(yīng)答反應(yīng),為輔助腎臟器官組織損傷治療摸索最佳氧療方案提供實驗依據(jù)。

    目前臨床使用的氧療方法逐漸多樣化,如面罩給氧、機械通氣給氧和高壓氧等[14-16]。因此,采用LPS誘導(dǎo)AKI小鼠模型,模擬臨床上不同的氧療方法進行干預(yù),通過分析外周血和腎臟組織器官的炎癥因子表達以及器官損傷評分,從抑制炎癥角度比較不同吸氧方案對AKI模型小鼠腎組織損傷的治療效果,為腎組織器官炎癥損傷治療時氧療方案的選擇提供初步實驗依據(jù)。

    1" "材料和方法

    1.1" "動物來源與模型建立" "雌性ICR小鼠,體質(zhì)量22~26 g,購自南通大學實驗動物中心(機構(gòu)許可證:SYXK(SU)-2012-0030)。所有動物置于塑料籠中,室溫控制在(24±2)℃、日光燈照明(12 h/12 h明暗)、自由飲食,持續(xù)3 d。將LPS(貨號:L2630, Sigma Aldrich)粉末溶于生理鹽水制備成1 mg/mL的藥液避光保存,ICR小鼠按照5 mg/kg劑量腹腔注射形成膿毒血癥AKI模型,并立即對模型小鼠進行不同氧療方案治療。

    1.2" "實驗分組與處理" "動物隨機分成5組:空白組(Control組)、模型組(LPS組)、純氧治療組(LPS+100%O2組)、2.0 ATA HBO治療組(LPS+2.0 ATA HBO組)、3.0 ATA HBO治療組(LPS+3.0 ATA HBO組),每組3~6只。Control組注射等量生理鹽水,與LPS組均未進行治療;LPS+100%O2組:將模型小鼠置于密封的帶有進(出)氣口的玻璃樹脂箱內(nèi),在常壓下接受純氧治療60 min;LPS+2.0 ATA HBO組與LPS+3.0 ATA HBO組:將模型小鼠置于100 L的艙內(nèi)(安徽省蕪湖潛水裝備廠),分別在2個絕對大氣壓和3個絕對大氣壓下接受純氧治療60 min,且升壓(減壓)時間各5 min。LPS誘導(dǎo)后24 h,對各組小鼠腹腔注射復(fù)合麻醉劑2.5%Avertin(2-甲基-2-丁醇,貨號152463;2, 2, 2-三溴乙醇,貨號T48402,Sigma),深度麻醉后處死并進行取材。本實驗方案獲南通大學實驗動物中心倫理審查批準(S20230315-003)。

    1.3 " 實驗方法

    1.3.1" "實時熒光定量PCR(real-time PCR, RT-PCR)" "按試劑盒說明書,使用TRIzol試劑(Invitrogen,CA,美國)從腎組織中分離總RNA,并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。使用SYBR qPCR Master Mix熒光定量PCR儀進行反應(yīng),β-actin(小鼠中的Actb)用于標準化目標基因的相對轉(zhuǎn)錄水平。引物序列如表1。

    1.3.2" "HE染色及評分" "將10%甲醛固定的腎組織包埋在石蠟中,切片并行HE染色形態(tài)學檢查。腎組織的病理評分由專業(yè)病理科醫(yī)師進行評估。腎小管損傷程度,包括腎小管擴張、變平和空泡形成,分為5個等級(0,無;1,≤25%;2,>25%~50%;3,>50%~75%;4,gt;75%),基于光學顯微鏡下高倍視野中受影響的腎小管百分比;各分數(shù)相加,將總分的平均值作為腎損傷評分[17-18]。

    1.3.3" "流式細胞微球技術(shù)(cytometric bead array, CBA)" "使用BDTM CBA Flex Set試劑盒和BDTM Mouse Enhance Sensitivity Master Buffer Kit試劑盒(貨號562246,BD Bioscience)測量血清中4種不同炎癥因子的濃度水平;IL-1β(貨號562278,BD Bioscience),IL-6(貨號562236,BD Bioscience),TNF-α(貨號562336,BD Bioscience),IL-10(貨號562263,BD Bioscience)。使用BriCyteE6(邁瑞,中國)流式細胞儀設(shè)置珠進行校準,按照試劑制造商的說明倍比稀釋制備標準品,每個樣本采集200個細胞,將不同目的蛋白捕獲微球在待測樣品中的檢測熒光強度代入各自的標準品曲線方程中,計算每組樣品中各種炎癥因子的濃度。

    1.4" "統(tǒng)計學方法" "使用SPSS 25.0軟件進行統(tǒng)計分析,所有實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準誤(mean±standard error, SEM)形式表示。通過單因素方差分析,差異有統(tǒng)計學意義后再行兩兩t檢驗,Plt;0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

    2" "結(jié)" " " 果

    2.1" "不同給氧方案對AKI模型小鼠腎臟組織病理損傷的減輕程度不同" "與Control組相比,腎組織的病理損傷有腎小球細胞增多,腎小管上皮細胞渾濁腫脹,間質(zhì)水腫充血,中性粒細胞浸潤。LPS+100%O2組治療后,腎小管上皮細胞渾濁腫脹減輕,中性粒細胞浸潤減少;LPS+2.0 ATA HBO組腎組織病理損傷均顯著改善,而LPS+3.0 ATA HBO組腎臟組織病理損傷無明顯改善(Plt;0.05或Plt;0.01,圖1)。結(jié)果表明,在一定的氧分壓范圍內(nèi),氧療對于組織病理損傷的改善效果隨著氧分壓的升高而升高,但超過一定閾值后,改善效果消失。

    2.2" "不同給氧方案對LPS誘導(dǎo)的AKI模型小鼠外周血炎癥因子的影響" "通過CBA實驗檢測各組小鼠血清中炎癥因子水平。與Control組相比,LPS誘導(dǎo)24 h后IL-1β、IL-6和TNF-α(Plt;0.01,圖2)水平均顯著升高。與LPS組相比,LPS+100%O2組和LPS+2.0 ATA HBO組均抑制LPS誘導(dǎo)的IL-1β、IL-6和TNF-α升高,LPS+2.0 ATA HBO組作用更顯著(Plt;0.01或Plt;0.05, 圖2A~C),但LPS+3.0 ATA HBO組治療前后炎癥因子水平差異無統(tǒng)計學意義。LPS+2.0 ATA HBO組治療后血清IL-10水平顯著提高(Plt;0.01, 圖2D)。結(jié)果表明,LPS誘導(dǎo)的小鼠AKI模型中,100%O2和2.0 ATA HBO治療均能不同程度地抑制促炎因子的釋放,2.0 ATA HBO抑制炎癥因子的效果最佳。

    2.3" "不同給氧方案對AKI模型小鼠腎臟組織炎癥因子的影響" "LPS誘導(dǎo)后,腎組織中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的mRNA水平均顯著上調(diào)(Plt;0.01, 圖3A~D);與LPS組相比,LPS+100%O2組和LPS+2.0 ATA HBO組IL-1β、IL-6和TNF-α水平下降,LPS+2.0 ATA HBO組下降幅度更大(Plt;0.05或Plt;0.01, 圖3A~C);而LPS+3.0 ATA HBO組炎癥因子水平治療前后差異無統(tǒng)計學意義。與LPS組相比,LPS+2.0 ATA HBO組治療后IL-10 mRNA水平顯著升高(Plt;0.01, 圖3),其他組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結(jié)果表明,不同的給氧方案對于腎臟組織炎癥因子的表達影響不同,2.0 ATA HBO治療既抑制了腎臟組織促炎因子的表達,也促進了腎臟組織抑炎因子的表達。

    3" "討" " " 論

    本研究探討了不同給氧方案對LPS誘導(dǎo)的AKI模型小鼠腎組織炎癥性損傷的保護作用。100%O2和2.0 ATA HBO治療均抑制了促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表達,減輕了AKI模型小鼠腎組織的損傷,僅2.0 ATA HBO治療上調(diào)抑炎因子IL-10的表達,且改善腎組織損傷的效果更好,為HBO治療AKI的臨床應(yīng)用提供了重要的實驗依據(jù)。

    炎癥的過度反應(yīng)導(dǎo)致組織炎癥性缺氧[19],缺氧可激活炎癥細胞并釋放大量促炎因子,如TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8等,加劇組織損傷[20-21]。本研究中,100%O2和2.0 ATA HBO治療均能抑制促炎因子的表達,減輕腎組織的炎癥性損傷,這與J.L.HALBACH等[22-23]的研究結(jié)果相似,其中2.0 ATA HBO改善組織損傷效果最好,這可能與改善組織缺氧效率有關(guān)。眾所周知,隨著氧濃度以及氧分壓的增加,血液中的氧含量增加,而 HBO通過增加血漿中的溶解氧和氧氣的擴散距離更有效改善組織缺氧[5, 19],這種作用已在局灶性腦組織缺血中被證實[24]。此外,無論是在外周血還是在腎組織中,LPS+2.0 ATA HBO組的IL-10水平均明顯高于其他給氧治療組,說明不同的給氧方案對組織中炎癥因子水平的影響不同。已有文獻[25]表明,抑炎因子IL-10通過抑制IL-6的分泌降低膿毒血癥相關(guān)AKI模型小鼠的死亡率,而HBO可上調(diào)IL-10的表達。文獻[8-9, 11]報道,HBO通過抑制促炎因子的釋放和增加抑炎因子的分泌來減輕小鼠急性腎組織損傷,這與本研究結(jié)果一致。但是當壓力升到3.0 ATA時,促炎因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)和抑炎因子IL-10的表達水平與LPS組均無差異,同時3.0 ATA HBO治療對LPS誘導(dǎo)的多器官組織損傷均無改善作用,這可能與氧毒性水平有關(guān)。越來越多的研究[26-27]表明,氧毒性會誘導(dǎo)細胞死亡和疾病發(fā)生。而HBO產(chǎn)生的氧毒性與暴露的壓力和持續(xù)時間有關(guān),O.SUKRU等[28]發(fā)現(xiàn),隨著暴露時間的延長,3.0 ATA HBO治療會導(dǎo)致大鼠肺和腦組織氧化應(yīng)激損傷。本研究表明氧療對腎組織炎癥性損傷具有保護作用,且2.0 ATA HBO的保護作用最好。

    本研究結(jié)果表明,單次2.0 ATA HBO治療雖明顯改善了腎組織炎癥性損傷,但未觀察其遠期效果。因此,下一步計劃采用生化以及病理指標對小鼠腎損傷進行長期檢測,并比較不同療程的治療效果。此外,還可考慮在大動物模型上開展臨床前的療效觀察及機制探討。

    總之,在AKI時,2.0 ATA HBO治療在調(diào)節(jié)機體炎癥反應(yīng)和減輕腎組織損傷方面效果最好。這不僅加深了對 HBO腎組織炎癥性損傷保護作用的認識和理解,也為拓展HBO的臨床適用范圍以及AKI的救治提供了重要的實驗依據(jù)。

    [參考文獻]

    [1]" "張宇慧, 楊莉. 膿毒癥相關(guān)急性腎損傷[J]. 臨床內(nèi)科雜志, 2022, 39(6):372-376.

    [2]" "LI C, WANG W, XIE S S, et al. The programmed cell death of macrophages, endothelial cells, and tubular epithelial cells in sepsis-AKI[J]. Front Med, 2021, 8:796724.

    [3]" "ZARBOCK A, NADIM M K, PICKKERS P, et al. Sepsis-associated acute kidney injury: consensus report of the 28th Acute Disease Quality Initiative workgroup[J]. Nat Rev Nephrol, 2023, 19(6):401-417.

    [4]" "WOO J, MIN J H, LEE Y H, et al. Effects of hyperbaric oxygen therapy on inflammation, oxidative/antioxidant balance, and muscle damage after acute exercise in normobaric, normoxic and hypobaric, hypoxic environments: a pilot study[J]. Int J Environ Res Public Health, 2020, 17(20):7377.

    [5]" "ORTEGA M A, FRAILE-MARTINEZ O, GARC?魱A-MONTERO C, et al. A general overview on the hyperbaric oxygen therapy: applications, mechanisms and translational opportunities[J]. Medicina, 2021, 57(9):864.

    [6]" "KIRBY J P, SNYDER J, SCHUERER D J E, et al. Essentials of hyperbaric oxygen therapy: 2019 review[J]. Mo Med, 2019, 116(3):176-179.

    [7]" "KRP1NAR , UZUN H. The effects of hyperbaric oxygen at different pressures on oxidative stress and antioxidant status in rats[J]. Medicina, 2019, 55(5):205.

    [8]" "EROLU H A, BYK B,ZTOPUZ , et al. Effects of hyperbaric oxygen treatment on liver and kidney tissue in chronic arsenic toxicity[J]. Undersea Hyperb Med, 2022, 49(4):467-477.

    [9]" "HAN G, MA L, GUO Y, et al. Hyperbaric oxygen therapy palliates lipopolysaccharide-induced acute lung injury in rats by upregulating AQP1 and AQP5 expression[J]. Exp Lung Res, 2015, 41(8):444-449.

    [10]" "BEKTAS A, ULUSOY M, MAS R M. Do late phase hyperbaric and normobaric oxygen therapies have effect on a liver damage? An experimental sepsis model[J]. Gen Med(Los Angel), 2019, 7(3):1-6.

    [11]" "SOKOLOVA K A. The role of hyperbaric oxygenation in combined treatment of acute pyelonephritis[J]. Urologiia, 2010(5):10-14.

    [12]" "SHARMA R, SHARMA S K, MUDGAL S K, et al. Efficacy of hyperbaric oxygen therapy for diabetic foot ulcer, a systematic review and meta-analysis of controlled clinical trials[J]. Sci Rep, 2021, 11(1):2189.

    [13]" "NEDREB"T, BRUUN T, SKJSTAD R, et al. Hyperbaric oxygen treatment in three cases of necrotizing infection of the neck[J]. Infect Dis Rep, 2012, 4(1):e21.

    [14]" "ALLARDET-SERVENT J, SICARD G, METZ V, et al. Benefits and risks of oxygen therapy during acute medical illness: just a matter of dose![J]. Rev Med Interne, 2019, 40(10):670-676.

    [15]" "BRANSON R D. Oxygen therapy in COPD[J]. Respir Care, 2018, 63(6):734-748.

    [16]" "LEWIS R S, BAKER P E, PARKER R, et al. High-flow nasal cannulae for respiratory support in adult intensive care patient[J]. Emergencies, 2022, 34(3):222-224.

    [17]" "YOO J Y, CHA D R, KIM B, et al. LPS-induced acute kidney injury is mediated by Nox4-SH3YL1[J]. Cell Rep, 2020, 33(3):108245.

    [18]" "龔琴, 王木蘭, 何鹿玲, 等. 比較四種因素所致實驗性急性腎損傷及炎性壞死因子的表達[J]. 中藥藥理與臨床, 2019, 35(3):180-185.

    [19]" "CHOUDHURY R. Hypoxia and hyperbaric oxygen therapy: a review[J]. Int J Gen Med, 2018, 11:431-442.

    [20]" "HENDRICKSON C M, MATTHAY M A. Endothelial bio-markers in human sepsis: pathogenesis and prognosis for ARDS[J]. Pulm Circ, 2018, 8(2):2045894018769876.

    [21]" "HE M Y, SHI W, YU M, et al. Nicorandil attenuates LPS-induced acute lung injury by pulmonary endothelial cell protection via NF-κB and MAPK pathways[J]. Oxid Med Cell Longev, 2019, 2019:4957646.

    [22]" "HALBACH J L, PRIETO J M, WANG A W, et al. Early hyperbaric oxygen therapy improves survival in a model of severe sepsis[J]. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol, 2019, 317(1):R160-R168.

    [23]" "HAUSER B, BARTH E, BASSI G, et al. Hemodynamic, metabolic, and organ function effects of pure oxygen ventilation during established fecal peritonitis-induced septic shock[J]. Crit Care Med, 2009, 37(8):2465-2469.

    [24]" "KJELLBERG A, ABDEL-HALIM L, HASSLER A, et al. Hyperbaric oxygen for treatment of long COVID-19 syndrome(HOT-LoCO): protocol for a randomised, placebo-controlled, double-blind, phase II clinical trial[J]. BMJ Open, 2022, 12(11):e061870.

    [25]" "SCH?譈TTLER J, NEUMANN S. Interleukin-6 as a prognostic marker in dogs in an intensive care unit[J]. Vet Clin Pathol, 2015, 44(2):223-228.

    [26]" "CHECA J, ARAN J M. Reactive oxygen species: drivers of physiological and pathological processes[J]. J Inflamm Res, 2020, 13:1057-1073.

    [27]" "CHEN R L, LAI U H, ZHU L L, et al. Reactive oxygen species formation in the brain at different oxygen levels: the role of hypoxia inducible factors[J]. Front Cell Dev Biol, 2018, 6:132.

    [28]" "SUKRU O, AHMET K, TURGUT T, et al. Correlation between hyperbaric oxygen exposure pressures and oxidative parameters in rat lung, brain, and erythrocytes[J] .Clin Biochem, 2005, 38(8):706-711.

    [收稿日期] 2023-12-27

    猜你喜歡
    氧療急性腎損傷高壓氧
    不同氧療方式在慢性阻塞性肺疾病合并肺心病中的療效研究
    加溫濕化高流量氧療治療重度高碳酸血癥呼吸衰竭病例報告1例
    不同方案治療重癥急性胰腺炎合并急性腎損傷患者臨床療效與安全性對比
    前列地爾聯(lián)合還原型谷胱甘肽治療急性腎損傷的療效觀察
    膿毒癥急性腎損傷患者的臨床特征及腎功能轉(zhuǎn)歸研究
    不同血液凈化方法對急性腎損傷的療效及其對炎癥的影響
    高壓氧治療各期糖尿病足間歇性跛行的療效觀察
    氧療聯(lián)合造口粉及安普貼的使用治療失禁性皮炎療效觀察
    三乙醇胺與氧療在防治局部中晚期鼻咽癌放射性皮膚損傷的療效比較
    高壓氧聯(lián)合天麻素及甲鈷胺治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的臨床觀察
    国产色视频综合| 日本vs欧美在线观看视频| 国产成人啪精品午夜网站| 看片在线看免费视频| 亚洲中文字幕日韩| 欧美黑人精品巨大| 国产高清有码在线观看视频 | 久久精品国产清高在天天线| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产高清videossex| 欧美日本视频| 久久人人精品亚洲av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 免费看十八禁软件| 精品第一国产精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲av熟女| 国产亚洲欧美98| 国产成人免费无遮挡视频| 不卡一级毛片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| www.www免费av| 国产亚洲欧美精品永久| 一级a爱视频在线免费观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| www国产在线视频色| 国产亚洲精品av在线| 999久久久国产精品视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 一级毛片精品| 免费在线观看影片大全网站| 99在线人妻在线中文字幕| 性少妇av在线| 99国产精品一区二区三区| 波多野结衣高清无吗| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 精品无人区乱码1区二区| 给我免费播放毛片高清在线观看| 精品久久蜜臀av无| 精品久久久久久成人av| 国产在线精品亚洲第一网站| 成人永久免费在线观看视频| 免费在线观看影片大全网站| 涩涩av久久男人的天堂| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产亚洲精品av在线| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 国产精品免费视频内射| 亚洲成人久久性| 成人三级黄色视频| 日韩欧美三级三区| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲五月天丁香| cao死你这个sao货| 一本大道久久a久久精品| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 女人精品久久久久毛片| www.精华液| 久久人妻av系列| xxx96com| 91精品国产国语对白视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 真人做人爱边吃奶动态| 窝窝影院91人妻| 大码成人一级视频| 天堂影院成人在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 欧美精品亚洲一区二区| ponron亚洲| 欧美黑人精品巨大| or卡值多少钱| 国产成人影院久久av| 国内精品久久久久久久电影| 伦理电影免费视频| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产精品av久久久久免费| aaaaa片日本免费| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 午夜福利18| 亚洲av第一区精品v没综合| 99久久综合精品五月天人人| 国产亚洲av高清不卡| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 99精品在免费线老司机午夜| 久热爱精品视频在线9| av免费在线观看网站| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲免费av在线视频| 正在播放国产对白刺激| 亚洲色图av天堂| 自线自在国产av| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产欧美日韩一区二区精品| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产精品二区激情视频| x7x7x7水蜜桃| 欧美日韩精品网址| 一二三四社区在线视频社区8| 日本一区二区免费在线视频| 99国产精品一区二区三区| 国产主播在线观看一区二区| 久久久国产成人免费| 99国产精品99久久久久| 欧美在线黄色| 男人操女人黄网站| 搞女人的毛片| 国产高清激情床上av| 十八禁人妻一区二区| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲全国av大片| 欧美激情高清一区二区三区| 国产高清videossex| 亚洲精品中文字幕在线视频| 91av网站免费观看| 久久人妻av系列| ponron亚洲| 免费看美女性在线毛片视频| 午夜成年电影在线免费观看| 12—13女人毛片做爰片一| 久久久久久大精品| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 淫秽高清视频在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲精品国产区一区二| 高清黄色对白视频在线免费看| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲精品一区av在线观看| 日韩av在线大香蕉| 一区二区三区国产精品乱码| 免费少妇av软件| 麻豆av在线久日| 日韩大尺度精品在线看网址 | 真人一进一出gif抽搐免费| www日本在线高清视频| 一a级毛片在线观看| www.www免费av| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产亚洲精品第一综合不卡| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 黄色毛片三级朝国网站| 搡老岳熟女国产| 中国美女看黄片| 精品国内亚洲2022精品成人| 在线观看一区二区三区| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲午夜理论影院| 亚洲男人天堂网一区| 老司机午夜十八禁免费视频| 在线观看免费视频日本深夜| 大陆偷拍与自拍| 国产激情久久老熟女| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产精品精品国产色婷婷| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 妹子高潮喷水视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 久久人妻av系列| 婷婷精品国产亚洲av在线| 老鸭窝网址在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| av欧美777| 香蕉国产在线看| 91在线观看av| 亚洲欧美日韩无卡精品| 大型av网站在线播放| 午夜免费鲁丝| 婷婷六月久久综合丁香| 国产成人影院久久av| 国产欧美日韩一区二区精品| 村上凉子中文字幕在线| 国产不卡一卡二| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| bbb黄色大片| 久久热在线av| 欧美不卡视频在线免费观看 | √禁漫天堂资源中文www| 亚洲国产精品合色在线| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久久久久久午夜电影| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 99精品在免费线老司机午夜| 午夜福利高清视频| 免费高清视频大片| 欧美成狂野欧美在线观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲三区欧美一区| 亚洲,欧美精品.| 午夜福利在线观看吧| svipshipincom国产片| 国产亚洲av高清不卡| 国产精品二区激情视频| 69精品国产乱码久久久| 国产成人av激情在线播放| 欧美日本视频| 亚洲成人久久性| 亚洲成av片中文字幕在线观看| cao死你这个sao货| 国产激情久久老熟女| 精品福利观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲av成人av| 51午夜福利影视在线观看| av片东京热男人的天堂| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 亚洲成av片中文字幕在线观看| 午夜福利视频1000在线观看 | 长腿黑丝高跟| 又大又爽又粗| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 成在线人永久免费视频| 国产成人啪精品午夜网站| 18禁观看日本| 亚洲精品久久国产高清桃花| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美+亚洲+日韩+国产| 在线观看午夜福利视频| 国产精品国产高清国产av| 在线免费观看的www视频| 久久午夜亚洲精品久久| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 88av欧美| 国产色视频综合| av天堂久久9| 国产精品免费视频内射| 他把我摸到了高潮在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 一区二区三区高清视频在线| 变态另类丝袜制服| 日本 欧美在线| 在线永久观看黄色视频| 高清黄色对白视频在线免费看| 母亲3免费完整高清在线观看| 正在播放国产对白刺激| 欧美+亚洲+日韩+国产| 黄频高清免费视频| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲电影在线观看av| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 中亚洲国语对白在线视频| 久久久久久久久免费视频了| 好男人电影高清在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 国产成人av激情在线播放| 久久人人精品亚洲av| 中国美女看黄片| 午夜福利高清视频| 极品教师在线免费播放| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 黄色成人免费大全| 国产精品久久久久久精品电影 | 乱人伦中国视频| 日本 欧美在线| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 免费av毛片视频| 岛国在线观看网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产人伦9x9x在线观看| 在线观看一区二区三区| 大码成人一级视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美亚洲日本最大视频资源| 嫁个100分男人电影在线观看| 色老头精品视频在线观看| 成人免费观看视频高清| 久久国产亚洲av麻豆专区| 午夜福利,免费看| 人妻久久中文字幕网| 国产男靠女视频免费网站| 久久九九热精品免费| 一级毛片高清免费大全| 欧美av亚洲av综合av国产av| 深夜精品福利| 欧美性长视频在线观看| 在线观看www视频免费| 99re在线观看精品视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲男人的天堂狠狠| 色婷婷久久久亚洲欧美| 黄色女人牲交| 真人一进一出gif抽搐免费| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲国产精品999在线| 日韩高清综合在线| 在线观看舔阴道视频| av欧美777| 麻豆国产av国片精品| 男男h啪啪无遮挡| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 黄频高清免费视频| 欧美乱色亚洲激情| 久久中文字幕人妻熟女| 国产精品亚洲美女久久久| videosex国产| 久久国产亚洲av麻豆专区| 99国产精品免费福利视频| 国产片内射在线| 99re在线观看精品视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美日本中文国产一区发布| 日本一区二区免费在线视频| 麻豆一二三区av精品| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久久精品欧美日韩精品| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品国产亚洲在线| 久久中文字幕人妻熟女| 高清在线国产一区| 国产不卡一卡二| 精品久久蜜臀av无| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久久国产成人精品二区| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产一区二区在线av高清观看| 三级毛片av免费| 99国产精品99久久久久| av中文乱码字幕在线| www.www免费av| 一二三四在线观看免费中文在| 男女下面插进去视频免费观看| 99国产精品一区二区三区| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 丝袜美足系列| 99国产综合亚洲精品| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲无线在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲国产精品999在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 中文字幕精品免费在线观看视频| 岛国视频午夜一区免费看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 老司机午夜福利在线观看视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 满18在线观看网站| 国产亚洲欧美精品永久| avwww免费| 91麻豆av在线| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 亚洲第一av免费看| 亚洲欧美精品综合久久99| 免费少妇av软件| 91麻豆av在线| 午夜福利一区二区在线看| 久久伊人香网站| 国产精品久久久人人做人人爽| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 一区二区三区激情视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 性少妇av在线| 欧美性长视频在线观看| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产三级黄色录像| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲九九香蕉| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产成人精品久久二区二区91| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 国产精品乱码一区二三区的特点 | 99国产极品粉嫩在线观看| 久久久久久大精品| www.熟女人妻精品国产| 又紧又爽又黄一区二区| 99国产综合亚洲精品| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲av美国av| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 久久久久久人人人人人| 日韩高清综合在线| 亚洲一区二区三区不卡视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 中文字幕色久视频| av视频免费观看在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产私拍福利视频在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 国产一卡二卡三卡精品| 免费观看精品视频网站| 亚洲无线在线观看| 天天一区二区日本电影三级 | 久久婷婷成人综合色麻豆| 午夜精品久久久久久毛片777| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 成人三级黄色视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久中文看片网| 淫妇啪啪啪对白视频| 一二三四社区在线视频社区8| 看片在线看免费视频| 国产精品精品国产色婷婷| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 日韩av在线大香蕉| 精品国产亚洲在线| 久久这里只有精品19| 午夜免费成人在线视频| 校园春色视频在线观看| 国产一卡二卡三卡精品| 黄色毛片三级朝国网站| 日本免费a在线| 亚洲国产精品合色在线| 一本久久中文字幕| 久久人人97超碰香蕉20202| 男人操女人黄网站| 久久人人97超碰香蕉20202| 十分钟在线观看高清视频www| 波多野结衣av一区二区av| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 脱女人内裤的视频| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 成人特级黄色片久久久久久久| 香蕉国产在线看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 性欧美人与动物交配| 精品一品国产午夜福利视频| 国产成人av激情在线播放| 久久久久久大精品| 日韩精品中文字幕看吧| 两性夫妻黄色片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲欧美激情综合另类| 在线观看免费视频网站a站| 国产人伦9x9x在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 一本大道久久a久久精品| 一级片免费观看大全| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 在线观看免费午夜福利视频| 搡老岳熟女国产| 国产高清videossex| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产亚洲精品一区二区www| 久久亚洲真实| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 欧美中文日本在线观看视频| 国产91精品成人一区二区三区| 精品国产乱子伦一区二区三区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产单亲对白刺激| 精品乱码久久久久久99久播| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 久久中文字幕人妻熟女| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 波多野结衣av一区二区av| 日本三级黄在线观看| 免费高清视频大片| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久精品成人免费网站| 自线自在国产av| 成人三级做爰电影| 日韩欧美三级三区| 搡老熟女国产l中国老女人| a级毛片在线看网站| 国产一区二区三区视频了| e午夜精品久久久久久久| av欧美777| 精品国内亚洲2022精品成人| 日本a在线网址| 一区二区三区激情视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| av欧美777| 一级毛片女人18水好多| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲三区欧美一区| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产av一区二区精品久久| 一级毛片精品| 久久精品国产亚洲av高清一级| 日韩中文字幕欧美一区二区| 操美女的视频在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 真人做人爱边吃奶动态| 夜夜爽天天搞| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 搞女人的毛片| 午夜精品在线福利| 丁香欧美五月| 国内精品久久久久精免费| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产区一区二久久| 亚洲av美国av| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 91国产中文字幕| 精品人妻1区二区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 90打野战视频偷拍视频| 午夜激情av网站| 99香蕉大伊视频| 美女大奶头视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 日韩欧美免费精品| 日韩中文字幕欧美一区二区| 在线av久久热| 在线免费观看的www视频| 精品久久久精品久久久| 亚洲五月婷婷丁香| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 免费高清在线观看日韩| 精品不卡国产一区二区三区| 99久久精品国产亚洲精品| 黄色女人牲交| 韩国av一区二区三区四区| 十八禁人妻一区二区| 男女午夜视频在线观看| xxx96com| 狠狠狠狠99中文字幕| 12—13女人毛片做爰片一| 午夜福利成人在线免费观看| 国产精品九九99| 国产精品国产高清国产av| 免费在线观看黄色视频的| 国产高清激情床上av| 国产成人精品久久二区二区免费| av超薄肉色丝袜交足视频| 18禁观看日本| 久久久久精品国产欧美久久久| 午夜福利免费观看在线| 欧美成人午夜精品| 欧美黄色淫秽网站| 十八禁网站免费在线| 国产精品国产高清国产av| 久99久视频精品免费| 精品人妻在线不人妻| 亚洲午夜理论影院| 久久性视频一级片| 亚洲国产精品sss在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址 | 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲男人的天堂狠狠| 90打野战视频偷拍视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产成人欧美在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲欧美激情综合另类| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 无人区码免费观看不卡| 国产私拍福利视频在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| av在线播放免费不卡| 在线国产一区二区在线| 在线观看免费日韩欧美大片| 99re在线观看精品视频| 看黄色毛片网站| www.www免费av| 国产在线观看jvid| 欧美最黄视频在线播放免费| 中亚洲国语对白在线视频| 涩涩av久久男人的天堂| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲中文av在线| 一级a爱视频在线免费观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久中文看片网| 亚洲国产精品合色在线| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲男人天堂网一区| 国产精品国产高清国产av| x7x7x7水蜜桃| 国产精品一区二区三区四区久久 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲第一电影网av| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲 国产 在线| 两个人看的免费小视频| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲精品一区av在线观看| 免费在线观看日本一区| 18美女黄网站色大片免费观看| 波多野结衣av一区二区av| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 夜夜爽天天搞| 日韩成人在线观看一区二区三区| 看片在线看免费视频|