基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討“姜黃-虎杖”藥對(duì)干預(yù)足細(xì)胞病變的作用機(jī)制

趙凱 程小紅 盧芬萍 王悅彤 李娜梅 董誠(chéng) 袁二磊

*基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2019YFC1709404）；科技部國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究項(xiàng)目（2018YFC1704201）

第一作者簡(jiǎn)介：趙凱（1991-），男，碩士研究生，研究方向：慢性腎臟病基礎(chǔ)與臨床研究。

△通信作者：袁二磊，E-mail：18709189120@163.com

摘要：目的? 應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)“姜黃-虎杖”藥對(duì)干預(yù)足細(xì)胞病變的可能作用靶點(diǎn)與機(jī)制，為臨床應(yīng)用及實(shí)驗(yàn)研究提供思路。方法? 借助中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)及分析平臺(tái)（TCMSP），檢索姜黃、虎杖的化學(xué)成分及其對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)蛋白，運(yùn)用Cytoscape3.2.1生物信息分析軟件繪制“疾病-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。在OMIM、DrugBank、GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索足細(xì)胞病變相關(guān)靶點(diǎn)，利用Venny2.1.0獲取與“姜黃-虎杖”作用靶點(diǎn)的交集基因。應(yīng)用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)及Cytoscape3.2.1軟件的“CytoNCA”插件構(gòu)建交集基因蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系（PPI）網(wǎng)絡(luò)圖并進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析，獲取核心預(yù)測(cè)靶點(diǎn)。借助DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)交集基因進(jìn)行（GO）和（KEGG）通路富集。結(jié)果? 獲得活性成分11種，其中姜黃3種、虎杖8種，主要包括豆甾醇（Stigmasterol）、木犀草素（luteolin）、囊毒堿（Physovenine）等。PPI網(wǎng)絡(luò)圖共包含節(jié)點(diǎn)33個(gè)、連線333條，AKT1（絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1）、VEGFA（血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A）、TNF（腫瘤壞死因子-α）等基因處于核心位置。GO分析共獲得生物信息條目1127個(gè)（P<0.05），KEGG通路富集條目244個(gè)（P<0.05），主要涉及AGE-RAGE、PI3K-Akt、NF-κB、AMPK等信號(hào)通路等。結(jié)論? 姜黃-虎杖藥對(duì)可能通過(guò)參與細(xì)胞凋亡、氧化反應(yīng)等生物過(guò)程，調(diào)控PI3K-Akt、NF-κB、AMPK等信號(hào)通路，從而發(fā)揮對(duì)足細(xì)胞病變的干預(yù)作用。

關(guān)鍵詞：姜黃；虎杖；足細(xì)胞病變；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

中圖分類號(hào)：R285.5??? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A??? 文章編號(hào)：1007-2349（2024）06-0060-09

足細(xì)胞是一種高度特化、沒(méi)有增殖潛能的內(nèi)臟上皮細(xì)胞，由足突、初級(jí)突起、胞體構(gòu)成，胞體通過(guò)足突貼覆在腎小球毛細(xì)血管基底膜外，與腎小球基底膜以及有孔內(nèi)皮細(xì)胞共同組成腎小球的濾過(guò)屏障［1］。而免疫性損傷如狼瘡性腎炎，血流動(dòng)力學(xué)損傷如腎單位減少、足細(xì)胞機(jī)械牽拉，代謝因素如高血糖、高血脂，基因突變等都會(huì)導(dǎo)致足細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性破壞及細(xì)胞代謝失調(diào)，引起足細(xì)胞足突融合，進(jìn)一步從腎小球基底膜脫離，腎小球?yàn)V過(guò)屏障結(jié)構(gòu)和功能損害，產(chǎn)生蛋白尿，甚至腎小球硬化等疾?。?］。近年來(lái)隨著腎臟穿刺活檢術(shù)技術(shù)的成熟和腎臟損傷分子生物學(xué)研究的深入，腎小球足細(xì)胞病變?cè)谀I臟損傷中的重要作用多次被研究者提及，該病的防治越發(fā)受到腎臟病專業(yè)領(lǐng)域的學(xué)者的關(guān)注。筆者在跟隨程小紅主任醫(yī)師學(xué)習(xí)期間，發(fā)現(xiàn)姜黃、虎杖的聯(lián)合應(yīng)用在有關(guān)足細(xì)胞病變的腎臟病治療中具有良好的療效。鑒于此，本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)初步探討“姜黃-虎杖”藥對(duì)干預(yù)足細(xì)胞病變的主要化學(xué)成分、作用靶點(diǎn)及相關(guān)信號(hào)通路，為后期基礎(chǔ)研究與臨床用藥的開(kāi)展提供借鑒。

1? 資料與方法

1.1? “姜黃-虎杖”藥物活性成分及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)收集? 借助數(shù)據(jù)庫(kù)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)技術(shù)平臺(tái)（TCMSP）（https：//old.tcmspw-e.com/tcmsp.php），設(shè)置條件為口服生物利用度（OB）≥30％、類藥性指數(shù)（DL）≥0.18［3］。輸入關(guān)鍵詞“姜黃、虎杖”，篩選藥物化學(xué)成分、對(duì)應(yīng)靶蛋白。并在UniProtKB數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.uniprot.org/）中將檢索條件設(shè)置為“Organism：Homosapiens”，查詢潛在靶點(diǎn)蛋白的對(duì)應(yīng)基因。

1.2? 疾病靶點(diǎn)基因的篩選? 以“podocyte disease”“podocytopathy”“Podocyte lesion”等足細(xì)胞病變的相關(guān)疾病為關(guān)鍵詞，分別利用GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.genecards.org/）、DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.drugbank.com/）、在OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.omim.org/）進(jìn)行檢索，得到各個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中足細(xì)胞疾病靶點(diǎn)，去掉重復(fù)靶點(diǎn)并取并集，得到足細(xì)胞疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集。

1.3? 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建? 將篩選得出的姜黃、虎杖活性成分對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)基因與足細(xì)胞病變所對(duì)應(yīng)基因上傳至Venny2.1.0（http：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny）中繪制韋恩圖，取得疾病藥物交集基因。將結(jié)果導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org）中，獲取PPI網(wǎng)絡(luò)圖，利用Cytoscape3.2.1軟件的“CytoNCA”插件進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析，根據(jù)拓?fù)鋮?shù)值進(jìn)一步篩選網(wǎng)絡(luò)圖中核心靶點(diǎn)［4］。

1.4? GO分析和KEGG信號(hào)通路富集? 取姜黃-虎杖”與足細(xì)胞病變的交集基因，在DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//david.ncifcrf.gov/）中進(jìn)行GO和KEGG生物學(xué)過(guò)程富集分析。以物種“Homo sapiens（人）”，標(biāo)識(shí)符“（Official gene symbol）”為條件［3］，篩選P<0.05的富集條目，并以P值從小到大進(jìn)行排序。獲取前20位富集條目導(dǎo)入OmicShareTools數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.omicshare.com/tools/），以條形圖、氣泡圖形式展示富集分析結(jié)果。

2? 結(jié)果

2.1? “姜黃-虎杖”藥對(duì)化學(xué)成分篩選結(jié)果? 在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中共獲得活性化學(xué)成分11種，其中虎杖8種、姜黃3種，設(shè)置條件為OB≥30％、DL≥0.18，活性化學(xué)成分基本信息詳見(jiàn)表1。

2.2? “疾病-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)分析? “姜黃-虎杖”藥對(duì)與足細(xì)胞病變的關(guān)鍵靶點(diǎn)圖見(jiàn)圖1。共包含節(jié)點(diǎn)123個(gè)、連線242條。其中，中藥節(jié)點(diǎn)2個(gè)、活性成分節(jié)點(diǎn)11個(gè)、靶點(diǎn)蛋白節(jié)點(diǎn)110個(gè)。其中豆甾醇、木犀草素、囊毒堿、beta-谷甾醇、槲皮素等對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)較多，可能是姜黃-虎杖作用于足細(xì)胞病變的核心活性成分。

2.3? “姜黃-虎杖”藥物靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)交集結(jié)果? 本次研究得出姜黃作用靶點(diǎn)28個(gè)、虎杖作用靶點(diǎn)98個(gè)、足細(xì)胞病變相關(guān)基因1552個(gè)。導(dǎo)入Venny2.1.0在線作圖（見(jiàn)圖2）后，獲取變交集基因44個(gè)，其中3個(gè)為柴胡與黃芩共同作用靶點(diǎn)（PTGS2、PTGS1、PIK3CG）。

2.4? PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與分析結(jié)果? 通過(guò)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)在線構(gòu)建姜黃-虎杖干預(yù)足細(xì)胞病變的PPI網(wǎng)絡(luò)圖，結(jié)果以TSV格式導(dǎo)出并輸入Cytoscape3.7.1軟件中可視化，繪制出一個(gè)由33個(gè)節(jié)點(diǎn)組成包含333條邊的蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)圖，同時(shí)根據(jù)Degree值對(duì)蛋白從大到小進(jìn)行排列，Degree值為節(jié)點(diǎn)中心度，數(shù)值

越大代表節(jié)點(diǎn)之間關(guān)系更密切。本研究以Degree值≥30為篩選條件，共獲得910個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，由此推測(cè)AKT1（絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1）、VEGFA（血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A）、TNF-α（腫瘤壞死因子-α）、IL-6（白介素-6）、CASP3（胱天蛋白酶3）、MAPK1（絲裂原活化蛋白激酶1）、EGFR（表皮生長(zhǎng)因子受體）、JUN（核內(nèi)原癌基因）、TP53（腫瘤蛋白P53）可能為姜黃-虎杖干預(yù)足細(xì)胞病變的關(guān)鍵靶蛋白。

2.5? GO基因分析與KEGG通路富集結(jié)果? 通過(guò)GO基因分析得到1127個(gè)條目（P<0.05），其中生物過(guò)程（BP）條目1033個(gè)、細(xì)胞組成（CC）條目38個(gè)、分子功能（MF）條目56個(gè)，見(jiàn)圖3。生物過(guò)程主要以無(wú)機(jī)物反應(yīng)（response to inorganic substance）、細(xì)胞凋亡信號(hào)通路（apoptotic signaling pathway）、類固醇激素反應(yīng)（response to steroid hormone）、氧化反應(yīng)（response to oxygenlevels）等為主要富集條目，見(jiàn)圖4；細(xì)胞組成主要涉及膜筏（membrane rafts）、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白（transcription regulator complex）、膜側(cè)（side of membrane）、受體復(fù)合物（receptor complex）等，見(jiàn)圖5；分子功能主要涉及激酶結(jié)合（kinase binding）、蛋白質(zhì)同源二聚化活性（protein homodimerization activity）、磷酸酶結(jié)合（phosphatase binding）等，見(jiàn)圖6。KEGG富集獲得244個(gè)（P<0.05）信號(hào)通路，顯著富集的前20條通路詳見(jiàn)圖7。結(jié)果顯示姜黃-虎杖干預(yù)足細(xì)胞病變的可能與HepatitisB（乙肝病毒感染通路）、AGE-RAGEsignaling pathway indiabetic complications（糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE通路）、PI3K-Akt信號(hào)通路（PI3K-Aktsignalingpathway）、HepatitisC（丙肝病毒感染通路）、NF-κB信號(hào)通路（NF-kappaB signaling pathway）、癌癥通路（Pathways in cancer）、瘧疾（Malaria）、AMPK信號(hào)通路（AMPK signaling pathway）等通路有關(guān)。表明姜黃-虎杖的活性靶點(diǎn)可通過(guò)調(diào)控多個(gè)通路協(xié)同發(fā)揮治療作用。

3? 討論

2002年P(guān)ollak首次提出“足細(xì)胞病”這一概念，即以足細(xì)胞病變?yōu)轱@著特點(diǎn)的腎小球疾病，機(jī)體代謝紊亂、血流動(dòng)力學(xué)改變、免疫復(fù)合物形成、基因突變、中毒以及感染等皆可誘發(fā)，病理學(xué)一般表現(xiàn)為腎小球足細(xì)胞數(shù)量減少、腎小球基質(zhì)成分改變、基底膜的增厚、足突融合等，臨床出現(xiàn)大量蛋白尿、低蛋白血癥、水腫等癥狀［5］。根據(jù)病因可將足細(xì)胞病分為3類，原發(fā)性、獲得性和遺傳性。原發(fā)性足通常以微小病變、局灶節(jié)段性腎小球硬化以及膜性腎病的表現(xiàn)形式而發(fā)?。欢@得性足細(xì)胞病多為自身免疫性、感染相關(guān)性、藥物相關(guān)性、腫瘤相關(guān)性、腎移植相關(guān)性膜性腎病等；遺傳性足細(xì)胞病有家族性腎病綜合征、遺傳性FSGS等［6-7］。

中醫(yī)古籍中并無(wú)“足細(xì)胞病變”的名稱，但根據(jù)其臨床特點(diǎn)，一般歸于中醫(yī)“水腫”、“尿濁”、“腎勞”等范疇。水腫多由體內(nèi)肺、脾、腎三臟功能失調(diào)所致，肺為華蓋，在上不能制約水源，脾臟無(wú)力運(yùn)化水濕，腎臟在下不能固攝精氣，精微物質(zhì)流失，氣虛無(wú)法通調(diào)水道，從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。程小紅主任醫(yī)師從醫(yī)40余年，在中西醫(yī)結(jié)合治療腎臟病方面具有豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為其病因病機(jī)主要為本虛標(biāo)實(shí)，正虛為本，濕邪為標(biāo)，兼雜瘀血。正虛為本，正如《景岳全書(shū)》［8］曾論證水腫道：“凡欲辨水氣之異者，在欲辨其陰陽(yáng)耳……若病在水分，則多為陰證……陽(yáng)衰則氣不化，而精即為水……水不能化，因氣之虛……此水腫之病，所以多屬陽(yáng)虛也。瘀血為患，《血證論》［9］中言：“水濕泛溢，阻滯氣機(jī)……，血行緩慢而成瘀……”。程小紅主任醫(yī)師在腎臟病理學(xué)領(lǐng)域具有較高的造詣，將顯微鏡下的病理改變視為中醫(yī)望診的延伸，認(rèn)為腎臟足細(xì)胞病變屬“腎絡(luò)微型癥瘕”，治療上注重活血化瘀散結(jié)。臨床治療尤其善使用姜黃、虎杖藥對(duì)，姜黃可行氣、破血、除風(fēng)熱，虎杖能利濕、清熱、活血化瘀，二者配伍具有清熱利濕，活血行氣之功效。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，姜黃含有姜黃素類、揮發(fā)油類、黃酮類、酚酸類等成分，并且具有較好的抗腫瘤、抗病毒、抗炎、調(diào)血脂等作用［10］?；⒄群休祯?、二苯乙烯類、萜類等化學(xué)成分，具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、改善糖脂代謝、心血管、肝、腎保護(hù)等作用［11］。

本研究通過(guò)“疾病-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)模型的預(yù)測(cè)分析得出為豆甾醇、木犀草素、囊毒堿、beta-谷甾醇、槲皮素等作用靶點(diǎn)較多，推測(cè)為“姜黃-虎杖”干預(yù)足細(xì)胞病變的主要活性成分。相關(guān)藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，豆甾醇具有抗炎、抗病毒和抗腫瘤等多種生物活性，可通過(guò)調(diào)節(jié)雌激素、內(nèi)分泌抵抗、甲狀腺激素等信號(hào)通路上MAPK3、PRKACA等核心靶點(diǎn)的表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞因子水平，從而發(fā)揮抗炎作用［12-13］。槲皮素屬于黃酮類化合物，廣泛存在于自然界中，可通過(guò)抑制p38MAPK、NF-κB信號(hào)通路抑制炎癥因子的表達(dá)，從而發(fā)揮抗炎、改善氧化應(yīng)激和免疫調(diào)節(jié)作用，進(jìn)一步減輕腎小球系膜增生和基底膜增厚，發(fā)揮保護(hù)腎臟功能的目的。靳英麗等［14］研究發(fā)現(xiàn)槲皮素可通過(guò)增強(qiáng)nephrin和podocin蛋白在足細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)保護(hù)腎臟。張兆洲等［15］研究發(fā)現(xiàn)槲皮素可通過(guò)阻斷轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因β1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的分子，抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子P1誘導(dǎo)的足細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，達(dá)到維持腎小球?yàn)V過(guò)屏障的完整性的作用。相關(guān)研究表明β-谷甾醇可通過(guò)降低因組胺釋放引起的小鼠毛細(xì)管通透性增加，抑制NF-κB信號(hào)通路，活化IL-10，降低PEG2、緩激肽、組胺等炎癥介質(zhì)活性，緩解炎癥反應(yīng)［16-17］。木犀草素屬于黃酮化合物，存在于多種植物中，具有抗氧化、抗炎、神經(jīng)保護(hù)和抗過(guò)敏的特性。木犀草素中含有的酚羥基具有較強(qiáng)的還原性，同時(shí)它還可抑制環(huán)氧化酶２的產(chǎn)生，從而抑制氧化反應(yīng)［18］。木犀草素同時(shí)能夠調(diào)節(jié)IL-6、IL-10等炎癥因子表達(dá)抑制炎癥反應(yīng)［19］。

信號(hào)通路作為細(xì)胞外分子信號(hào)經(jīng)細(xì)胞膜傳入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮效應(yīng)的一系列酶促反應(yīng)通路，在整個(gè)生理、病理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用［3］。本次研究KEGG通路富集結(jié)果顯示PI3K-Akt、癌癥、AMPK、NF-κB等可能是“姜黃-虎杖”藥對(duì)干預(yù)足細(xì)胞病變的關(guān)鍵信號(hào)通路。PPI拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果顯示，AKT1、VEGFA、TNF-α、IL-6、CASP3、MAPK1等靶點(diǎn)處于網(wǎng)絡(luò)核心位置?？赡転榻S-虎杖干預(yù)足細(xì)胞病變的關(guān)鍵靶蛋白。PI3K/Akt信號(hào)通路作為一個(gè)復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等過(guò)程。有研究表明足細(xì)胞損傷中肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的紊亂與PI3K有關(guān)。PI3K/AKT 信號(hào)通路是mTOR 的上游調(diào)控通路，NR1 被認(rèn)為具有足細(xì)胞保護(hù)作用，而PI3K/AKT/mTOR 信號(hào)通路的活化參與 NR1 介導(dǎo)細(xì)胞保護(hù)作用［18］。在足細(xì)胞病變中，由CD2相關(guān)蛋白（CD2AP）介導(dǎo)PI3K募集于質(zhì)膜上，并刺激足細(xì)胞中PI3K依賴的Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終引起足細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能完整性損傷，甚至凋亡［20］。NF-κB信號(hào)通路可調(diào)控參與炎癥反應(yīng)的基因表達(dá)，是足細(xì)胞損傷的重要靶點(diǎn)。TLR4作為NF-κB上游轉(zhuǎn)錄因子，在腎小球炎癥過(guò)程也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。TNF-α和IL-6是TLR4/NF-κB信號(hào)通路激活的產(chǎn)物，而高糖刺激可促進(jìn)TLR4高表達(dá)，激活的TLR4在腎臟中進(jìn)一步誘導(dǎo)足細(xì)胞中NF-κB的活化，而促進(jìn)炎癥因子TNF-α、IL-6的釋放，加重足細(xì)胞的炎癥損傷［21-23］。AMPK信號(hào)通路是一種絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶，是足細(xì)胞關(guān)鍵的代謝調(diào)節(jié)器和能量傳感器，由AMP／ATP比值決定其活性，當(dāng)出現(xiàn)ATP消耗增加、AMP濃度升高的情況時(shí)，比如缺血缺氧、低血糖、應(yīng)激、和運(yùn)動(dòng)等，可調(diào)控AMPK活化，促進(jìn)足細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)吸收并增強(qiáng)其分解代謝［24］。相關(guān)研究表明通過(guò)調(diào)控AMPK通路改善足細(xì)胞能量代謝，抑制氧化應(yīng)激，減少足細(xì)胞凋亡，促進(jìn)足細(xì)胞肌動(dòng)蛋白重塑等方式減輕糖尿病腎病足細(xì)胞損傷，進(jìn)一步延緩病情進(jìn)展［25］。腎小管上皮細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞可分泌TNF-α，可介導(dǎo)炎性因子的分泌及聚集，進(jìn)一步加重炎腎臟損傷［26］。苑佳奇等［27］研究發(fā)現(xiàn)隨著TNF-α作用濃度及作用時(shí)間的增加，足細(xì)胞受損嚴(yán)重，相關(guān)蛋白表達(dá)量明顯降低。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是一 種多向性分子，其中在骨髓的造血細(xì)胞、發(fā)育腎組織的神經(jīng)纖維中都有表達(dá)，并且多種生物效應(yīng)的發(fā)揮也會(huì)通過(guò) VEGF和它的異性受體相互結(jié)合。腎小球中的VEGF可自行分泌后繼續(xù)作用于足細(xì)胞，且在足細(xì)胞上有特異性的結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)足細(xì)胞進(jìn)行增殖和分化扮演非常重要的作用［28］。以上研究均間接的驗(yàn)證了本研究預(yù)測(cè)的生物過(guò)程和信號(hào)通路的可行性。

綜上所述，姜黃-虎杖藥對(duì)的關(guān)鍵活性成分為豆甾醇、木犀草素、囊毒堿、beta-谷甾醇、槲皮素等，可能通過(guò)PI3K-Akt、癌癥、AMPK、NF-κB等信號(hào)通路作用于AKT1、VEGFA、TNF-α、IL-6、CASP3、MAPK1等核心靶點(diǎn)發(fā)揮穩(wěn)定足細(xì)胞病變功能。本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法充分體現(xiàn)了中醫(yī)藥多成分、多靶點(diǎn)、多通路的特性，與中醫(yī)藥治療整體觀的基本思路相符合，為后續(xù)的臨床和實(shí)驗(yàn)研究提供了客觀依據(jù)。但此次局限于在線數(shù)據(jù)庫(kù)的生物信息分析層面，仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)：

［1］Savas Berkan，Astarita Giuseppe，Aureli Massimo，et，al.Gangliosides in Podocyte Biology and Disease［J］.International journal of molecular sciences，2020，21（24）：185-187.

［2］Haleyke，Kronenbergnm，Liehmp et，al.Podo-cyte injury elicits loss and recovery of cellular forces［J］.SciAdv，2018，4（6）：8030.

［3］竇一田，尚懿純，劉春柳.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的“柴胡-黃芩”藥對(duì)干預(yù)足細(xì)胞病變作用機(jī)制探索［J］.中國(guó)藥房，2021，32（4）：425-431.

［4］任曉龍，呂琳媛.網(wǎng)絡(luò)重要節(jié)點(diǎn)排序方法綜述［J］.科學(xué)通報(bào)，2014，59（13）：1175-1197.

［5］李童，趙媛媛，楊發(fā)奮.足細(xì)胞標(biāo)志蛋白在足細(xì)胞病中的研究進(jìn)展［J］.右江醫(yī)學(xué)，2022，50（1）：72-75.

［6］Farmerlk，Rollasonr，Whitcombdj，et al.TRPC6 binds to and activates calpain，independent of itschannel activity，and regulates podocyte cytoskeleton，cell adhesion，and motility［J］.JAmSocNephrol，2019，30（10）：1910-1924.

［7］李童，趙媛媛，楊發(fā)奮.足細(xì)胞標(biāo)志蛋白在足細(xì)胞病中的研究進(jìn)展［J］.右江醫(yī)學(xué)，2022，50（1）：72-75.

［8］張秋，張昱.張景岳治療水腫特點(diǎn)探析［J］.北京中醫(yī)藥，2010，29（10）：764-765.

［9］王艷蕾，顏旭，楊軍輝.從《血證論》氣血水理論談慢性心力衰竭的中醫(yī)辨證［J］.四川中醫(yī)，2022，40（3）：36-39.

［10］仉瑜，張洪兵，郭虹，等.姜黃的研究進(jìn)展及質(zhì)量標(biāo)志物（Q-Marker）的預(yù)測(cè)分析［J］.中草藥，2021，52（15）：4700-4710.

［11］梁春曉，王珊珊，陳淑靜，等.虎杖化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展［J］.中草藥，2022，53（4）：1264-1276.

［12］Bae HC，Song GH，Lim WS.Stigmasterol cause sovarian cancer cellapoptosis by inducing endoplasmic reticulum and mitochondrial dysfunction［J］.Pharmaceutics，2020，12.

［13］吳力超，李俊峰，張婷婷，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探討豆甾醇抗炎作用［J］.中成藥，2022，44（2）：609-615.

［14］靳英麗，屈智慧，楊盼盼，等.槲皮素對(duì)糖尿病大鼠腎臟足細(xì)胞nephrin和podocin表達(dá)的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2019，23（3）：519-522.

［15］張兆洲.基于“毒損腎絡(luò)”理論研究槲皮素對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的抑制作用［D］.蘭州：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，2016.

［16］肖志彬，賈韓學(xué)，劉小雷.β-谷甾醇藥理活性的研究現(xiàn)狀［J］.世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2015，15（8）：66-68.

［17］葉茜.中藥復(fù)方治療特發(fā)性膜性腎病的Meta分析及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究［D］.南京：南京中醫(yī)藥大學(xué)，2021.

［18］aek KS，Yi YS，Son YJ，et al.Comparison of anticancer activities of Korean Red Ginseng-derived fractions.J Ginseng Res，2017，41（3）：386-391.

［19］Park CM，Jin KS，Lee YW，et al.Luteolin and chicoric acid synergistically inhibited inflammatory responses via inactivation of PI3K-Akt pathway and impairment of NF-κB translocation in LPS stimulated RAW 264.7 cells.Eur J Pharmacol，2011，660（2-3）：454-459.

［20］Huang G，Zou B，Lv J，et al.Notoginsenoside R1 attenuates glucose-induced podocyte injury via the inhibition of apoptosis and the activation of autophagy through the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway.Int J Mol Med 2017；39（3）：559-68.

［21］Qir，Shengyy.CD2-associated protein participates in podocyt eapoptosis via PI3K/Akt signaling pathway［J］.JRecept Signal TransductRes，2016，36（3）：288-291.

［22］Li M，Guo Q，Cai H，et al.miR-218 regulates diabetic nephropathy via targeting IKK-β and modulating NK-κB-mediated inflammation.J Cell Physiol，2020，235（4）：3362-3371.

［23］Lin L，Lin H，Wang D，et al.Bone marrow mesenchymal stem cells ameliorated kidney fibrosis by attenuating TLR4/NF-κB in diabetic rats.Life Sci，2020（262）：118385.

［24］Qi MY，He YH，Cheng Y，et al.Icariin ameliorates streptozocin-induced diabetic nephropathy through suppressing the TLR4/NF-κB signal pathway.Food Funct，2021，12（3）：1241-1251.

［25］Okabe K，Yaku K，Tobe K，et al.Implications of altered NAD metabolism in metabolic disorders.J Biomed Sci，2019，26（1）：34.

［26］Rachubik P，Szrejder M，Rogacka D，et al.The TRPC6-AMPK Pathway is Involved in Insulin-Dependent Cytoskeleton Reorganization and Glucose Uptake in Cultured Rat Podocytes.Cell Physiol Biochem，2018，51（1）：393-410.

［27］王顯.芍藥苷結(jié)合VEGFR2介導(dǎo)的PI3K/AKT信號(hào)通路調(diào)節(jié)糖尿病腎病中的足細(xì)胞自噬和凋亡［D］.合肥：安徽醫(yī)科大學(xué)，2022.

［28］苑佳奇，沈曉丹，張志鳳，等.TNF-α對(duì)足細(xì)胞損傷的影響［J］.包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2021，37（11）：57-60+112.

［29］黃勇，程潔，周曄華，等.腎蘇Ⅳ對(duì)糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞、podocin及VEGF水平的影響［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2021，41（15）：3280-3285.

（收稿日期：2023-08-07）