HPV DNA、HPV E6/E7蛋白和TCT在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌篩查中的價值

[摘要]"目的"探討人乳頭瘤病毒（human"papilloma"virus，HPV）"DNA、HPV"E6/E7蛋白和液基薄層細胞學檢查（thin-prep"cytology"test，TCT）在宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical"intraepithelial"neoplasia，CIN）及宮頸癌篩查中的價值。方法"選取2021年7月至2022年6月于諸暨市人民醫(yī)院婦科接受早期宮頸癌篩查的成年女性190例為研究對象，分別進行HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白及TCT檢測，并進一步行陰道鏡活檢檢查。比較不同病變患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白和TCT對高級別病變的診斷效能。結(jié)果"CIN3及宮頸癌患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢查及三者聯(lián)合檢測的陽性率均顯著高于宮頸炎患者（Plt;0.05），宮頸癌患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢查及三者聯(lián)合檢測的陽性率均顯著高于CIN1患者（Plt;0.05）。CIN2+患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT及三者聯(lián)合檢測的陽性率顯著高于CIN1–患者。HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT三者聯(lián)合診斷高級別病變的敏感度、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為90.80%、30.10%、52.32%、79.48%。結(jié)論"HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白及TCT可作為篩查宮頸癌和癌前病變的手段，且三者聯(lián)合檢測的敏感度最高。

[關(guān)鍵詞]"HPV"DNA；HPV"E6/E7蛋白；液基薄層細胞學檢查；上皮內(nèi)瘤變；宮頸癌篩查

[中圖分類號]"R737.3""""""[文獻標識碼]"A""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.10.007

Value"of"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein"and"TCT"in"cervical"intraepithelial"neoplasia"and"cervical"cancer"screening

HE"Liqun，"ZHANG"Shuyun，"YUAN"Jing，"LYU"Yanting

Department"of"Pathology，"Zhuji"People’s"Hospital，"Zhuji"311800，"Zhejiang，"China

[Abstract]"Objective"To"investigate"the"value"of"human"papilloma"virus"（HPV）"DNA，"HPV"E6/E7"protein"and"thin-prep"cytology"test"（TCT）"in"cervical"intraepithelial"neoplasia"（CIN）"and"cervical"cancer"screening."Methods"A"total"of"190"adult"women"who"received"early"cervical"cancer"screening"in"Department"of"Gynecology，"Zhuji"People’s"Hospital"from"July"2021"to"June"2022"were"selected"as"the"study"objects."HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein"and"TCT"were"detected，"respectively，"and"further"colposcopic"biopsy"was"performed."The"diagnostic"efficacy"of"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein"and"TCT"in"patients"with"different"lesions"were"compared."Results"The"positive"rates"of"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein，"TCT"and"combined"detection"in"CIN3"and"cervical"cancer"patients"were"significantly"higher"than"those"in"cervicitis"patients"（Plt;0.05）."The"positive"rates"of"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein，"TCT"and"combined"detection"in"cervical"cancer"patients"were"significantly"higher"than"those"in"CIN1"patients"（Plt;0.05）."The"positive"rates"of"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein，"TCT"and"combined"detection"in"CIN2+"patients"were"significantly"higher"than"those"in"CIN1–"patients."The"sensitivity，"specificity，"positive"predictive"value"and"negative"predictive"value"of"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein"and"TCT"in"the"diagnosis"of"high-grade"lesions"were"90.80%，"30.10%，"52.32%"and"79.48%，"respectively."Conclusion"HPV"DNA，"HPV"E6/E7"protein"and"TCT"can"be"used"as"screening"methods"for"cervical"cancer"and"precancerous"lesions，"with"the"combination"of"the"three"being"the"most"sensitive.

[Key"words]"HPV"DNA;"HPV"E6/E7"protein;"Thin-prep"cytology"test;"Intraepithelial"neoplasia;"Cervical"cancer"screening

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一。據(jù)統(tǒng)計，中國每年因?qū)m頸癌死亡的女性患者高達3萬[1]。宮頸癌發(fā)現(xiàn)越早，治愈率和生存率越高，因此早期篩查宮頸癌并及時干預(yù)具有重要意義[2]。人乳頭瘤病毒（human"papilloma"virus，HPV）DNA是該病毒的遺傳物質(zhì)，通過檢測HPV"DNA可了解患者的HPV感染情況及其分型[3]。雖然HPV"DNA檢測有較高的敏感度，但對高級別病變特異性不高[4]。HPV"E6/E7基因是早期轉(zhuǎn)錄基因，可用于評估HPV感染程度，通過檢測患者HPV"E6/E7蛋白表達，宮頸癌的檢出率明顯提高[5]。隨著HPV感染進展為宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical"intraepithelial"neoplasia，CIN）及宮頸癌，宮頸上皮可見DNA倍體異常細胞。液基薄層細胞學檢查（thin-prep"cytology"test，TCT）采集的是患者宮頸表面脫落細胞，且因檢查人員操作失誤易造成漏診誤診[6]。早期篩查中將HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT三者聯(lián)合或可提高檢查的準確性、敏感度和特異性。

1""資料與方法

1.1""一般資料

選取2021年7月至2022年6月于諸暨市人民醫(yī)院婦科接受早期宮頸癌篩查的成年女性190例為研究對象。納入標準：①有性生活史；②有陰道分泌物增多、白帶異常、陰道出血等癥狀；③自愿接受HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測；④行陰道鏡子宮頸病理活檢者；⑤年齡18～68歲。排除標準：①患有其他惡性腫瘤；②做過2次以上TCT結(jié)果顯示為宮頸癌；③妊娠期或哺乳期女性；④有自身免疫性疾病或正在接受免疫抑制治療者；⑤不愿意配合本研究；⑥拒絕進行宮頸活檢和行陰道鏡檢查者。本研究經(jīng)諸暨市人民醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準（倫理審批號：[2023]"醫(yī)倫第（0602）號），所有受試者均知情并簽署知情同意書。

1.2""方法

1.2.1""HPV"DNA檢測""刷取患者的宮頸脫落細胞放入培養(yǎng)皿中，HPV基因擴增后，采用HPV反向點雜交法檢測HPV"DNA，使用亞能全自動核酸分子雜交儀及配套試劑進行分型檢測，共檢測16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68等高危型。任一上述分型HPV"DNA≥1pg/ml即為HPV"DNA陽性。

1.2.2""HPV"E6/E7蛋白檢測""蛋白質(zhì)印跡法檢測16、18高危型E6/E7蛋白的表達情況，借助Quantity"One"Software進行灰度值掃描和分析，當任一高危型HPV"E6或E7蛋白相對表達量≥0.1，則HPV"E6/E7蛋白結(jié)果為陽性；反之為陰性。

1.2.3""TCT檢測""被檢者取樣前3d應(yīng)避免陰道沖洗及性生活，避開經(jīng)期?；颊甙螂捉厥唬琓CT專用取材刷按順時針方向在患者宮頸口處采集宮頸脫落上皮細胞，置于保存液中，制作薄層細胞涂片，涂片固定染色完成后進行TCT檢測。診斷TCT陽性的標準：非典型鱗狀上皮細胞不除外高度鱗狀上皮內(nèi)病變、低級別鱗狀上皮內(nèi)病變、高級別鱗狀上皮內(nèi)病變及宮頸癌判定為TCT陽性。

1.2.4""三者聯(lián)合陽性""HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測任意一種陽性即為三者聯(lián)合陽性。

1.2.5""陰道鏡子宮頸病理活檢""被檢者取樣前3d應(yīng)避免陰道沖洗及性生活，避開經(jīng)期。擴陰器充分暴露子宮頸，在3、6、9、12點對疑似子宮頸內(nèi)的非正常組織進行病理活檢。病理判定標準采用宮頸上皮內(nèi)病變?nèi)壏诸惙?。慢性宮頸炎：上皮及間質(zhì)增生，無異型細胞；CIN1：上皮下1/3，輕度異型細胞，較少核分裂；CIN2：上皮下1/3～2/3，中度異型細胞，較多核分裂；CIN3：上皮下2/3至全層，重度異型細胞，核分裂象多；宮頸癌：CIN3基礎(chǔ)上癌變細胞至上皮下基底層。將CIN2及以上病變（即CIN2+，包括CIN2、CIN3和宮頸癌）定義為高級別病變，CIN1及以下病變（即CIN1–，包括宮頸炎及CIN1）定義為低級別病變。本研究以陰道鏡活檢病理報告為金標準。

1.3""統(tǒng)計學方法

采用SPSS"20.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗。統(tǒng)計分析HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢查的敏感度、特異性和陽性預(yù)測值。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2""結(jié)果

2.1""不同病變患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測及三者聯(lián)合檢測的陽性率比較

CIN3及宮頸癌患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測及三者聯(lián)合檢測的陽性率均顯著高于宮頸炎患者（Plt;0.05），宮頸癌患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測及三者聯(lián)合檢測的陽性率均顯著高于CIN1患者（Plt;0.05），見表1。

2.2""CIN2+和CIN1-患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測及三者聯(lián)合檢測的陽性結(jié)果比較

CIN2+患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測及三者聯(lián)合檢測的陽性例數(shù)均顯著高于CIN1–患者，見表2。

2.3""HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT及三者聯(lián)合對高級別病變的診斷價值

HPV"DNA檢測診斷高級別病變的敏感度、特異性分別為91.95%、39.81%；HPV"E6/E7蛋白分別為77.01%、59.22%；TCT分別為67.81%、65.04%；三者聯(lián)合檢測分別為90.80%、30.10%，見表3。

3""討論

宮頸癌的發(fā)生與HPV長期反復(fù)感染密切相關(guān)[7-10]。宮頸癌的發(fā)生與多種因素息息相關(guān)，如HPV在人體組織內(nèi)的病毒載量、HPV分型及活躍度[11-12]。宮頸癌嚴重危害女性的生命健康，合理的篩查方法有利于及時檢出高?；颊?，早發(fā)現(xiàn)、早治療，改善患者預(yù)后，延長患者的生存期。目前，臨床上篩查宮頸癌的方法很多，但單一檢查存在不足，漏診或過度治療的情況時有發(fā)生。聯(lián)合幾種篩查方法可提高準確性，降低漏診率。宮頸活檢是診斷子宮頸癌及癌前病變的金標準，但其為有創(chuàng)操作且檢查費用較高[13-14]。

HPV感染是宮頸癌發(fā)病的必要條件[15]。世界衛(wèi)生組織指南建議將HPV"DNA檢測作為預(yù)防宮頸癌的主要篩查方法。與細胞學檢查相比，基于HPV的宮頸癌篩查具有較高的臨床敏感度和較高的陰性預(yù)測值，但其臨床特異性較低[16-17]。HPV篩查的臨床特異性較低可導(dǎo)致不必要的陰道鏡檢查轉(zhuǎn)診，因此HPV陽性女性目前通過子宮頸涂片檢查進行分類，只有那些確診宮頸細胞學異常的女性才接受陰道鏡檢查。在HPV陽性女性分診中使用巴氏涂片或TCT可提高特異性，但其性能取決于操作者，且該方法不易重復(fù)和標準化。此外，宮頸細胞學檢查不能對自行采集的樣本進行檢測，而這些樣本越來越多地被引入篩查項目中，以提高女性的參與度。

高危型HPV感染被認為是宮頸癌發(fā)生的必要但非充分條件。與宮頸細胞學相比，HPV"DNA檢測可提高臨床敏感度，但臨床特異性較低，可預(yù)測女性患宮頸癌的風險增加。目前，人們正在大力尋找具有更高特異性的生物標志物，能夠?qū)⒍虝盒?、臨床上無關(guān)的高危HPV感染女性與有較高風險進展為宮頸癌的女性區(qū)分開來。HPV"E6/E7蛋白表達是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)展的重要因素，HPV"E6/E7蛋白檢測作為早期篩查宮頸癌的一種新技術(shù)，能有效檢測出宮頸癌的病變程度，但E6/E7蛋白的表達水平受多種因素影響，如患者的免疫水平及E6/E7癌基因的表達水平。在檢測過程中能提高一定的篩查效率，去除一些假陽性結(jié)果[18]。但HPV"E6/E7蛋白檢測呈陽性是一個定性結(jié)果，對其定量的最佳診斷還存在爭議。目前臨床上宮頸癌篩查多采用TCT檢測，但該方法結(jié)果受客觀因素影響大，如涂片質(zhì)量、閱片、取標本技術(shù)及診斷醫(yī)生水平等，假陰性率高、準確率底，有漏診可能[19]。

本研究結(jié)果顯示，宮頸癌患者的HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白、TCT檢測陽性率均顯著高于宮頸炎和CIN1患者，究其原因早期宮頸病變中病毒處于相對靜默期，而CIN1可自行消退，因此其陽性率較低。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單一檢測方法在高級別病變篩查中具有一定的價值，但HPV"DNA檢測比HPV"E6/E7蛋白、TCT的特異性高，而敏感度較低，三者聯(lián)合可提高敏感度，既提高對不同級別宮頸病變的辨別能力，同時也降低漏診風險，可有效避免對疾病的誤判，減輕患者的心理負擔，但三者聯(lián)合檢測可增加相應(yīng)的費用。

綜上所述，HPV"DNA、HPV"E6/E7蛋白及TCT可作為篩查宮頸癌和癌前病變的手段，聯(lián)合檢測可提高宮頸病變篩查的敏感度。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2023–05–29）

（修回日期：2024–03–07）