白薇及其偽品的理化鑒定

李欣培 李 潔 崔立娟 張珂璠 王焜佳 徐凌川

山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355

藥用白薇為蘿藦科鵝絨藤屬植物直立白薇C.atratumBunge.和蔓生白薇(《中國(guó)植物志》原植物名為變色白前)C.versicolorBunge.的干燥根及根莖。味苦、咸，具有清熱涼血、利尿通淋、解毒療瘡等功效[1]。自《神農(nóng)本草經(jīng)》記載起，迄今已有2000多年的用藥歷史，現(xiàn)仍為臨床常用藥，可用于治療各種炎癥?！睹耖g常用草藥匯編》記載，白薇可以“清肺熱，治吐血及老年咳嗽”。目前市場(chǎng)上白薇的混淆品很多，常見的有大理白前、合掌消、老瓜頭、徐長(zhǎng)卿等。大理白前C.forrestiiSchlechter為同科屬植物屬植物，其根具有清熱散邪、利尿、生肌止痛等功效，但其醇提物具有一定的細(xì)胞毒性[2]。同科屬植物合掌消C.amplexicaule(Sieb.et Zucc.)Hemsl.全草可祛風(fēng)、消腫、行氣；根有行氣活血、解毒的功效[3]。徐長(zhǎng)卿C.paniculatum(Bunge)Kitagawa也為其同科屬的中藥，有祛風(fēng)化濕，止痛等功效。同科屬中藥老瓜頭C.komaroviiAl.Iljinski.具有活血鎮(zhèn)痛的作用[4]，但其全株有毒，應(yīng)慎用。潮風(fēng)草C.ascyrifolium具有清熱涼血、利尿通淋、解毒療瘡等功效，有研究[5-6]表明其含有C21甾類，有很好的抗炎活性及免疫抑制作用。白薇及其偽品的藥理作用、功效等都有很大的差別，若不慎混用，會(huì)造成嚴(yán)重的臨床問(wèn)題。

目前，白薇常用的鑒定方法是性狀鑒定和顯微鑒定[7-9]，何芳等[10]對(duì)白薇及5種混淆品的微性狀及顯微鑒別進(jìn)行了詳細(xì)的研究與分析。但對(duì)于藥材粉末通過(guò)肉眼觀察難以鑒別，在顯微觀察時(shí)有些特征結(jié)構(gòu)很難找到，而理化鑒定方法就可用于輔助鑒定。理化鑒定也是中藥藥材鑒別的常用方法[11]，但少有研究在鑒定白薇及其偽品時(shí)會(huì)使用理化鑒定法。蘇永林[12]在鑒定白薇、徐長(zhǎng)卿和白前這三種藥材時(shí)，采用性狀鑒定的同時(shí)，輔以性狀鑒定將其區(qū)分。

本實(shí)驗(yàn)找了白薇常見的5種偽品和兩種不同基原的白薇進(jìn)行鑒定，采用化學(xué)定性法和薄層色譜法2種方法對(duì)其進(jìn)行鑒定?；瘜W(xué)定性法采用醋酐-濃硫酸(Liebermann-Burchard)反應(yīng)[13]，通過(guò)其含有的甾體皂苷[14]與醋酸酐的反應(yīng)，與偽品進(jìn)行鑒別。本實(shí)驗(yàn)旨在從理化鑒別方向?qū)ふ诣b定白薇及其混淆品比較簡(jiǎn)便快速的方法，此外薄層色譜法還可定性定量的反應(yīng)中藥的鑒別特征，可謂其定量鑒定提供參考，為白薇的準(zhǔn)確、快速鑒別及安全用藥提供依據(jù)，把控質(zhì)量的“大門”，對(duì)于中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展具有重要作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 實(shí)驗(yàn)所用白薇(直立白薇、蔓生白薇)及偽品(大理白前、合掌消、老瓜頭、徐長(zhǎng)卿、潮風(fēng)草)的樣品經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)徐凌川教授鑒定。樣品編號(hào)及來(lái)源信息見表1。白薇對(duì)照品(121518-201604，SXPB-3Y5X)購(gòu)買自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

表1 樣品來(lái)源信息

1.2 試劑 乙醇(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；甲醇(天津市富宇精細(xì)化工有限公司)；甲苯(天津市富宇精細(xì)化工有限公司)；二氯甲烷(天津市富宇精細(xì)化工有限公司)；乙酸乙酯(天津市大茂化學(xué)試劑廠)；乙酸(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；濃硫酸(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；乙酸酐(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。以上試劑皆為分析純。

1.3 儀器 超KQ-2508聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；抽濾裝置(布氏燒瓶、布氏漏斗)；移液槍(100-1000 μL，大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司)；H-35循環(huán)水冷卻器(萊伯泰科)；薄層色譜硅膠G板(青島海洋化工有限公司)；DZW-D-1電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)；FA12048電子天平(上海佑科儀器儀表有限公司)；WFH-203C四用紫外分析儀(上海馳唐實(shí)業(yè)有限公司)；毛細(xì)管(0.5 mm業(yè)有限公司)，華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠)；GZX-9023MBE電熱鼓風(fēng)干燥機(jī)(上海博訊)。

1.4 方法

1.4.1 化學(xué)定性法 利用皂苷顯色反應(yīng)的原理，將材料分為7組，編號(hào)1～7分別為：直立白薇、蔓生白薇、大理白前、合掌消、老瓜頭、徐長(zhǎng)卿、潮風(fēng)草。各取藥材粉末0.5 g，加入配制的70%的乙醇溶液，超聲30 min，冷卻后抽濾，得到濾液。取濾液0.5 mL在水浴鍋上蒸干，蒸干后的殘?jiān)屑尤? mL的醋酐溶解，并加入1滴濃硫酸，分時(shí)間段觀察顏色變化。觀察提取液顏色、蒸干加液后立即顯色、揮發(fā)15 min、30 min以及揮干后樣品呈色情況，并拍照記錄。

1.4.2 薄層色譜法 將藥品編號(hào)1～8為：直立白薇、蔓生白薇、大理白前、合掌消、徐長(zhǎng)卿、老瓜頭、白薇對(duì)照品、潮風(fēng)草。7號(hào)為白薇對(duì)照品，起標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照的作用。8號(hào)為潮風(fēng)草，看其是否為四種偽品中的一種。參照文豪等[15]的白薇薄層鑒定的改進(jìn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，改變展開劑。

供試品制備：取1 g藥材粉末，加入30 mL甲醇，超聲處理20 min，放冷，過(guò)濾，蒸干濾液，取2 mL甲醇超聲溶解殘?jiān)瞥蓸悠啡芤?。?duì)照品制備方法同上。依據(jù)薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)[1]，提前將薄層板置于110 烘箱內(nèi)活化30 min，吸取上述兩種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上。甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸(15∶5∶7∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，均勻噴以硫酸乙醇溶液(1→10)，105 ℃烘箱加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。在此期間要注意觀察，防止薄層板糊化。分別在日光下和365 nm紫外下觀察斑點(diǎn)的顏色、位置。

2 結(jié)果

2.1 化學(xué)定性法 白薇及其偽品的理化鑒定的顯色變化情況如下，超聲抽濾后獲得的提取液顏色如圖1所示；蒸干后加入醋酐和濃硫酸立即顯色如圖2所示；放置15 min后顯色如圖3所示；放置30 min后顯色如圖4所示；溶液揮干后顯色如圖5所示。

1.直立白薇；2.蔓生白薇；3.大理白前；4.合掌消；5.老瓜頭；6.徐長(zhǎng)卿；7.潮風(fēng)草

1.直立白薇；2.蔓生白薇；3.大理白前；4.合掌消；5.老瓜頭；6.徐長(zhǎng)卿；7.潮風(fēng)草

1.直立白薇；2.蔓生白薇；3.大理白前；4.合掌消；5.老瓜頭；6.徐長(zhǎng)卿；7.潮風(fēng)草

1.直立白薇；2.蔓生白薇；3.大理白前；4.合掌消；5.老瓜頭；6.徐長(zhǎng)卿；7.潮風(fēng)草

1.直立白薇；2.蔓生白薇；3.大理白前；4.合掌消；5.老瓜頭；6.徐長(zhǎng)卿；7.潮風(fēng)草

由圖1、圖2、圖3、圖4和圖5可知，未加試劑前提取液的顏色相似，但大理白前顏色呈淡紫紅色，可明顯鑒別出。觀察加入醋酐和濃硫酸后溶液的變化，以及放置后隨著溶劑揮發(fā)，溶液顏色也逐漸發(fā)生改變。提取液加入溶劑后溶液顏色發(fā)生變化。直立白薇提取液由深棕紅色到溶劑揮干后變成深棕色，揮干后顏色加深；蔓生白薇的提取液由紫紅色，放置揮發(fā)30 min后變成墨綠色，其中甾體皂苷含量可能較高；大理白前提取液加入試劑后由淡紫色變成了淺棕紅色，放置揮發(fā)30 min后變成黃綠色，揮干后變成了棕黃色；合掌消提取液加入試劑后，溶液顏色由變紅加深變?yōu)樽虾谏軇]干后變成了橄欖色；老瓜頭提取液加入試劑后變成了淺橙黃色，隨著試劑的揮干，顏色加深；徐長(zhǎng)卿提取液的顏色變化與老瓜頭的有些相似；潮風(fēng)草提取液加入試劑后呈深棕色，放置揮發(fā)30 min后變成深咖布色，揮干后變成棕黃色?？梢娺@些藥材在容積揮干后基本呈現(xiàn)深棕色或棕黃色。結(jié)果見表2。

表2 白薇及其偽品化學(xué)定性反應(yīng)的顯色變化

因此，利用化學(xué)定性法的醋酐-濃硫酸反應(yīng)的顏色變化可以將白薇及其5種偽品區(qū)別開，因白薇中含有甾體皂苷，顏色偏綠。此外藥材的質(zhì)量、皂苷的含量等也會(huì)影響顏色的深淺及變化。

2.2 薄層色譜 白薇及其偽品的薄層色譜圖如圖6所示?？梢?，日光下和紫外365 nm下樣品的斑點(diǎn)情況。

日光下 365 nm紫外下

由圖6可知，對(duì)照品(7號(hào)樣)能清晰地觀察到兩個(gè)斑點(diǎn)，在Rf=0.56和Rf=0.75兩處有明顯的紫紅色熒光斑點(diǎn)。直立白薇(1號(hào)樣)和蔓生白薇(2號(hào)樣)與對(duì)照品在同樣的位置有相同的熒光斑點(diǎn)。大理白前(3號(hào)樣)在初始位置有明顯的熒光斑點(diǎn)；合掌消(4號(hào)樣)在Rf=0.25處有熒光斑點(diǎn)，Rf=0.56處有深棕色的斑點(diǎn)；徐長(zhǎng)卿(5號(hào)樣)初始位置(Rf=0.25)有熒光斑點(diǎn)，Rf=0.56處無(wú)斑點(diǎn)；老瓜頭(6號(hào)樣)整條色譜帶呈藍(lán)色熒光，且在初始位置(Rf=0.25)有明顯的熒光斑點(diǎn)；潮風(fēng)草(8號(hào)樣)譜帶與6號(hào)樣類似。譜帶總結(jié)見表3。

表3 白薇及其偽品薄層色譜的365 nm紫外下譜帶情況

3 討論

白薇及其5種偽品可以通過(guò)理化鑒定的顯色現(xiàn)象及譜帶特征等進(jìn)行區(qū)分。本實(shí)驗(yàn)利用醋酐-濃硫酸反應(yīng)和薄層色譜法，對(duì)白薇及其5種混淆品進(jìn)行鑒定，明確正品白薇的皂苷反應(yīng)現(xiàn)象及薄層譜帶特性。較傳統(tǒng)的顯微鑒別和性狀鑒別，理化鑒定方法可以更直觀地反映白薇與其偽品的差異，還可以應(yīng)對(duì)一些白薇粉末或藥材難以直觀鑒別的情況，也為白薇藥材的拓展應(yīng)用提供基礎(chǔ)。

由結(jié)果可知，白薇與5種混淆品的皂苷呈色反應(yīng)差異明顯，可知正品白薇中甾體皂苷含量較高，顏色反應(yīng)偏綠色。但因其放置時(shí)間或藥材質(zhì)量有不同，顏色可能不甚明顯，但蔓生白薇皂苷反應(yīng)現(xiàn)象明顯，可與其他偽品區(qū)分開。樣品薄層色譜圖的斑點(diǎn)顏色及位置也有明顯的差異，直立白薇和蔓生白薇在Rf=0.56均有紫紅色斑點(diǎn)，Rf=0.75處也均有熒光斑點(diǎn)，也可用于鑒定其余偽品。

此外，白薇的兩個(gè)基原植物——蔓生白薇[16]和直立白薇[17]，其顯色反應(yīng)及薄層色譜也不全然相同。在化學(xué)定性反應(yīng)中，直立白薇由深棕紅色變成深棕色，蔓生白薇由紫紅色變成墨綠色，顯然，蔓生白薇中甾體皂苷的含量可能更高一些；在薄層色譜中，直立白薇和蔓生白薇在同樣的位置有相同的熒光斑點(diǎn)，但蔓生白薇Rf=0.56處的斑點(diǎn)略顯棕色，且在Rf=0.42處有一不甚明顯的熒光亮段，通過(guò)這一現(xiàn)象在鑒別不同基原白薇時(shí)可輔助條件，將兩者甄別。

本實(shí)驗(yàn)為白薇鑒定建立了兩種穩(wěn)定、可靠、簡(jiǎn)單易行的理化鑒定方法，豐富了白薇偽品鑒定方法。隨著科學(xué)技術(shù)進(jìn)步，也涌現(xiàn)出許多新型的鑒定技術(shù)，例如新型科學(xué)技術(shù)的DNA條形碼鑒定方法、分子鑒定方法、現(xiàn)代分析技術(shù)等，準(zhǔn)確度更高，擴(kuò)大了檢測(cè)樣本范圍；同時(shí)樣本部分受損也不會(huì)影響識(shí)別結(jié)果，但因其價(jià)格昂貴等特點(diǎn)并不常用。為確保中藥藥用的安全性和有效性，促進(jìn)中醫(yī)藥事業(yè)的磅礴發(fā)展，未來(lái)還需對(duì)中藥鑒定技術(shù)進(jìn)行更深入地研究。開發(fā)新型鑒定技術(shù)和鑒定方法，對(duì)中藥品種的真實(shí)性、純度、品質(zhì)優(yōu)良等加以鑒定，為中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展保駕護(hù)航。