UV法測定紫草中羥基萘醌總色素含量的不確定度評定及應(yīng)用

關(guān)卓明 何敬銘 林泳儀 李礪

【摘要】對采用紫外-可見分光光度（UV）法測定紫草中羥基萘醌總色素含量全過程進(jìn)行分析，建立數(shù)學(xué)模型，確定影響總色素測定不確定度的因素并對其進(jìn)行評估。結(jié)果表明，總色素含量測定的擴(kuò)展不確定度為0.06%，測定結(jié)果表示為（1.69±0.06）%（k=2），能力驗(yàn)證結(jié)果為滿意。

【關(guān)鍵詞】紫草；羥基萘醌；分光光度法；能力驗(yàn)證；不確定度

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.01.009

Determination of Total Hydroxynaphthoquinone Pigment Content in Purple Grass by Spectrophotometry Evaluation of Uncertainty and Application in Capability Verification

GUAN Zhuoming， HE Jingming， LIN Yongyi， LI Li*（Sinopharm group fengliaoxing〔Foshan〕herbal medicine decoction pieces Co.， Ltd.， Foshan 528000， China）

Abstract： To verify the ability of UV spectrophotometry to determine the total content of hydroxynaphthoquinone pigments in purple grass， establish a mathematical model， determine the factors that affect uncertainty， and evaluate each factor. Results showed that the expanded uncertainty of the total pigment content determination was 0.06%， and the determination result was expressed as （1.69±0.06）% （k=2）， indicating a satisfactory capability validation result.

Keywords： hydroxyanaphthoquinone； spectrophotometry； capability verification； uncertainty

紫草的使用歷史非常悠久?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中記載，紫草性寒，具有活血和清熱解毒的功效。現(xiàn)代研究表明，紫草含有多種活性成分，包含羥基萘醌類、三萜類、生物堿類等有效物質(zhì)。其中，羥基萘醌類是紫草中最重要、最具代表性的活性有效成分，具有抗炎、抗菌、抗腫瘤等藥理活性。

《中華人民共和國藥典（2020年版）》收錄了以UV法測定羥基萘醌總色素的含量，以左旋紫草素的吸光系數(shù)進(jìn)行計(jì)算。使用UV法測定羥基萘醌總色素的含量會受到多種因素的影響，如儀器精度、實(shí)驗(yàn)員的主觀因素、操作實(shí)驗(yàn)條件和玻璃量具的校準(zhǔn)等。測量得到的總含量與其真實(shí)值之間存在偏差，要對測量的羥基萘醌總色素含量的可靠性進(jìn)行客觀評價(jià)，這就需要引進(jìn)測量不確定度的概念。

實(shí)驗(yàn)室檢測方法的能力驗(yàn)證是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制內(nèi)容之一。能力驗(yàn)證能夠綜合考察實(shí)驗(yàn)室的檢測能力，是實(shí)驗(yàn)室管理非常重要的手段[1]。本研究測量了參加能力比對驗(yàn)證的紫草試樣中羥基萘醌總色素的含量，同時(shí)對測量的不確定度進(jìn)行評定，找到影響不確定度的因素，對不確定度貢獻(xiàn)率進(jìn)行分析。建立了羥基萘醌總色素測定能力驗(yàn)證的測量不確定度評定方法，為紫草中羥基萘醌總色素含量的測定方法改善提供參考。

1.1儀器與試劑

UV計(jì)（北京普析TU-1901）；電子天平（上海舜宇恒平FA2104），25 mL和100 mL量瓶、5 mL移液管；紫草（能力驗(yàn)證樣品）；乙醇（分析純）。

1.2測量方法

《中華人民共和國藥典（2020年版）：一部》中的紫草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定進(jìn)行檢測。為減少測量誤差，使檢測結(jié)果準(zhǔn)確性更加可靠，本研究同步進(jìn)行了含量測定不確定度的分析。

2.1不確定度數(shù)學(xué)模型

2.2不確定度來源分析

采用UV法測定羥基萘醌總色素含量的不確定度來源主要有：方法本身引入不確定度，天平稱量不確定度，體積測量不確定度，UV計(jì)引入不確定度。體積測量不確定度主要有兩個(gè)來源：一是，測量器具最大允許誤差引起不確定度；二是，實(shí)驗(yàn)室溫度變化引起體積變化不確定度[2]。

經(jīng)分析確定，影響本試驗(yàn)紫草含量測定結(jié)果的不確定度因素主要有樣品稱量、樣品稀釋和儀器測量等。

2.3分量不確定度的測量

2.3.1方法精密度相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

測量重復(fù)性的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（ P ）。測定10份供試品中羥基萘醌總色素的含量，具體結(jié)果見表1。采用A類評定。

2.4計(jì)算合成相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（ X ）

測量不確定度各分量結(jié)果見表2。

通過紫草中羥基萘醌總色素含量能力驗(yàn)證不確定度評定可知，采用UV法測定總色素含量時(shí)，主要不確定因素為UV計(jì)的吸光度測定和溶液稀釋定容。由此可知，對UV計(jì)進(jìn)行定期校準(zhǔn)維護(hù)和提高操作員對儀器熟練程度是降低吸光度引起的不確定度的兩個(gè)主要方法。體積越小的玻璃量器引起不確定度越大，因而盡可能使用A級大容量容量瓶和移液管。通過對紫草中羥基萘醌總色素含量測定的不確定度評定，詳細(xì)分析計(jì)算各項(xiàng)不確定度來源，為提高測量結(jié)果的準(zhǔn)確性提供了依據(jù)。實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證結(jié)果得到了滿意的答復(fù)。

【參考文獻(xiàn)】

[1]李向威.檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)能力驗(yàn)證實(shí)施探討[J].中國檢驗(yàn)檢測，2023，31（1）：95-96.

[2]趙富華，楊星，韓寧寧，等.紫外-可見分光光度法測定甲磺酸達(dá)氟沙星粉含量的不確定度評定[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2022，41（5）：53-56.

【作者簡介】

關(guān)卓明，男，1987年出生，中級中藥師，學(xué)士，研究方向?yàn)樗幤?、食品安全檢測。

通訊作者：李礪，女，1977年出生，副主任藥師，研究方向?yàn)橹兴幖笆称窓z驗(yàn)。電子郵箱：toby319@126.com。

（編輯：侯睿琪）