在當(dāng)前豬圓環(huán)病毒2型流行病學(xué)背景下重新審視豬圓環(huán)病毒病診斷標(biāo)準(zhǔn)

摘 要：目前，人們對豬圓環(huán)病毒2型（porcine circovirus 2，PCV2）引起的豬圓環(huán)病毒?。╬orcine circovirus diseases，PCVDs）的認(rèn)識是，該病包括PCV2的亞臨床感染（porcine circovirus 2 subclinical infection，PCV2-SI）、全身性疾?。≒CV2 systemic diseases，PCV2-SD）和繁殖障礙（PCV2 reproductive diseases，PCV2-RD）以及豬皮炎腎病綜合征（porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS）。多年來，確診這些疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)沒有變，因此，由臨床癥狀、病變和病變組織中病毒的檢測組成的三要素仍然是PCV2-SD和PCV2-RD確診的標(biāo)志。相比之下，正常情況下不對PCV2-SI進(jìn)行診斷，因?yàn)檫@種疾病被默認(rèn)通過接種疫苗就能得到控制。PDNS可以通過大體病變和組織病理學(xué)檢查進(jìn)行診斷，檢測PCV2被認(rèn)為不是該病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。在過去十年中，分子生物學(xué)方法作為PCVDs診斷的替代方法已得到廣泛使用，不過這些技術(shù)被視為監(jiān)測工具，而不是診斷工具。多年來，PCV2的流行病學(xué)發(fā)生了很大的變化，由于大規(guī)模接種疫苗，豬群的感染壓下降，豬群的整體免疫力降低。因此，近來來對PCVDs診斷的需求有所增加，尤其是接種疫苗后仍出現(xiàn)PCV2-SD癥狀的病例。本綜述的目的是更新有關(guān)PCVDs診斷標(biāo)準(zhǔn)，并在PCV2感染的不同流行病學(xué)情況下，將分子生物學(xué)方法應(yīng)用于這些疾病的整體診斷中。

關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型；豬圓環(huán)病毒??；臨床癥狀；病理學(xué)；診斷；流行病學(xué)

中圖分類號：S816.8 " 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1001-0769（2024）03-0001-09

10年前，Segalés等（2012）發(fā)表了一篇關(guān)于豬圓環(huán)病毒2型（porcine circovirus 2，PCV2）感染的臨床癥狀、組織病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)室診斷的綜述文章，試圖統(tǒng)一現(xiàn)有的診斷標(biāo)準(zhǔn)，建立對其感染結(jié)局的正確群體診斷技術(shù)。當(dāng)時，在全球各地開始大規(guī)模接種預(yù)防PCV2感染的疫苗（下文簡稱“PCV2疫苗”）的短短幾年后，人們發(fā)現(xiàn)PCV2亞臨床感染（porcine circovirus 2 subclinical infection，PCV2-SI）不僅是這種病毒感染常見的表現(xiàn)形式，也是一種昂貴的形式。從那時起，養(yǎng)豬業(yè)開始考慮了10多年來接種PCV2疫苗背后的成功案例，以至于很難想象在不接種這種病原體疫苗的情況下生產(chǎn)豬。

除了對仔豬接種PCV2疫苗所產(chǎn)生的良好效果外，對該年齡段的豬進(jìn)行免疫接種的事實(shí)意味著改變了這種病毒感染的流行病學(xué)。斷奶時系統(tǒng)性地接種疫苗意味著顯著降低了整個豬群的感染壓，一些批次的豬群在屠宰年齡時血清反應(yīng)幾乎為陰性，或只有少量豬發(fā)生血清轉(zhuǎn)換。因此，面對現(xiàn)有PCV2感染流行病學(xué)的變化，重要的是必須使診斷需求適應(yīng)新情況。

考慮到多種情況會導(dǎo)致豬消瘦，出現(xiàn)呼吸道或消化道癥狀，以及產(chǎn)量下降，診斷豬圓環(huán)病毒?。╬orcine circovirus diseases，PCVDs）并評估其對豬群生產(chǎn)性能的影響可能與10年前一樣重要，甚至比10年前更重要。因此，本文的目的是更新確診PCV2感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并討論在大規(guī)模接種疫苗的養(yǎng)豬業(yè)中不同流行病學(xué)情景下的診斷線索。

1" PCV2感染結(jié)果及其診斷

由PCVDs引起的大體病變和顯微病變已有報(bào)道。事實(shí)上，這些疾病的病理結(jié)果與最初報(bào)道的情況并無差異。但需要強(qiáng)調(diào)的是，亞臨床感染與臨床感染的主要區(qū)別是病變的嚴(yán)重程度。通常PCV2亞臨床感染沒有肉眼可見的病變，沒有或有輕微的顯微病變，但臨床感染[PCV2全身性疾?。≒CV2 systemic diseases，PCV2-SD）、PCV2-SD和PCV2繁殖障礙（PCV2 reproductive diseases，PCV2-RD）]的特征是受感染組織（斷奶仔豬的淋巴組織和胎兒的心臟）出現(xiàn)中等至嚴(yán)重的病變。此外，血清和組織中的病毒載量通常與病變的嚴(yán)重程度相關(guān)，病變越嚴(yán)重，PCV2含量越高。最近，Unterweger等（2021）指出，發(fā)病豬出現(xiàn)高水平病毒載量和繁殖問題，但沒有觀察到心肌炎，而心肌炎是胎兒PCV2-RD的標(biāo)志性病變。其他研究也一致發(fā)現(xiàn)，這種病變與心臟組織中高水平PCV2含量有關(guān)。

2" PCV2感染結(jié)局及其診斷

表1概述了目前公認(rèn)的PCVDs及其主要臨床癥狀和獨(dú)特的診斷標(biāo)準(zhǔn)?？偟膩碚f，表1中所示的PCVDs的臨床癥狀多年來沒有變化，并在其他地方進(jìn)行了說明。

在大多數(shù)教科書和綜述文章中，PCV2-SD仍被認(rèn)為是一種新興疾病。1991年將其描述為斷奶后多系統(tǒng)衰弱綜合征（postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS），說明該病30多年前就已出現(xiàn)。此外，1962年和1985年豬PCV2感染和PCV2-SD診斷的證據(jù)已得到了回顧性證實(shí)。因此，沒有必要再將PCVDs視為新出現(xiàn)的疾病，而應(yīng)視為地方病。PCVDs對養(yǎng)豬生產(chǎn)的影響取決于PCV2的流行病學(xué)和免疫豬群的健康狀態(tài)。此外，接種過PCV2-SD疫苗的豬偶爾會被診斷出PCV2-SD，這一事實(shí)提醒人們應(yīng)注意該疾病的多因素致病性，以及在豬場中消除這些誘發(fā)因素的必要性。

斷奶仔豬中發(fā)現(xiàn)的PCV2-SI與無明顯臨床疾病的豬場中仔豬接種PCV2疫苗有關(guān)。這一效應(yīng)促使疫苗在世界各地廣泛使用，而與臨床狀況無關(guān)。當(dāng)時，這也是PCV2感染診斷被認(rèn)為不再需要作為決定是否接種疫苗的決策過程的一部分的原因。這種原理與疫苗接種來預(yù)防PCV2-SD的巨大成果相吻合。

傳統(tǒng)上，PCV2-RD的出現(xiàn)頻率被認(rèn)為很低或非常低，主要是由于經(jīng)產(chǎn)母豬層面上現(xiàn)有的群體免疫。然而，通過PCR檢測發(fā)現(xiàn)，宮內(nèi)感染的數(shù)量可能變化很大（取決于豬場）。此外，盡管生殖系統(tǒng)缺乏臨床癥狀，但在某種情況下，胎兒或新生仔豬感染的證據(jù)可能相當(dāng)有說服力。雖然PCV2-SI對斷奶仔豬的影響是明確的且可測量的，但沒有關(guān)于生殖系統(tǒng)亞臨床感染的可靠數(shù)據(jù)。一些研究試圖在生殖系統(tǒng)沒有明顯臨床癥狀的豬場中確定這種宮內(nèi)感染的影響，但尚未充分記錄到明確、結(jié)論性和可重復(fù)的影響。因此，PCV2亞臨床宮內(nèi)感染的影響還有待闡明。

豬皮炎腎病綜合征（porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS）仍被認(rèn)為是PCVDs的一種臨床表現(xiàn)。然而，自PDNS首次被發(fā)現(xiàn)至今已有30年，提出其與PCV2之間的關(guān)聯(lián)也有20年，但至今尚未確定病因。PCV2與PDNS相關(guān)的證據(jù)具有很強(qiáng)的確定性，但只是間接證據(jù)。在大規(guī)模接種PCV2疫苗的同時，全球的病例數(shù)突然減少，這可能是PDNS與這種病毒感染的密切聯(lián)系。盡管有人聲稱通過試驗(yàn)重現(xiàn)了豬托克特諾病毒（又稱“豬細(xì)環(huán)病毒”；Torque teno sus virus 1a，TTSuV1a），加上豬繁殖和呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRSV）和豬圓環(huán)病毒3（PCV3）的感染，但這些描述在大體病變和顯微病變層面上都不符合PDNS最初的報(bào)告。要注意的是，在過去20年中，有人提出了一些與PCV2相關(guān)的特殊病癥，如PCV2-肺疾病（PCV2-lung disease，PCV2-LD）、PCV2-腸疾?。≒CV2-enteric disease，PCV2-ED）和急性肺水腫（acute pulmonary edema，APE），本綜述未將這些疾病考慮在內(nèi)。隨后，Tico等（2013）和Baro等（2015）提出PCV2-LD和PCV2-ED是PCV2-SD的一部分，因?yàn)樗鼈兣c全身感染診斷標(biāo)準(zhǔn)沒有顯著偏差，并且APE作為一種單一、未進(jìn)一步描述的疾病持續(xù)存在。

3" PCV2感染的診斷技術(shù)

3.1 PCVDs的診斷標(biāo)準(zhǔn)

對PCVDs的確診不能排除其他病毒、細(xì)菌、寄生蟲或真菌的參與，從而導(dǎo)致臨床癥狀的惡化。因此，在懷疑PCVDs之前，明智的做法是嘗試建立一個全面綜合的診斷，評估臨床病例中涉及的不同病因和風(fēng)險(xiǎn)因素。值得提醒的是，文獻(xiàn)記錄的嚴(yán)重的PCVDs病例同時涉及多種病原體，尤其是PRRSV。

基于上述引發(fā)PCVDs的多因素致病原因，重要的是建立可靠、精確和明確的診斷標(biāo)準(zhǔn)來確診這些疾病，同時假設(shè)臨床癥狀可能并不完全歸因于PCV2。Segalés（2012）已對這些診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了廣泛的介紹和總結(jié)?？傊?，應(yīng)考慮三個步驟：" "（1）臨床和大體病理表現(xiàn)，在PCV2-SD的情況下，也與符合所謂的“群體病例定義”的適當(dāng)流行病學(xué)表現(xiàn)相關(guān)；（2）發(fā)病豬的靶組織出現(xiàn)特定的中等水平或嚴(yán)重的組織病理學(xué)變化，PCV2-SD的靶組織為淋巴組織，PCV2-RD的為心臟，PDNS的為血管/腎小球；（3）這些靶組織含有中高水平的PCV2。目前，第三條診斷標(biāo)準(zhǔn)不適用于PDNS，當(dāng)感染PDNS時，PCV2的檢出水平往往較低。通常采用組織學(xué)病變與病毒存在關(guān)聯(lián)的技術(shù)，如免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）法或原位雜交（in situ hybridization，ISH）法，檢測組織中的PCV2。

中等水平至高度嚴(yán)重的病變和中等至高水平病毒抗原或基因組的檢測（分別采用IHC法和ISH法），并非缺乏主觀解釋。此外，多年來實(shí)際的組織病理學(xué)診斷工作向我們展示了“意想不到”的組合，其中明顯嚴(yán)重的病變卻伴有少量PCV2，或輕微的淋巴組織病變卻攜帶大量的病毒。然而，從全球來看，這些都是例外情況，而不是規(guī)律。對這些罕見病例沒有合理的解釋，但它們可能是由于感染時間、豬的免疫狀態(tài)和遺傳背景，或其他未知個體因素的特定組合造成的。

綜上所述，上述診斷標(biāo)準(zhǔn)仍然有效，特別是當(dāng)診斷方法包括以下內(nèi)容時：（1）PCVDs樣本； （2）采樣豬處于正確的臨床時機(jī)（發(fā)病豬從急性到亞急性的演變，而不是慢性發(fā)病豬）；（3）使用多頭豬而不是單頭豬或單個樣本進(jìn)行診斷嘗試。

3.2 PCR方法學(xué)的診斷價(jià)值

PCR是目前應(yīng)用廣泛的PCV2基因組檢測技術(shù)之一，尤其是實(shí)時定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）。qPCR的優(yōu)勢在于可以確定病毒核酸的絕對數(shù)量，如前文所述，組織中PCV2的數(shù)量是區(qū)分臨床PCVDs和PCV2-SI的關(guān)鍵指標(biāo)。考慮到PCV2的廣泛性以及在感染豬的許多樣本中檢測到的可能性，這一事實(shí)就顯得更為重要。僅在血液、組織、初乳、精液、唾液以及鼻腔、肛門和尿液中檢測到PCV2核酸，而且也在環(huán)境（空氣、糞便、水、母豬和仔豬腋窩皮膚表面、妊娠欄地板和欄桿表面）以及豬場的其他動物（嚙齒動物、無脊椎動物）中檢測到了PCV2核酸?？傊?，首先要討論的問題是使用qPCR診斷PCVDs和/或進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)測的方便性。

疾病診斷不僅僅是簡單地檢測到病原體，因?yàn)椴≡w無處不在。因此，使用qPCR來幫助診斷PCVDs必須意味著將其與表征這些疾病的明確事實(shí)相結(jié)合。如果臨床表現(xiàn)與相應(yīng)的組織病理學(xué)病變（表1）相一致，則可以明確診斷為潛在的PCVDs。在這種情況下，使用qPCR并在全身部位（血清或組織）檢測到中等至高水平PCV2病毒載量也可確診為PCVDs，IHC法或ISH法一樣。接下來的一個關(guān)鍵問題是，通過qPCR檢測到的中等至高水平病毒載量有多少。

不同的研究小組已經(jīng)提出了用血清中的qPCR閾值作為PCV2-SD確診的指標(biāo)。這些閾值因不同的研究而異，包括104.7、106.91、107和106.21～107.43個病毒拷貝數(shù)/mL血清。此外，一個研究小組提出了用淋巴組織和非淋巴組織中的qPCR閾值（106.8～108.4個病毒拷貝/g組織）來作為PCV2-SD的確診指標(biāo)。此外，不同研究小組在qPCR檢測極限和靈敏度上存在顯著差異。因此，上述閾值對這些特定的qPCR法是特定的，不能推廣到任何一種qPCR技術(shù)。重要的是，目前使用的大多數(shù)qPCR技術(shù)對應(yīng)于商用技術(shù)，這些技術(shù)通常具有比上述論文（未發(fā)表的結(jié)果）所述的更高的靈敏度。因此，鑒別臨床和亞臨床PCVDs的閾值很可能應(yīng)該是至少108個PCV2拷貝/mL血清，或者可能更高。然而，在使用qPCR作為診斷方法的情況下，必須結(jié)合臨床癥狀和組織病理學(xué)數(shù)據(jù)。如果沒有，則應(yīng)將唯一的qPCR方法視為監(jiān)測工具，而非診斷工具。

與PCV2-SD相比，利用qPCR對其他PCVDs的診斷提示要有限。

盡管病毒正在豬場流行，但豬群沒有出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，并且在被檢豬上發(fā)現(xiàn)輕微或沒有組織病理學(xué)淋巴病變時，診斷為PCV2-SI。許多研究人員已經(jīng)描述了這種情況，qPCR的檢測結(jié)果通常是多變的，但大多數(shù)低于前面提到的閾值。然而，在個體水平上，一些非明顯發(fā)病的豬體內(nèi)的病毒載量很可能高于閾值，而按照經(jīng)典標(biāo)準(zhǔn)診斷出的PCV2-SD的病毒載量可能低于閾值。這在qPCR法的早期描述中已有說明。考慮到PCV2在全球豬場中的普遍存在，得出這樣的結(jié)論，PCV2-SI診斷本身提供的信息量很少，在無明顯臨床癥狀的豬場中使用qPCR，應(yīng)側(cè)重于病毒監(jiān)測目的。關(guān)于qPCR和PDNS的實(shí)用性，也可以得出非常相似的結(jié)論，因?yàn)樵谶@些動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的病毒載量與PCV2-SI的病毒載量相當(dāng)。

借助qPCR診斷PCV2-RD的方法，可能應(yīng)遵循與PCV2-SD相似的方法，不過它可能更復(fù)雜。早期的一項(xiàng)研究提出，在木乃伊胎或死胎的組織樣本（心肌、脾臟和肝臟）中檢測到高水平的病毒載量（＞107個PCV2基因組拷貝/500 ng DNA），以及在患有心肌炎的新生仔豬組織樣本中檢測出中等水平的病毒載量（＞105個PCV2基因組拷貝/500 ng DNA），即可確診為PCV2-RD。有趣的是，在心肌炎病例中，只有PCV2基因組拷貝數(shù)為1010個/500 ng DNA時才能通過IHC檢測出陽性結(jié)果，而基因組拷貝數(shù)為105個/500 ng DNA時病毒抗原檢測結(jié)果為陰性。隨后，另一項(xiàng)研究也得到了非常相似的結(jié)果，108個基因組拷貝/500 ng DNA的值與IHC陽性結(jié)果相關(guān)。

然而，大量心臟未受損的胎兒qPCR檢測結(jié)果為陽性，IHC檢測呈陰性。在后一種情況下，這些研究人員得出結(jié)論，胎兒心臟PCV2 IHC檢測陽性出現(xiàn)在妊娠母豬生殖功能衰竭的急性階段，而qPCR被發(fā)現(xiàn)是一種在更寬的時間內(nèi)更為敏感的診斷方法。

最近發(fā)表的第三項(xiàng)研究表明，109個基因組拷貝/g心臟的閾值與ISH檢測結(jié)果為陽性相吻合，將是滿足表1中所示中等至高水平病毒載量診斷標(biāo)準(zhǔn)的最合適的閾值。總體而言，這些結(jié)果不足為奇，因?yàn)镮HC和ISH檢測結(jié)果與病變的存在相關(guān)，因此與臨床疾病相關(guān)，而qPCR可檢測PCV2的臨床和亞臨床感染。因此，區(qū)分PCV2-RD和生殖系統(tǒng)亞臨床感染的特異性qPCR閾值，再次取決于所使用的qPCR法（如前文所述的PCV2-SD），并且在使用早期發(fā)表的技術(shù)時，它與閾值為107個基因組拷貝/500 ng DNA非常吻合，與Unterweger等（2021）指出閾值為109個基因組拷貝/g心臟組織吻合。值得注意的是，一些研究對提取的DNA以納米克（ng）為基因組拷貝數(shù)的計(jì)量單位，而第三種研究使用克（g）來表示在心臟組織中檢測到的基因組拷貝數(shù)，但這兩種方法尚未進(jìn)行比較。

qPCR法的應(yīng)用范圍已擴(kuò)展到其他類型的樣本，如口腔液、胎盤臍帶、加工液或組織和環(huán)境樣本。這種方法非常適用于監(jiān)控、監(jiān)測和調(diào)查流行病學(xué)的目的，但不適用于疾病診斷。

3.3 抗體檢測方法學(xué)的診斷價(jià)值

豬體內(nèi)的PCV2抗體可以通過自然感染、母豬向仔豬傳遞母源免疫力或接種疫苗產(chǎn)生。此外，由于接種PCV2疫苗已經(jīng)在世界范圍內(nèi)得到廣泛普及，育肥豬或成年豬體內(nèi)出現(xiàn)的抗體滴度/值很可能是接種疫苗和自然感染PCV2后共同作用的結(jié)果。這些抗體的來源無法追溯（缺乏可區(qū)分自然感染還是接種疫苗產(chǎn)生的抗體的疫苗產(chǎn)品），因此抗體檢測的作用有限。

通過血清學(xué)方法（ELISA試驗(yàn)、免疫過氧化物酶單層檢測法、免疫熒光檢測法或其他方法）檢測PCV2抗體，不能為PCVDs的診斷提供依據(jù)。不過，這些技術(shù)不依賴于分析所用的基質(zhì)（血清、口腔液或肉汁），對監(jiān)控和監(jiān)測很有價(jià)值。

4" PCV2流行病學(xué)和免疫接種

4.1 改變PCV2流行病學(xué)

自PCV2疫苗問世并在世界范圍內(nèi)大規(guī)模使用以來，PCV2的流行病學(xué)已經(jīng)發(fā)生了重大的變化。盡管該病毒在豬群中仍存在，但感染模式、病毒載量、感染動物中自然感染的比例和疾病表現(xiàn)形式都已發(fā)生了變化，以至于最終可能會產(chǎn)生一批從斷奶舍到屠宰場都極少或根本沒有接觸過該病毒的豬。事實(shí)上，在“PCV2凈化”的短期嘗試中，母豬和仔豬接種PCV2疫苗6個月后，無法利用PCR法檢測到PCV2，豬也沒有血清轉(zhuǎn)換。

很少有人研究PCV2流行病學(xué)這種變化所引起的后果。我們假設(shè)，從中長期來看，僅仔豬接種疫苗，或仔豬和后備母豬接種疫苗；僅后備母豬/經(jīng)產(chǎn)母豬接種疫苗，或育肥豬加上后備母豬/經(jīng)產(chǎn)母豬接種疫苗，應(yīng)該會產(chǎn)生不同的PCV2感染結(jié)果。例如，當(dāng)僅給仔豬接種疫苗時，育肥期結(jié)束時產(chǎn)生血清陰性豬的可能性會提高。這些豬中的一部分最終可能成為后備種豬，從而產(chǎn)生血清陰性繁育種群，可能容易感染PCV2。這種情況與在只給仔豬接種疫苗的豬群中發(fā)現(xiàn)的后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬的血清學(xué)水平異常吻合。因此，隨著時間的推移，持續(xù)地給仔豬接種疫苗可能會在群體水平上產(chǎn)生免疫多樣性的后備母豬/經(jīng)產(chǎn)母豬“亞群”。盡管母豬在3～4周齡時就接種了PCV2疫苗，但這種情況還是會發(fā)生，因?yàn)檫@種疫苗的免疫期被認(rèn)為可持續(xù)6個月左右。

考慮到PCV2存在于世界上幾乎所有的豬場，那些“無免疫力的”經(jīng)產(chǎn)母豬感染的可能性很高。盡管經(jīng)產(chǎn)母豬的總體感染率通常較低，但正如PCV2-RD在初繁母豬群中的基本描述所證實(shí)的那樣，沒有免疫力的豬群會有更高的感染率。根據(jù)這一原理，豬場中存在易感后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬的同時，一部分種母豬也會出現(xiàn)宮內(nèi)感染。因此，這種情況會導(dǎo)致妊娠母豬產(chǎn)出已感染PCV2的新生仔豬，在自然條件和實(shí)驗(yàn)條件下這種情況都有大量的報(bào)道。因此，在仔豬接種PCV2疫苗之前，豬群中一定比例的豬可能已經(jīng)處于PCV2感染早期。

總的來說，妊娠母豬、后備母豬以及新生仔豬的感染比例在不同的豬場會有所不同，目前，還沒有辦法根據(jù)群體免疫水平預(yù)測這一比例。此外，這些感染對豬場整體生產(chǎn)性能的影響以及對已經(jīng)感染的經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬和仔豬的影響尚不清楚。

4.2 免疫豬群中的PCVDs

PCV2疫苗被認(rèn)為是非常有效的產(chǎn)品，可能是豬用疫苗中最好的疫苗之一，這也解釋了它為何能夠非常有效地預(yù)防PCV2-SD并在世界范圍內(nèi)被廣泛使用。然而，在過去十年中，豬群在接種PCV2疫苗后偶爾也會出現(xiàn)PCV2-SD病例。事實(shí)上，在過去的幾年里，這些病例有明顯增加的趨勢，并且與PCV2d存在潛在的聯(lián)系，因?yàn)樵谧罱欢螘r間中它是PCV2流行毒株中主要的基因型。PCVDs是一種由多種因素共同作用引發(fā)的疾病，因此，豬群中暴發(fā)顯性疾病的原因之一是PCV2感染的情況下，有疾病誘發(fā)因子的共存。還有一種可能的原因是，豬場不能正常進(jìn)行免疫接種工作，但由于缺乏誘發(fā)因素，導(dǎo)致未能明確觀察到顯性但亞臨床的疾病。在這些情況下，連續(xù)給豬接種PCV2疫苗可能無法獲得預(yù)期的效果，因而仍然沒有引起注意。

盡管接種了疫苗，但接種了PCV2-SD疫苗的豬群仍然會發(fā)生PCV2-SD，出現(xiàn)這種情況的原因包括：（1）沒有真正接種疫苗；（2）疫苗使用不當(dāng)；（3）疫苗的接種時間過晚（豬在接種疫苗前或接種疫苗期間發(fā)生了自然感染）；（4）疫苗接種時間過早（母源抗體的潛在干擾或仔豬免疫系統(tǒng)未發(fā)育成熟）；（5）在同時感染免疫調(diào)節(jié)病原體的情況下接種疫苗。前兩種原因與疫苗接種管理不當(dāng)有關(guān)，或者只是某一群豬沒有真正接種疫苗。雖然這兩種情況都是偶爾發(fā)生，但在假定疫苗接種失敗的情況下，一定要排除這兩種情況。

PCV2疫苗接種過晚意味著疫苗是在豬群已經(jīng)自然感染PCV2后接種的。因此，在病毒誘發(fā)疾病之前，疫苗沒有足夠的時間使動物機(jī)體產(chǎn)生充足的免疫反應(yīng)（在前文所述PCV2-SD多因素誘發(fā)情況下）。為年齡相對較大的豬（5周齡以上）接種疫苗的可能性很小，因?yàn)橥ǔＪ窃跀嗄糖昂螅?～4 周齡）接種疫苗。事實(shí)上，疫苗接種晚的情況（就免疫前的感染而言）似乎與前文提到的PCV2流行病學(xué)發(fā)生變化有關(guān)（圖1）。在PCV2疫苗問世之前，存在PCV2感染和誘發(fā)因素的豬場有一部分豬暴發(fā)了PCV2-SD（圖1A）。當(dāng)PCV2疫苗開始用于發(fā)病豬場的仔豬時，PCV2-SD得到了有效控制（圖1B）。

隨著時間的推移，持續(xù)接種疫苗會產(chǎn)生高效的預(yù)防效果，但如前文所述，也會慢慢地產(chǎn)生無免疫力的后備母豬/母豬亞群，或產(chǎn)生免疫力相對較低的母豬和后代。這意味著，從中長期來看，感染壓總體會下降，豬群免疫水平降低，宮內(nèi)感染和仔豬提前感染的風(fēng)險(xiǎn)隨之也增加。在接種疫苗前或接種疫苗時，疾病誘發(fā)因素與豬的提前感染并存，將會導(dǎo)致PCV2-SD病例的出現(xiàn)（圖1C）?？傮w結(jié)果是已接種疫苗的仔豬會出現(xiàn)全身性疾病。值得注意的是，這些病例通常出現(xiàn)在6～8周齡的豬群中，因此現(xiàn)今豬的發(fā)病年齡相對小于疫苗問世前豬的發(fā)病年齡。

給仔豬接種PCV2疫苗是在體內(nèi)PCV2抗體水平達(dá)到一定程度的情況下進(jìn)行的。因此，仔豬的母源免疫力（maternally derived immunity，MDI）被疫苗產(chǎn)生的免疫應(yīng)答所削弱，有利于仔豬自身免疫力的產(chǎn)生。盡管在接種疫苗時，仔豬體內(nèi)的MDI水平在同一批次豬群內(nèi)或不同批次豬群之間不一致，但在斷奶前后接種疫苗是一個通常有利可圖的計(jì)劃。盡管接種疫苗時豬體內(nèi)的抗體水平越高，疫苗引起的血清陽轉(zhuǎn)率越低，但這些值對豬生產(chǎn)性能的潛在有害影響似乎很低或不存在。然而，一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，在PCV2抗體ELISA S/P值非常高的一小部分豬亞群中，疫苗效力（vaccine efficacy，VE）會明顯影響仔豬的平均日增重（average daily weight gain，ADWG）。由于受影響豬的比例相當(dāng)?shù)?，在田間條件下，MDI對VE的潛在干擾對大多數(shù)豬場產(chǎn)生的影響可能可以忽略不計(jì)，但并非對所有豬場都有必要。如果仔豬接種疫苗的時間比平常的時間更早，理論上潛在干擾的影響程度會更高。從這個意義上說，Haake等（2014）發(fā)現(xiàn)，在給1周齡和3周齡仔豬接種疫苗時，疫苗產(chǎn)生的免疫效果存在顯著的差異。這些研究人員認(rèn)為，影響主動免疫和被動轉(zhuǎn)移的其他年齡相關(guān)因素不是抗體水平，可能是導(dǎo)致1周齡疫苗接種組仔豬缺乏VE的原因。然而，在該研究中，3周齡疫苗接種組仔豬的PCV2抗體滴度明顯低于1周齡疫苗接種組仔豬的。因此，研究認(rèn)為MDI干擾也是造成非常年幼的動物接種疫苗后主動免疫效力較低的一個假定原因。

豬可能會感染多種能夠調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)的病原體。關(guān)于這些傳染性病原體或甚至其他非傳染性因素對PCV2 VE潛在影響的數(shù)據(jù)很少。然而，一項(xiàng)研究表明，接種PCV2疫苗時感染豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV），會顯著損害疫苗引起的細(xì)胞免疫應(yīng)答，而不是體液免疫應(yīng)答。因此，可以預(yù)期，仔豬接種PCV2疫苗后發(fā)生的PRRSV血癥將導(dǎo)致保護(hù)不完全和VE表現(xiàn)不佳。有趣的是，Sinha等（2010）沒有觀察到這種效應(yīng)。還有待闡明這種效應(yīng)是否取決于豬感染的PRRSV毒株。

由于在接種PCV2疫苗的次數(shù)上母豬要少很多，沒有資料顯示母豬免疫接種可能會受到任何傳染性或非傳染性因素的不利影響。在任何情況下，出現(xiàn)PCV2-RD的豬場取消疫苗接種將會導(dǎo)致母豬再次發(fā)生繁殖障礙。

5" 討論

PCV2-SD的診斷標(biāo)準(zhǔn)自Segalés等（1999）和Sorden（2000）提出以來沒有改變，隨后Segalés于2012年進(jìn)行了匯編和修訂。因此，經(jīng)過后一次修訂10年后，有必要對現(xiàn)有的PCVDs診斷方法進(jìn)行修訂和更新，尤其是面對全球范圍內(nèi)大規(guī)模接種PCV2疫苗的情況和PCV2流行所經(jīng)歷的流行病學(xué)變化。

必須從實(shí)際角度考慮PCV2感染引起的三個主要結(jié)局：PCV2-SI，PCV2-SD和PCV2-RD。雖然亞臨床形式一直是主要結(jié)果，但直到疫苗問世時才引起人們的注意。這意味著，當(dāng)PCV2-SD在世界范圍內(nèi)嚴(yán)重暴發(fā)時，亞臨床感染豬的比例幾乎是其余所有未表現(xiàn)出全身性疾病的豬的總和（也就是說，在一個批次的豬群中，如果豬的PCV2-SD發(fā)病率為20％～30％，意味著70％～80％的豬發(fā)生了PCV2-SI）。疫苗可以控制感染的亞臨床影響，因此尚沒有對這種情況的診斷做出真正的努力。然而，盡管PCV2疫苗非常有效，但它并不完美，只能預(yù)防臨床疾病，不能預(yù)防感染。因此，一部分接種過疫苗的豬在生產(chǎn)期間仍會受到感染，不過這種感染似乎不會影響豬的ADWG。然而，目前尚不清楚血清中特定的PCV2負(fù)荷閾值是否與個體水平上無明顯臨床癥狀的豬的有害影響相關(guān)?？紤]到豬的遺傳背景會影響PCV2-SD的表達(dá)和血清中的病毒載量，給定病毒載量很可能因豬個體、遺傳品系或品種的不同，而對豬生產(chǎn)性能產(chǎn)生不同的影響。

系統(tǒng)性和生殖系統(tǒng)疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)確立，最初的描述[見Segalés等（2005）的綜述]仍然被認(rèn)為是金標(biāo)準(zhǔn)。在這兩種情況下，由臨床癥狀、病變和病變組織中病毒的檢測組成的三要素可以用于診斷這些疾病，哪怕發(fā)病豬可能并發(fā)了其他疾病。值得注意的是，盡管通過ISH法或qPCR法發(fā)現(xiàn)了中等至高水平的PCV2，但PCV2-RD病例中胎兒心肌病變的存在可能是多變的。這種情況對根據(jù)組織學(xué)病變診斷PCV2-RD的價(jià)值提出了合理的懷疑，但到目前為止，心肌炎是該病癥中觀察到的最一致的病變。因此，本綜述認(rèn)為心肌損害仍應(yīng)被納入病例定義，盡管不是強(qiáng)制性的，但卻是確診該病的有力支持。

如今，盡管給豬接種疫苗能夠很好地預(yù)防PCVDs，但這些單個病例的定義尚未修改。多年來，作為技術(shù)進(jìn)步的產(chǎn)物，qPCR檢測結(jié)果作為診斷這些疾病的替代標(biāo)準(zhǔn)的使用和解讀發(fā)生了變化。雖然早期的報(bào)告主要使用內(nèi)部開發(fā)的分子生物學(xué)技術(shù)，提出了診斷PCV2-SD和PCV2-RD的閾值分別為107個基因組拷貝/mL血清和500 ng DNA，但是，目前商用qPCR技術(shù)尚未在這一意義上得到有效的驗(yàn)證。就在最近，Unterweger等（2021）提出，每克心臟組織中109個病毒基因組拷貝有助于診斷PCV2-RD。迄今為止，未對較早的qPCR法與目前使用的方法進(jìn)行比較，以設(shè)定PCV2-SD的新閾值，但預(yù)計(jì)更高的閾值是可取的。值得注意的是，靶組織，如淋巴器官（但也包括肺）中的病毒載量總是高于感染動物血清中的病毒含量。已在血清水平上確定了疑似PCV2-SD的潛在閾值，但未在組織層面建立；必須謹(jǐn)慎對待組織中的qPCR檢測結(jié)果，因?yàn)槊亢辽逯?07個PCV2基因組拷貝可能對應(yīng)于PCV2-SI。此外，檢測到病毒基因組并不意味著病毒具有傳染性。然而，如果利用qPCR法在發(fā)病豬的淋巴組織中檢測到大量的PCV2核酸，且淋巴組織出現(xiàn)了特征性組織學(xué)病變，則這些數(shù)據(jù)與通過IHC法和ISH法檢測到的病毒抗原或基因組具有很好的相關(guān)性。

PDNS的診斷技術(shù)沒有取得進(jìn)一步的進(jìn)展。間接證據(jù)表明這種情況與PCV2有關(guān)，但尚未確定明確的因果關(guān)系。因此，PDNS的診斷仍然被認(rèn)為是一種基于大體病變和微觀病變診斷的免疫復(fù)合物病。

盡管qPCR法和抗體檢測法被廣泛應(yīng)用于監(jiān)測PCV2感染，接種疫苗被大規(guī)模采用，但仍有幾種情況需要建立一套完整的PCVDs診斷標(biāo)準(zhǔn)。首先，當(dāng)豬場出現(xiàn)與PCVDs相符的明顯疾病時（即仔豬斷奶后消瘦或母豬妊娠后期繁殖障礙）。其次，當(dāng)豬出現(xiàn)生長不良的普通疾病或非特異性繁殖障礙時，應(yīng)排除可能發(fā)生了PCVDs。最后，也是目前最重要的一種情況，當(dāng)有理由懷疑疫苗的免疫效果不佳時，需要對PCVDs進(jìn)行明確的診斷。在后一種情況下，全面確診必須是考慮改變PCV2疫苗接種計(jì)劃和深化豬場病毒流行病學(xué)動態(tài)監(jiān)測測控的第一步。重點(diǎn)應(yīng)放在母豬的宮內(nèi)感染和/或仔豬感染提前以及母豬群抗體水平的變化上。

6" 結(jié)論

本文旨在更新PCVDs的診斷標(biāo)準(zhǔn)（和診斷工具）及其實(shí)際意義、實(shí)用性、局限性的解讀。PCVDs是一種由多種因素引發(fā)的疾病，因此，僅檢測甚至量化病毒載量不足以建立PCV2與特定臨床疾病因果關(guān)系的確鑿證據(jù)。然而，要解決病毒性疾病的流行病學(xué)背景，確診是第一步，但正確監(jiān)測感染與診斷同樣重要。

原題名：Revisiting porcine circovirus disease diagnostic criteria in the current porcine circovirus 2 epidemiological context（英文）

原作者：Joaquim Segalés和Marina Sibila