雪腐微座孢引起新疆小麥雪腐病的病原鑒定及生物學(xué)特性分析

doi：10.6048/j.issn.1001-4330.2024.05.018

摘" 要：【目的】研究新疆伊犁哈薩克自治州（簡稱伊犁州）冬小麥主產(chǎn)區(qū)小麥雪腐病病原菌種類、生物學(xué)特性，為農(nóng)藥研制及該病害防控提供科學(xué)依據(jù)。

【方法】通過組織分離法，分離冬小麥雪腐病病原菌并接種到健康小麥上驗(yàn)證其致病性，結(jié)合生物學(xué)特征及ITS基因序列分析鑒定病原菌種類，采用生長速率法研究病原菌生物學(xué)特性。

【結(jié)果】分離獲得的菌株YLXF-1、YLXF-2及YLXF-3均可侵染健康小麥，且發(fā)病癥狀和田間癥狀相同；病原菌為Microdochium nivale。病原菌在5～35℃、pH值3～12、不同光照條件及供試培養(yǎng)基上均可生長，且大部分供試碳、氮源均可利用，具有較強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)性。病原菌在20℃、pH值8、12 h光暗交替培養(yǎng)和PDA培養(yǎng)基上菌絲生長較快，利用率較好的碳源、氮源分別為蔗糖和牛肉膏。

【結(jié)論】新疆伊犁州冬小麥主產(chǎn)區(qū)小麥雪腐病病原菌為M.nivale，病原菌菌絲最適生長溫度為20℃，pH值8，光照為12 h光暗交替，培養(yǎng)基為PDA，最佳碳源為蔗糖，最佳氮源為牛肉膏。

關(guān)鍵詞：小麥；雪腐??；病原鑒定；生物學(xué)特性

中圖分類號(hào)：S513""" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A""" 文章編號(hào)：1001-4330（2024）05-1201-08

收稿日期（Received）：

2023-10-15

基金項(xiàng)目：

中央引導(dǎo)地方項(xiàng)目“‘一帶一路’國際綠色農(nóng)藥研制及應(yīng)用技術(shù)創(chuàng)新基地建設(shè)”（ZYYD2023B06）；省部共建課題“干旱半干旱地區(qū)旱地小麥提質(zhì)增效關(guān)鍵技術(shù)研究”（SBGJXTZXKF-9）；新疆維吾爾自治區(qū)鄉(xiāng)村振興產(chǎn)業(yè)發(fā)展科技行動(dòng)項(xiàng)目“春小麥增密抗逆增產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)引進(jìn)與示范”（2022NC078）；新疆維吾爾自治區(qū)科技特派員農(nóng)村科技創(chuàng)業(yè)行動(dòng)項(xiàng)目“春小麥高產(chǎn)創(chuàng)建關(guān)鍵技術(shù)集成與示范”（2022BKZ022 ）

作者簡介：

王莉（1998-），女，河南周口人，碩士研究生，研究方向?yàn)樾←湶『Ψ揽?，（E-mail）1669655475@qq.com

通訊作者：

雷斌（1973-），男，四川巴中人，研究員，博士，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)樽魑锔惒『Ψ揽丶熬G色農(nóng)藥研發(fā)，（E-mail）leib668@xaas.ac.cn

0" 引 言

【研究意義】1994、1999和2003年，新疆伊犁州冬小麥主產(chǎn)區(qū)小麥雪腐病發(fā)生面積分別占小麥播種面積的71.85%、56.32%和37.50%，使小麥產(chǎn)量和品質(zhì)有所下降［1-2］。因此，鑒定小麥雪腐病病原菌分析其生物學(xué)特性，對(duì)于采取針對(duì)性措施防治該病有實(shí)際意義。【前人研究進(jìn)展】小麥雪腐病的分布較廣［3-4］，我國浙江、江蘇、新疆等9個(gè)?。▍^(qū)）均有小麥雪腐病的發(fā)生［5］。代麗婷等［6］研究了黑龍江省小麥雪腐病病原菌種類及其生物學(xué)特性。王芳等［7］從新疆、陜西和青海等7個(gè)?。▍^(qū)）的小麥雪腐病病原菌進(jìn)行了致病力測定?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】新疆生態(tài)及地理環(huán)境獨(dú)特，病原及其生物學(xué)特性差異性顯著，尚缺乏系統(tǒng)的研究報(bào)道。目前，有關(guān)小麥雪腐病病原菌的生物學(xué)特性文獻(xiàn)較少。需要研究新疆伊犁州小麥雪腐病病原菌種類、生物學(xué)特性?！緮M解決的關(guān)鍵問題】從新疆伊犁州冬小麥主產(chǎn)區(qū)采集小麥雪腐病病樣，分離病原菌并根據(jù)柯赫氏法則驗(yàn)證致病力，根據(jù)ITS基因序列分析病原菌種類，并探究病原菌的生物學(xué)特性，為該病害的流行規(guī)律及防治藥劑的研制提供理論參考。

1" 材料與方法

1.1" 材 料

供試病樣：小麥雪腐病病樣于2021年3月采集新疆伊犁州察布查爾錫伯自治縣和鞏留縣冬小麥雪腐病病樣。表1

供試冬小麥品種為新冬22號(hào)，由新疆九圣禾種業(yè)有限公司提供。

供試培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂（Potato Dextrose Agar，PDA）培養(yǎng)基、沙氏（Sabouraud Dextrose Agar，SDA）培養(yǎng)基、馬丁氏（Martin）培養(yǎng)基、玉米粉（Corn Meal Agar，CMA）培養(yǎng)基、水瓊脂（Water agar，WA）培養(yǎng)基、查彼克（Czapek）培養(yǎng)基。

1.2" 方 法

1.2.1" 病原菌分離純化

采用常規(guī)組織分離法［8］，將從田間采集的病樣用流動(dòng)的水沖洗干凈，晾干后放入超凈工作臺(tái)中，用滅菌的手術(shù)剪將病樣剪成長1 cm的組織塊。將剪取的病樣組織塊，先放入75%乙醇中消毒10 s，取出后用無菌水沖洗3次，去除殘留乙醇，再將病樣組織塊放入有效氯含量為5%的次氯酸鈉中，消毒3 min，取出后用無菌水沖洗3次，去除殘留次氯酸鈉，將沖洗后的病樣組織塊放在滅菌后的濾紙上，待病樣組織塊表面干燥后用無菌鑷子放置于PDA平板上。在20℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，待其長出菌落后，純化培養(yǎng)。

1.2.2" 致病力測定

（1）離體葉片接種法［9］。播種21 d后，從小麥植株上，剪取健康、位置相近的小麥葉片6 cm長的中部葉片段，背面朝上置于WA平板上，將菌餅（Φ=6 mm）菌絲朝下放置于葉片上，以空白PDA培養(yǎng)基塊為對(duì)照，20℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，7 d后觀察發(fā)病情況。待發(fā)病后拍照保存，并對(duì)發(fā)病部位組織進(jìn)行再分離。

（2）土壤接種法［7］。將病原菌菌餅（Φ=6 mm）接種于滅菌的麥粒和玉米?；旌系墓腆w培養(yǎng)基上，培養(yǎng)15 d后作為接種物，無菌固體培養(yǎng)基為對(duì)照接種物。在直徑為15 cm的花盆中裝入一半滅菌后的營養(yǎng)土按壓平整后，表面均勻的撒入4 g病原菌固體培養(yǎng)物，再覆蓋2 cm厚的滅菌土后，播種小麥種子，每盆12粒，在種子表面覆蓋3 cm的無菌營養(yǎng)土。在20℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，30 d后觀察小麥生長情況。

1.2.3" 病原菌形態(tài)學(xué)鑒定

將病原菌菌餅（Φ=6 mm）接種PDA培養(yǎng)基上，在20℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d后觀察其菌落形態(tài)特征，待其產(chǎn)孢后，挑取孢子制作玻片利用光學(xué)顯微鏡觀察分生孢子形態(tài)、大小等并測量與記錄。

1.2.4" 病原菌分子鑒定

將病原菌菌餅（Φ=6 mm）接種PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待長出大量菌絲后用小刀刮取0.1 g菌絲，置于加入適量液氮的研缽中，用滅菌后的研磨棒快速將菌絲研磨至粉末狀，之后使用市售植物DNA提取試劑盒提取菌株DNA。采用真菌引物ITS1（5′-TCCGTAGGTGAACCTGC-3′）和ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）進(jìn)行菌株DNA的PCR擴(kuò)增。然后將擴(kuò)增產(chǎn)物送至公司測定，把測得的序列在NCBI進(jìn)行相似性序列比對(duì)，下載相似率最高的序列用于構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.5" 病原菌生物學(xué)特性

1.2.5.1" 溫 度

將病原菌菌餅（Φ=6 mm）接種于PDA培養(yǎng)基上，分別置于5、10、15、20、25、30、35℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理重復(fù)3次，在7 d后用十字交叉法測量菌落直徑。

1.2.5.2" pH值

將病原菌菌餅（Φ=6 mm）接種于用1 mol/L HCl和NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值分別為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0和11.0的PDA培養(yǎng)基上，20℃恒溫培養(yǎng)。

1.2.5.3" 光照條件

將病原菌菌餅（Φ=6 mm）接種PDA培養(yǎng)基上，分別放置于24 h光照（L）、12 h/12 h光暗交替（L/D）和24 h黑暗（D）3個(gè)不同光照條件下，20℃恒溫培養(yǎng)。

1.2.5.4" 培養(yǎng)基

將病原菌菌餅（Φ=6 mm）接種于PDA、SDA、Martin、CMA、WA、Czapek，6種不同培養(yǎng)基中央，于20℃恒溫培養(yǎng)。

1.2.5.5" 碳源

采用Czapek培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，把其中的葡萄糖替換為同等碳元素質(zhì)量的蔗糖、乳糖、果糖、麥芽糖、淀粉、甘露醇，制作成6種含有不同氮源的培養(yǎng)基，以不添加碳源為對(duì)照，將病原菌菌餅（Φ=6 mm）接種后于20℃恒溫培養(yǎng)。

1.2.5.6" 氮源

采用Czapek培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，把其中的硝酸鈉替換為同等氮元素質(zhì)量的硫酸銨、蛋白胨、牛肉膏、尿素、L-組氨酸、L-賴氨酸，制作成6種不同氮源的培養(yǎng)基，以不添加氮源為對(duì)照，將病原菌菌餅（Φ=6 mm）接種后于20℃恒溫培養(yǎng)。

1.3" 數(shù)據(jù)處理

采用MEGA 7.0軟件進(jìn)行序列的系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建；用Excel 2010計(jì)算數(shù)據(jù)并作圖，其中數(shù)據(jù)方差分析使用SPSS 21.0軟件。

2" 結(jié)果與分析

2.1" 小麥雪腐病田間發(fā)病癥狀

研究表明，小麥雪腐病在新疆伊犁河谷冬小麥田間均不同程度發(fā)生。小麥雪腐病病原菌危害小麥葉片及莖基部，受害葉片表面可見暗綠色或黃褐色水漬狀病斑及不規(guī)則小黑點(diǎn)，葉片及莖基部表面可見灰白色菌絲。該病害的田間癥狀與小麥雪腐病典型癥狀一致。圖1

2.2" 小麥雪腐病病原菌分離純化及致病性測定

研究表明，從采集的小麥雪腐病病樣中分離出58個(gè)真菌菌株。根據(jù)菌株菌落顏色及形態(tài)將其分為3類：微座孢屬24株，分離率41.38%、鐮刀菌屬10株，分離率17.24%、鏈格孢屬19株，分離率32.86%，少量的其他屬真菌5株，分離率8.62%。表2

小麥雪腐病病組織經(jīng)病原菌分離、純化，共獲得病原菌3株，分別編號(hào)為YLXF-1、YLXF-2、YLXF-3。對(duì)照小麥葉片無任何發(fā)病跡象；菌株YLXF-1、YLXF-2、YLXF-3接種小麥葉片后，葉片表面均出現(xiàn)黃褐色水浸狀病斑，表面布滿灰白色霉層和近似球形黑色小點(diǎn)，菌株致病力從強(qiáng)到弱依次為YLXF-2gt;YLXF-3gt;YLXF-1。通過對(duì)菌株YLXF-1、YLXF-2、YLXF-3接種致病處進(jìn)行病原菌再分離，分離菌株與接種菌株的形態(tài)一致。菌株YLXF-1、YLXF-2、YLXF-3為小麥雪腐病的病原菌。

對(duì)照小麥出苗數(shù)多，幼苗整齊、健壯；菌株YLXF-2培養(yǎng)物接種后小麥出苗數(shù)少，且幼苗矮小，高矮不一，病原菌為害小麥的種子和幼苗，降低小麥出苗率，抑制幼苗生長。圖2

2.3" 小麥雪腐病病原菌形態(tài)和分子生物學(xué)鑒定

2.3.1" 小麥雪腐病病原菌形態(tài)學(xué)鑒定

研究表明，菌株YLXF-1、YLXF-2、YLXF-3形態(tài)特征相同，在PDA平板上培養(yǎng)7 d后，病原菌菌落為圓形，菌絲呈稀疏絨毛狀，菌落背面呈橘粉色；在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)25 d后菌落表面可見橘紅色點(diǎn)狀物，玻片觀察到大量分生孢子，分生孢子呈鐮刀狀，兩端幾乎相同，有時(shí)基部略平，有1～3個(gè)間隔，大小為（11.47～26.46） μm×（3.07～5.62） μm，無厚垣孢子，鑒定為微座孢屬M(fèi)icrodochium真菌。圖3

2.3.2" 小麥雪腐病病原菌分子鑒定

研究表明，采用rDNA-ITS通用引物ITS1、ITS4對(duì)菌株YLXF-1、YLXF-2、YLXF-3基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得片段大小約為550 bp大小的清晰條帶。將菌株YLXF-1、YLXF-2、YLXF-3測序所獲得的ITS基因序列進(jìn)行BLAST比對(duì)后，與不同來源的M.nivale的ITS序列同源性為100%。構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹中形成了明顯的分枝，菌株YLXF-1、YLXF-2、YLXF-3與編號(hào)為KT692594.1、KP859008.1、MN313307.1的M.nivale聚為一類。菌株YLXF-1、YLXF-2、YLXF-3為小麥雪腐病病原菌M.nivale。圖4，圖5

2.4" 雪腐微座孢的生物學(xué)特性（圖6）

2.4.1" 溫度對(duì)雪腐微座孢生長的影響

研究表明，不同溫度對(duì)雪腐微座孢菌絲生長的影響差異顯著。病原菌生長溫度范圍較廣，5～35℃下均可生長，在15～25℃菌絲生長良好，菌落平均直徑大于40.00 mm，其中在20℃培養(yǎng)下菌落平均直徑達(dá)46.46 mm，顯著高于其他溫度處理；當(dāng)溫度小于10℃和大于35℃時(shí)，菌落直徑較?。▓D6A）。雪腐微座孢的最適生長溫度為20℃。

2.4.2" pH對(duì)雪腐微座孢生長的影響

研究表明，不同pH值對(duì)雪腐微座孢菌絲生長的影響差異顯著。菌株YLXF-2在pH值3.0～11.0均可生長，當(dāng)pH值為8.0時(shí)菌絲生長速度最快，菌落平均直徑為64.96 mm；其次為當(dāng)pH值為9時(shí)，菌落平均直徑為57.12 mm（圖6B）。雪腐微座孢的最適pH值為8。

2.4.3" 光照條件對(duì)雪腐微座孢生長的影響

研究表明，12 h/12 h光暗交替有利于雪腐微座孢菌絲的生長，菌落平均直徑達(dá)52.34 mm；連續(xù)光照和連續(xù)黑暗條件對(duì)菌絲生長的影響差異不顯著，菌落平均直徑分別為47.75和45.08 mm（圖6C）。雪腐微座孢的最適光照條件為12 h光暗交替。

2.4.4" 培養(yǎng)基對(duì)雪腐微座孢生長的影響

研究表明，不同培養(yǎng)基對(duì)雪腐微座孢菌絲生長的影響差異顯著。病原菌在供試的6種培養(yǎng)基上均可生長。在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)菌絲生長最快，菌落平均直徑為69.28 mm；其次為在SDA和Martin培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落平均直徑分別為58.47、61.01 mm，2個(gè)培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長影響差異不顯著；Czapek培養(yǎng)基不利于菌絲生長，培養(yǎng)7 d后菌落平均直徑僅有12.66 mm（圖6D）。雪腐微座孢的最適培養(yǎng)基為PDA。

2.4.5" 碳源對(duì)雪腐微座孢生長的影響

研究表明，不同碳源對(duì)雪腐微座孢菌絲生長的影響差異顯著。雪腐微座孢在供試7種碳源培養(yǎng)基上均可生長。當(dāng)在以蔗糖為碳源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)生長速度最快，菌落平均直徑為50.05 mm；其次為以可溶性淀粉和果糖為碳源的培養(yǎng)基，兩者對(duì)菌絲生長的影響差異不顯著，菌落平均直徑分別為42.07、42.16 mm；而雪腐微座孢在以乳糖為碳源的培養(yǎng)基上生長速度最慢，菌落平均直徑僅為10.92 mm（圖6E）。雪腐微座孢的最適碳源為蔗糖。

2.4.6" 氮源對(duì)雪腐微座孢生長的影響

研究表明，不同氮源對(duì)雪腐微座孢菌絲生長的影響差異顯著。雪腐微座孢在除了尿素以外的6種供試氮源培養(yǎng)基上可生長；對(duì)牛肉膏的利用率最好，菌落平均直徑達(dá)到81.17 mm；其次是對(duì)蛋白胨的利用率較好，菌落平均直徑為70.96 mm；對(duì)L-脯氨酸、L-賴氨酸和硝酸鈉的利用效果較差，菌落平均直徑分別為13.88、12.48和7.93 mm（圖6F）。雪腐微座孢的最適氮源為牛肉膏。

3" 討 論

3.1

病原菌的形態(tài)特征與Gagkaeva等［10］對(duì)小麥雪腐病病原菌Microdochium nivale的形態(tài)特征一致。小麥雪腐病主要病原菌為雪腐微座孢Gerlachia nivalis 和肉孢核瑚菌Typhula incarnata［2］。其中病原菌M.nivale是世界上分布的真菌［11，12］。M.nivale可在不同地區(qū)、不同環(huán)境下引起不同癥狀的病害，在積雪時(shí)間長的地區(qū)主要引起小麥雪腐?。?3-15］。研究表明，致病力較強(qiáng)的3株菌株均為小麥雪腐病病原菌M.nivale，與劉玉富等［16］結(jié)果報(bào)道一致。劉玉富等［16］報(bào)道，病原菌M.nivale是引起伊犁河谷小麥雪腐病最主要的致病菌，而T.incarnata不是主要致病菌，研究未發(fā)現(xiàn)T.incarnata，不同年份和地區(qū)小麥雪腐病病原菌種類變化較大，病原菌的種類、優(yōu)勢種、致病力等也發(fā)生變化。

3.2

一種作物病害發(fā)生和流行的規(guī)律與該病害病原菌的生物學(xué)特性密不可分［17］。舒正義［18］從四川分離出G.nivalis生物學(xué)特性研究表明，菌株在PDA培養(yǎng)基上生長較快，在Czapek培養(yǎng)基上生長較差，最適溫度為19～21℃，最適pH值為5～6。代麗婷等［6］研究表明，從黑龍江省的小麥雪腐病的病樣中分離出的病原菌菌株在20～25℃、PDA培養(yǎng)基pH值為7、12 h光暗交替培養(yǎng)時(shí)生長較快，利用率最好的碳、氮源分別為淀粉和牛肉膏。研究結(jié)果表明，小麥雪腐病病原菌M.nivale新疆伊犁菌株最適培養(yǎng)溫度為20℃，12 h/12 h光暗交替下利于菌絲生長，最適培養(yǎng)基為PDA，最佳碳源為蔗糖，與舒正義［18］、代麗婷等［6］的研究結(jié)果一致，但是，病原菌最適pH值為8，最佳氮源為牛肉膏，與其研究結(jié)果不一致，是因?yàn)榫甑膩碓吹夭煌?，也可能因?yàn)槭荕.nivale不同的生理型其生物特性有一定的差別。病原菌在溫度5～35℃，pH值3～12、不同光照條件下和供試6種不同培養(yǎng)基上均可生長，且對(duì)大部分供試碳、氮源均可利用，該細(xì)菌對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性很強(qiáng)。

4" 結(jié)論

引起新疆伊犁河谷小麥雪腐病病原菌為M.nivale，在5～35℃、pH值3～12、不同光照條件下及供試培養(yǎng)基上均可生長，且對(duì)大部分供試碳、氮源均可利用，具有較強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)性，病原菌最適溫度、pH值、光照和培養(yǎng)基分別為20℃、8、12 h/12 h光暗交替培養(yǎng)和PDA培養(yǎng)基，利用率較好的碳源、氮源分別為蔗糖和牛肉膏。

參考文獻(xiàn)（References）

［1］

蘆屹， 魏新政， 李靜， 等. 新疆小麥雪腐（霉）病的發(fā)生與藥劑拌種防治現(xiàn)狀［J］. 中國植保導(dǎo)刊， 2020， 40（9）： 72-76.

LU Yi， WEI Xinzheng， LI Jing， et al. Analysis of the occurrence and damage of wheat snow rot（mildew） and the application of seed coating control in Xinjiang［J］. China Plant Protection，" 2020， 40（9）： 72-76.

［2］ 石寶忠， 邱焯， 趙永生， 等. 小麥雪腐（霉）病發(fā)生原因分析與控制對(duì)策［J］. 植物保護(hù)， 2010， 36（2）： 154-156.

SHI Baozhong， QIU Zhuo， ZHAO Yongsheng， et al. Analysis of causes and control measures of snow mold in wheat［J］. Plant Protection， 2010， 36（2）： 154-156.

［3］ Richardson M J. A leaf blight caused by Fusarium nivale ［J］. Plant Disease Reporter， 1972， 56（9）： 803-804.

［4］ Sung J M， Chung B J， Snyder W C. New Disease of Wheat and Barley Caused by Fusarium （Calonectria） nivale in Korea ［J］. Korean Journal of Applied Entomology， 1977， 16（4）： 209-210.

［5］ 何希樹， 吳成方， 曹世南， 等. 小麥雪霉葉枯病的發(fā)生研究初報(bào)［J］. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)， 1995， 23（4）： 321-322.

HE Xishu， WU Chengfang， CAO Shinan， et al. A preliminary report on the occurrence of snow mold leaf blight in wheat［J］. Journal of Anhui Agricultural Sciences， 1995， 23（4）： 321-322.

［6］ 代麗婷， 劉東， 張艷菊. 黑龍江省冬小麥雪腐病病原鑒定及生物學(xué)特性研究［J］. 植物保護(hù)， 2013， 39（1）： 44-49.

DAI Liting， LIU Dong， ZHANG Yanju. Pathogen identification and biological characteristics of the winter wheat snow mold in Heilongjiang Province［J］. Plant Protection， 2013， 39（1）： 44-49.

［7］ 王芳， 商鴻生， 王樹權(quán). 雪腐捷氏霉中國菌系對(duì)小麥的致病性研究［J］. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)， 2000， 16（3）： 10-13.

WANG Fang， SHANG Hongsheng， WANG Shuquan. A comparative study on pathogenicity of Chinese strains of Gerlachia nivalis to wheat［J］. Chinese Agricultural Science Bulletin，" 2000， 16（3）： 10-13.

［8］ 方中達(dá). 植病研究方法.3版. ［M］. 北京： 中國農(nóng)業(yè)出版社， 1998.

FANG Zhongda. Research Methods of Plant Disease （3rd Edition） ［M］. Beijing： China Agriculture Press， 1998.

［9］ Browne R A， Mascher F， Golebiowska G， et al. Components of partial disease resistance in wheat detected in a detached leaf assay inoculated with Microdochium majus using first， second and third expanding seedling leaves［J］. Journal of Phytopathology，" 2006， 154（4）： 204-208.

［10］ Gagkaeva T Y， Orina A S， Gavrilova O P， et al. Evidence of Microdochium fungi associated with cereal grains in Russia［J］. Microorganisms，" 2020， 8（3）： 340.

［11］ Ponomareva M L， Gorshkov V Y， Ponomarev S N， et al. Snow mold of winter cereals： a complex disease and a challenge for resistance breeding［J］. Theoretical and Applied Genetics， 2021， 134（2）： 419-433.

［12］ Tsers I， Marenina E， Meshcherov A， et al. First genome-scale insights into the virulence of the snow mold causal fungus Microdochium nivale［J］. IMA Fungus， 2023， 14（1）： 2.

［13］ Samuels G J， Hallett I C. Microdochium stoveri and Monographella stoveri， new combinations for Fusarium stoveri and Micronectriella stoveri［J］. Transactions of the British Mycological Society， 1983， 81（3）： 473-483.

［14］ Lees A K， Nicholson P， Rezanoor H N， et al. Analysis of variation within Microdochium nivale from wheat： evidence for a distinct sub-group［J］. Mycological Research， 1995， 99（1）： 103-109.

［15］ Jewell L E， Hsiang T. Multigene differences between Microdochium nivale and Microdochium majus［J］. Botany， 2013， 91（2）： 99-106.

［16］ 劉玉富， 周化如， 郝海榮. 伊犁河谷冬小麥雪腐病發(fā)生原因及源頭預(yù)防措施［J］. 新疆農(nóng)業(yè)科技， 2003， （6）： 34.

LIU Yufu， ZHOU Huaru， HAO Hairong. Causes and prevention measures of winter wheat snow rot in Yili River Valley［J］. Xinjiang Agricultural Science and Technology，nbsp; 2003， （6）： 34.

［17］ 吳恩果， 周瑜， 朱明旗， 等. 糜子絲黑穗病病原菌鑒定及其生物學(xué)特性［J］. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)， 2020， 47（1）： 101-109.

WU Enguo， ZHOU Yu， ZHU Mingqi， et al. Identification and biological characteristics of Sporisorium destruens in broomcorn millet［J］. Journal of Plant Protection，" 2020， 47（1）： 101-109.

［18］ 舒正義. 小麥雪霉病菌的生物學(xué)特性研究［J］. 西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 1986， 8（4）： 55-61.

SHU Zhengyi. Studies on the biology of the pathogen of wheat snow mold［J］. Journal of Southwest Agricultural University，" 1986， 8（4）： 55-61.

Pathogen identification and biological characteristics analysis of wheat snow rot caused by Microdochium nivale

WANG Li1， ZHOU Xiaoyun2，3， YAN Rong1， ZHANG Jungao2，3， LI Jin2，3， LIANG Jing2，3， GONG Jingyun2，3， DU Yu1， MA Deying1， LEI Bin2，3

（1." College of Agriculture， Xinjiang Agricultural University， Urumqi 830052， China; 2. Scientific and Technological Achievements Transformation Center /Pesticide Trial Production Center / Institute of Nuclear Technology and Biotechnology， Xinjiang Academy of Agricultural Sciences， Urumqi 830091， China; 3. Xinjiang Crop Chemical Control Engineering Technology Research Center， Urumqi 830091， China）

Abstract：【Objective】 The study aims to investigate the species and biological characteristics of the causal agents of wheat snow mold disease in the main wheat-producing areas of Yili Kazak Autonomous Prefecture （Yili Prefecture）， Xinjiang Uygur Autonomous Region， China， in order to provide scientific basis for the development of pesticides and the prevention and control of the disease.

【Methods】" The pathogen of winter wheat snow mold disease was isolated by tissue culture method and inoculated onto healthy wheat plants to verify its pathogenicity. The species of the pathogen was identified by combining its biological characteristics and ITS gene sequence analysis. The biological characteristics of the pathogen were studied by the method of growth rate.

【Results】 The isolates YLXF-1， YLXF-2， and YLXF-3 could infect healthy wheat and exhibit the same symptoms of disease in the field. Morphological and molecular biological identification results indicated that the pathogen was Microdochium nivale. The pathogen could grow at temperatures of 5-35°C， pH values of 3-12， under different light conditions， and on various test media， and could utilize most of the tested carbon and nitrogen sources， indicating strong environmental adaptability. The pathogen had faster mycelial growth at 20°C， pH 8， and 12 h of light-dark alternation culture on PDA medium， and utilized sucrose and beef extract as the better carbon and nitrogen sources， respectively.

【Conclusion】 The pathogen of wheat snow mold disease in the main production area of winter wheat in Yili， Xinjiang is M. nivale. The optimal growth temperature of the pathogen mycelium is 20°C， pH value is 8， light is 12 h of light and darkness alternation， culture medium is PDA， the best carbon source is sucrose， and the best nitrogen source is beef extract.

Key words：wheat; snow rot; pathogen identification; biological characteristics

Fund projects：The central government guides local projects \" Construction of 'Belt and Road' international green pesticide development and application technology innovation base\" （ZYYD2023B06）; Provincial and ministerial joint projects \"Study on Key techniques of improving quality and efficiency of dryland wheat in arid and semi-arid areas\"（SBGJXTZXKF-9）;" Agriculture，Rural Areas and Farmers Backbone Talent Training Project of Xinjiang Uygur Autonomous Region\"Introduction and demonstration of key technologies for increasing density， stress resistance， and yield of spring wheat\"（2022NC078）;Xinjiang Uygur Autonomous Region Science and Technology Commissioner Rural Science and Technology Entrepreneurship Action Project \"Integration and Demonstration of Key Technologies for High Yield Creation of Spring Wheat\"（2022BKZ022 ）\"

Correspondence author：LEI Bin （1973 -）， male， from Bazhong， Sichuan， researcher， Ph.D.， research direction： pesticide research and crop chemical regulation technology， （E-mail） leib668@xaas.ac.cn