源于動物類中藥活性肽藥理作用研究進展

摘要：本文對近年來源于動物類中藥活性肽藥理作用研究進展進行綜述，以期為動物類中藥活性肽的開發(fā)利用以及探尋生物活性成分提供新思路。本文以2020版《中國藥典》中收錄及臨床常用的40余種動物類中藥為關(guān)鍵字，查閱整理近年來國內(nèi)外相關(guān)文獻報道，從抗凝、調(diào)節(jié)血脂、抗腫瘤、抗氧化、保肝等方面闡述動物類中藥活性肽的藥理作用?；钚噪姆肿恿恳话阈∮? KDa，相比于蛋白質(zhì)、大分子多肽和氨基酸，更容易被人體吸收，且具有多種生理活性，表明動物類中藥活性肽具有較高的研究和開發(fā)價值。

關(guān)鍵詞：中藥；活性肽；動物類中藥；藥理作用

中圖分類號：R285 " " " " " " " " " " " " " " " " " 文獻標(biāo)識碼：A " " " " " " " " " " " " " " " " DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2023.24.041

文章編號：1006-1959（2023）24-0173-06

Research Progress on Pharmacological Action of Active Peptides Derived

from Animal Traditional Chinese Medicine

LIU Chang-long1，LI Yun-xiao2，ZHANG Hong-yan1，JIN Bao-dong1，LIU Li-da1，GAO Peng3

（1.Pharmacy Department of the Second Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，

Jinan 250000，Shandong，China;

2.Pharmacy Department of Endocrine and Metabolic Hospital Affiliated to Shandong First Medical University，

Jinan 250002，Shandong，China;

3.Pharmacy College of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，Shandong，China）

Abstract：This article reviews the research progress of active peptide derived from animal traditional Chinese medicine in recent years. It provides a new idea for the development and utilization of active peptide from animal traditional Chinese medicine. With more than 40 animal traditional Chinese medicines in the 2020 edition of the Chinese Pharmacopoeia and commonly used in clinic as the key words， we have reviewed and collated relevant literature reports at home and abroad in recent years， the pharmacological effects of active peptides from animal traditional Chinese medicine on anticoagulation， regulation of Blood Lipid， anti-tumor， anti-oxidation and protection of liver are expounded. The relative molecular weight of active peptides is generally less than 5 KDa， which is easier to be absorbed by human body than protein， macromolecular peptides and amino acids. Meanwhile， it has many kinds of physiological activities， which indicates that the active peptides of animal traditional Chinese medicine have high research and development value.

Key words：Traditional Chinese medicine;Active Peptide;Animal traditional Chinese medicine;Pharmacological action

活性肽（active peptides）是由兩個及以上氨基酸通過肽鍵共價連接形成的聚合物，根據(jù)肽中氨基酸殘基的數(shù)量，常將含15個殘基及以下的稱為小肽（寡肽），含有16～50個殘基的稱為多肽[1]。研究表明[2]，一些活性肽尤其是分子量相對較小的肽可直接被人體吸收，受到研究者的廣泛關(guān)注。相對于植物類中藥，動物類中藥如水蛭、蜈蚣、蛤蚧等大多含有較多的蛋白質(zhì)，經(jīng)過蛋白酶酶解或其它手段處理后可獲得大量的肽類組分，因此從動物類中藥中更易獲得藥理作用確切的活性肽組分。近年來，隨著仿生酶解、大孔吸附樹脂、葡聚糖凝膠色譜柱層析、MADIL-TOF/TOF-MS等新型制備、分離及分析手段的應(yīng)用，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)了動物類中藥中具有明顯藥理作用的活性肽類組分[3-5]?；诖耍疚膶陙韲鴥?nèi)外關(guān)于動物類中藥活性肽的藥理作用研究進展進行綜述，以期更好地開發(fā)和利用動物類中藥中的活性肽。

1抗凝血作用

水蛭是具有破血通經(jīng)、逐瘀消癥功效的動物類中藥，臨床常用于治療血瘀經(jīng)閉、中風(fēng)偏癱，目前已知水蛭抗凝成分主要為一些肽類成分[6]，其中以水蛭素的研究最為透徹，水蛭素是從水蛭唾液腺中發(fā)現(xiàn)的由66個氨基酸殘基組成的單鏈多肽，分子量約為7 KDa，是一種凝血酶特異性抑制劑[7，8]，但水蛭素口服后需經(jīng)胃腸道酶解成小肽后再發(fā)揮療效，效率較低[9]。多項研究發(fā)現(xiàn)采用蛋白酶酶解水蛭獲得的肽類產(chǎn)物具有一定抗凝活性，于思雨[10]以抗凝血活性為指標(biāo)，將寬體金線蛭蛋白酶酶解液經(jīng)超濾及葡聚糖凝膠層析后得到抗凝血活性最強部位肽的分子量為568.817 Da，抗凝血活性為640 μ/g；Zhong S等[11]對處理后的水蛭進行分離純化，得到分子量為8608 Da的抗凝血物質(zhì)，命名為“螞蟥多肽”，經(jīng)推測其結(jié)構(gòu)為63個氨基酸殘基形成的肽鏈上鏈接一個分子量為1898 Da的糖鏈，與水蛭素同源。丁月珠[12]將水蛭酶解物采用分級超濾法，獲得大于10 KDa和小于10 KDa兩類肽段，以外翻腸囊為模型分析其不同肽段經(jīng)腸吸收后的抗凝血作用，發(fā)現(xiàn)水蛭酶解物具有抗凝血作用的物質(zhì)集中在分子量小于10 KDa肽段。

土鱉蟲具有破血逐瘀、續(xù)筋接骨的功效[13]，臨床常將其采用水煎煮或打粉入藥，存在腥臭味重、患者服用量大等缺點。為獲得土鱉蟲抗凝活性成分，提高藥材利用率，田晨穎等[14]以總肽含量、抗凝活力等為指標(biāo)優(yōu)選土鱉蟲酶解工藝，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用仿生酶解法獲得的酶解產(chǎn)物具有更強的抗凝活性，酶解液總肽含量為26.22 mg/ml，相對其它酶解法，仿生酶解法可最大限度利用藥材。

蜈蚣具有息風(fēng)止痙、通絡(luò)止痛的功效，常用于肝風(fēng)內(nèi)動、痙攣抽搐、半身不遂，黃能聽[15]以APTT為考察指標(biāo)，將蜈蚣仿生酶解液通過分離純化得到一組分F3-3-2，具有很強的抗凝效果，經(jīng)MADIL-TOF-MS質(zhì)譜分析顯示其為小分子肽類；另一組分F3-3-3雖具有較高的純度，但抗凝效果不明顯，揭示蜈蚣中發(fā)揮抗凝血作用的為一定分子量范圍的肽類混合物而非單一成分。

上述研究表明，來源于水蛭、土鱉蟲等動物藥的活性肽具有明顯的抗凝血作用，當(dāng)前研究獲得的抗凝血活性肽組分仍多為混合物，通過進一步分離純化獲得活性單體或質(zhì)量穩(wěn)定組分，具有較高的研究及應(yīng)用價值。

2調(diào)節(jié)血脂

土鱉蟲為鱉蠊科昆蟲地鱉（Eupolyphaga sinensis Walker）及中華冀土鱉（Steleophaga plancyi Boleny）的干燥雌蟲體，是常用活血化瘀類中藥。多項研究表明[16-18]，土鱉蟲具有調(diào)節(jié)血脂、抗凝等作用，土鱉蟲含有大量蛋白質(zhì)，口服后通過體內(nèi)消化酶酶解產(chǎn)生調(diào)節(jié)血脂等作用，推斷土鱉活性肽具有調(diào)節(jié)血脂等藥理活性。

董萍萍等[19]通過MADIL-TOF/TOF-MS對土鱉蟲具有調(diào)節(jié)血脂作用的組分進行氨基酸序列分析，發(fā)現(xiàn)該組分為氨基酸序列為LAPAPGTL的8肽（LL8），通過藥效學(xué)試驗發(fā)現(xiàn)，其能顯著降低大鼠血漿、肝臟中TG、TC等指標(biāo)，具有較好的調(diào)節(jié)血脂作用。在土鱉蟲活性肽調(diào)脂作用機制研究方面，姜珊等[20]對土鱉蟲經(jīng)仿生酶解、分離純化得到一含有17個氨基酸的活性肽DP17。對DP17進行固相合成后發(fā)現(xiàn)其不僅能使大鼠血清及肝臟中TG、TC等指標(biāo)顯著下降，還可使大鼠肝臟ACC和HMGC RmRNA表達以及mTORC1蛋白表達顯著降低，AMPK磷酸化蛋白表達顯著上升（P＜0.05），分析土鱉蟲活性肽DP17主要通過調(diào)控機體內(nèi)能量代謝平衡并激活A(yù)MPK/mTOR信號通路來發(fā)揮調(diào)節(jié)血脂的作用。王少平等[21]研究發(fā)現(xiàn)，土鱉蟲生物活性肽（APE）可顯著增加高脂血癥大鼠腸道乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬等的相對豐度，降低擬桿菌門、軟壁菌門的瘤胃球菌屬等的相對豐度，修復(fù)腸道菌群譜，推測土鱉蟲活性肽還可經(jīng)腸道菌群干預(yù)脂質(zhì)代謝途徑發(fā)揮降血脂的功效。

臨床常用調(diào)脂藥物如他汀類常會引起肌酸激酶升高甚至橫紋肌溶解等不良反應(yīng)，通過酶解土鱉蟲后分離純化獲得具有較高調(diào)脂作用的活性肽，具有較高的臨床應(yīng)用價值，其調(diào)脂機制及安全性值得進一步研究。

3抗氧化

疲勞、疾病及衰老產(chǎn)生的一大原因，是由于各種自由基在一定條件下與體內(nèi)脂肪酸、蛋白質(zhì)等物質(zhì)作用，使得相關(guān)細胞的結(jié)構(gòu)與功能被破壞[22]，因此，抗氧化物質(zhì)在對抗人體衰老、疾病中占據(jù)重要地位。

阿膠具有補血滋陰、潤燥止血的作用，常用于血虛萎黃、肌萎無力、眩暈心悸等臨床病癥的治療，但阿膠常需煬化后服用，也具有一定的滋膩性，直接口服利用率較低。樊雨梅等[23]采用復(fù)合酶法酶解阿膠，獲得的阿膠低聚肽分子量主要集中在900 Da以下，研究發(fā)現(xiàn)阿膠低聚肽清除DPPH、ABTS自由基和減輕H2O2誘導(dǎo)的成纖維細胞氧化損傷的效果優(yōu)于阿膠，通過氨基酸分析發(fā)現(xiàn)阿膠低聚肽疏水性氨基酸占氨基酸總量比例較高（46.23%），與相關(guān)文獻[24]報道的抗氧化能力與疏水性氨基酸含量一致。李笑塵等[25]采用仿生酶解法將阿膠珠酶解獲得酶解物并對其進行分離，分別對阿膠珠酶解物及其不同分離部位進行體外抗氧化能力測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)體外抗氧化活性最強的部位為GFC-1。利用LC-ESI-MS/MS結(jié)合TurboSE-QUEST檢索軟件及Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫從GFC-1中鑒定出9個小分子肽，并從中識別出高重復(fù)核心序列GPAGPP*GPP*（P*為羥脯氨酸），發(fā)現(xiàn)GFC-1部分肽段與文獻中已知的某些抗氧化肽序列具有相同序列片段GPP*，并且具有已報道的能夠提高抗氧化活性的氨基酸殘基。

其它動物類中藥活性肽同樣具有抗氧化活性，尹娜等[26]研究發(fā)現(xiàn)將寬體金線蛭經(jīng)木瓜蛋白酶酶解所得酶解液具有較高抗氧化活性，尤其是經(jīng)CM Sepharose FF分離后獲得的短肽抗氧化活性明顯強于抗壞血酸，經(jīng)Q-TOF檢測，抗氧化活性肽分子量大多為130.96～330.34 Da。海馬具有溫腎壯陽、散結(jié)消腫的作用，常用于腎虛作喘、虛勞健忘等病癥的治療[27]，研究表明氧化應(yīng)激與慢性疲勞即中醫(yī)之虛勞相關(guān)[28]。吳靖娜等[29]研究發(fā)現(xiàn)將海馬以風(fēng)味蛋白酶進行酶解，通過抗氧化試驗發(fā)現(xiàn)海馬酶解活性肽的DPPH清除率為92.758%，還原力為1.091，具有較高的抗氧化活性。

以上研究表明來源于阿膠、海馬等動物類中藥經(jīng)酶解后獲得的活性肽具有明顯的抗氧化活性，也提高了原藥物的利用率，但值得注意的是，當(dāng)前活性肽抗氧化活性研究以體外實驗為主，體內(nèi)抗氧化、抗疲勞等效果如何需要進一步研究進行明確。

4免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤

臨床常用抗腫瘤藥物如氟尿嘧啶、環(huán)磷酰胺等常含有酰胺鍵即肽鍵，動物藥經(jīng)酶解后獲得的活性肽由諸多不同肽鍵組成，從中篩選具有抗腫瘤活性的組分值得研究。李欽青等[30]發(fā)現(xiàn)通過仿生酶解使壁虎含有的蛋白質(zhì)酶解成小分子肽后，對S180和H22荷瘤小鼠的抑瘤率均明顯高于壁虎原粉與水煎煮液（P＜0.05）。王穎等[31]比較不同蛋白酶酶解天龍對肺腺癌A549細胞的抑制率，發(fā)現(xiàn)采用胃蛋白酶、彈性蛋白酶組的水解度均較高，但通過MTT法測定酶解后活性肽對肺腺癌A549細胞的抑制率發(fā)現(xiàn)，彈性蛋白酶組抑制率較高，而胃蛋白酶組沒有抑制作用，分析其可能是由于酶切位點不同導(dǎo)致所得活性肽的氨基酸序列不同。

王瑩雪等[32]利用分子對接技術(shù)對阿膠模擬消化產(chǎn)物中的六肽、七肽和八肽進行活性篩選，篩選出了氨基酸序列為ADGVAGPK的阿膠肽可與抗腫瘤靶標(biāo)APN發(fā)生高度結(jié)合，是阿膠模擬胃腸道消化產(chǎn)物中最具潛力的抗腫瘤肽。席瑋等[33]研究發(fā)現(xiàn)單純蛤蚧肽組分連續(xù)灌胃12 d可顯著提升S180荷瘤小鼠的腹腔巨噬細胞殺瘤活性及Hepal-6荷瘤小鼠的腹腔巨噬細胞吞噬功能，還可顯著提高脾淋巴細胞增殖能力及細胞活性，與環(huán)磷酰胺（CTX）聯(lián)合應(yīng)用時蛤蚧肽組分能使受抑制的上述免疫指標(biāo)得到改善，并能顯著提高抑瘤率。

上述研究表明，壁虎、阿膠等動物類中藥的活性肽具有明顯的抗腫瘤活性，有必要通過進一步分離純化，明確其抗腫瘤活性成分及作用機制，篩選出具有較高抗腫瘤作用的活性肽。

5保肝

鱉甲臨床常用于肝臟相關(guān)疾病的治療，一些以鱉甲為君藥的中成藥如復(fù)方鱉甲軟肝片、鱉甲煎丸等均具有較好的保肝作用。鱉甲含有豐富的膠原蛋白、活性肽，但臨床應(yīng)用時常需先煎、久煎以便于其有效成分溶出，將鱉甲通過酶解或其它方式處理獲得有效活性肽組分，從中篩選具有顯著保肝作用的組分，以期提高治療效果、提高藥材利用率。

血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）是延緩肝纖維化的關(guān)鍵靶點之一。楊丹等[34]以提取率和ACE抑制率為指標(biāo)，優(yōu)選鱉甲活性肽類成分制備工藝，發(fā)現(xiàn)以堿性蛋白酶酶解所得酶解液對ACE抑制率最好，IC50值為3.20 mg/ml，肽類組分提取率為12.56%。在抗肝纖維化機制研究方面，陳冠新[35]研究發(fā)現(xiàn)，從鱉甲中獲得的寡肽I-C-F-6可明顯降低p-65和β-catenin蛋白的表達，從而可同時抑制Wnt/β-catenin與NF-κB信號通路，能夠顯著改善肝纖維化大鼠的肝纖維化程度。熊莎[36]研究也發(fā)現(xiàn)，鱉甲活性肽不僅能通過抑制TGF-β1誘導(dǎo)的HSC-T6細胞的活化增殖，減少細胞外基質(zhì)生成并促進其降解，發(fā)揮抗肝纖維化作用，還能通過抑制TGF-β1/Smad信號通路進而抑制HSC-T6細胞的活化增殖，同時抑制NF-κB信號通路激活減輕炎癥反應(yīng)，進一步發(fā)揮抗肝纖維化療效。

上述研究表明來源于鱉甲中的活性肽具有明顯保肝作用，其可通過抑制相關(guān)細胞活化增殖和信號通路等多種機制產(chǎn)生較好的保肝作用。

6促進骨細胞增殖

鹿茸為鹿科動物梅花鹿或馬鹿的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，具有壯腎陽、益精血、強筋骨等功效，臨床常用于治療腎陽不足、精血虧虛、筋骨痿軟等。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[37]，鹿茸中含有豐富的多肽和多糖，是鹿茸中的主要有效成分，相關(guān)活性成分可通過上調(diào)BMP-2/Smad1、Smad5/Runx2信號通路提高骨密度，預(yù)防骨組織破壞。

對于鹿茸促進骨細胞增殖有效組分研究方面，王亞蘋[38]將鹿茸蛋白液進行超濾，收集不同分子量段的超濾液，考察其對小鼠成骨細胞MC3T3-E1的增殖作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分子量為1～3 KDa、3～10 KDa的超濾液對成骨細胞有顯著增殖作用，說明鹿茸活性肽是“強筋骨”主要有效組分。王華等[39]通過制備型HPLC對篩選出的具有促進成骨細胞增殖的鹿茸肽組分（VAP-B）進行進一步純化，得到相對分子量約200～600 Da的小肽組分（VAP-B2），通過細胞周期分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)其能增加細胞周期S期的DNA含量，提高骨形成標(biāo)志物堿性磷酸酶（ALP）活性，提示鹿茸寡肽具有促進成骨細胞增殖的作用。

相關(guān)研究表明，鹿茸活性肽具有明顯促進成骨細胞增殖的作用，可提高骨密度，預(yù)防骨組織破壞，在治療骨質(zhì)疏松癥等方面具有較高的臨床研究價值?？紤]到鹿茸藥材價格較為昂貴，有必要對鹿茸活性肽和原藥材促進骨細胞增殖的成本、收益和安全性進行綜合考量，以便為患者提供更安全、有效和經(jīng)濟的治療方案。

7其它藥理作用

7.1降血糖 "鹿茸對于降血糖具有積極作用，包美麗[40]將馬鹿茸采用Alcalase和Flavourzyme雙酶酶解，酶解產(chǎn)物的質(zhì)量濃度在3 mg/ml時對α-葡萄糖苷酶活性抑制率達94%，通過超濾、Sephadex LH-20葡聚糖凝膠色譜進一步分離純化得到4個組分，其中PⅢ（0.05 mg/ml）對HepG2細胞存活率的影響高于胰島素陽性對照組，在高劑量時對胰島β細胞的增值率接近陽性對照組，具有良好的降血糖作用，進一步分析該組分分子量主要集中在420.46～749.4 Da。

7.2抗癲癇 "全蝎具有熄風(fēng)鎮(zhèn)痙、通絡(luò)止痛的功效，常用于肝風(fēng)內(nèi)動、痙攣抽搐，蝎毒是全蝎抗癲癇的主要有效組分[41]。Zhou XH等[42]采用三步色譜法在蝎毒中首次分離得到了一種具有抗癲癇作用的活性肽，并測定了其N端50個氨基酸序列。邊六交等[43]將蝎毒分離得到一個能夠顯著延長驚厥SD大鼠的癲癇發(fā)作時間的活性肽。

7.3促創(chuàng)面愈合 "中醫(yī)外科用藥常“以皮補皮”，豬皮與人類皮膚結(jié)構(gòu)具有高度相似性，臨床被廣泛應(yīng)用于創(chuàng)面愈合及燒傷植皮等[44，45]，但也存在應(yīng)用不便及等存在抗原性等缺點。豬皮主要含膠原蛋白，將豬皮通過仿生酶解法進行酶解，通過電滲析除鹽、超濾及葡聚糖凝膠柱層析分離得到豬皮膠原蛋白肽，能有效促進大鼠創(chuàng)傷組織堿性成纖維細胞生長，測定豬皮促創(chuàng)面愈合活性肽分子量集中在800～2000 Da[46]。

7.4補血升白 "阿膠可用于補血升白，龐萌萌等[47]將阿膠分別進行胰蛋白酶酶解及仿生酶解，采用凝膠排阻色譜法測定兩種酶解方式獲得的酶解液中活性肽的分子量主要集中在3.7×103 Da左右，通過藥效學(xué)試驗發(fā)現(xiàn)阿膠活性肽能顯著提高血虛小鼠的紅細胞計數(shù)（RBC）、血紅蛋白（Hb）水平，具有明顯的補血作用；阿膠活性肽還能顯著提高環(huán)磷酰胺所致白細胞降低小鼠的白細胞計數(shù)（WBC）水平，且優(yōu)于阿膠原液，具有顯著升白作用。

綜上可知，來源于動物類中藥的活性肽具有多種藥理活性且分子量主要集中在5000 Da以下，通過酶解分離純化獲得活性肽，不僅能更好地發(fā)揮原動物藥的功效，部分還拓展了動物藥的臨床應(yīng)用范圍。

8總結(jié)與展望

中醫(yī)認為動物類中藥為“血肉有情之品”，有“行走通竄之物”之說，在破血逐瘀、攻堅破積等作用上常常是植物藥、礦物藥所不能替代的，但動物類中藥普遍存在服用不便及吸收利用率較低的問題。動物類中藥含有大量的蛋白質(zhì)及多肽，更容易通過仿生酶解等酶解方式，將大分子蛋白酶解成藥理活性基團暴露的小分子活性肽，產(chǎn)生多種生物活性。通過文獻綜述發(fā)現(xiàn)以原有動物類中藥的功效為導(dǎo)向，通過酶解等手段可獲得藥理作用與原動物類中藥功效相近的生物活性肽，這就為在動物類中藥中尋找新藥提供了新思路。

當(dāng)前動物類中藥活性肽研究也存在幾個問題：部分生物活性肽組分缺乏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及穩(wěn)定性研究，不同制備批次間的活性肽在分子量分布、肽指紋圖譜、氨基酸含量及穩(wěn)定性等方面的差異需要進一步研究；黃酮類、強心苷類等成分都具有特征性的母核結(jié)構(gòu)，具有相同藥理作用的活性肽是否具有相同活性位點或肽段，不同氨基酸序列帶來何種構(gòu)效關(guān)系，以及活性肽對體內(nèi)的藥理作用及安全性等問題都有待進一步研究。

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收稿日期：2022-12-02；修回日期：2023-01-31

編輯/王萌