不同微生物檢驗(yàn)法對(duì)陰道內(nèi)念珠菌感染情況的檢驗(yàn)效果比較

摘要：目的 "觀察不同微生物檢驗(yàn)法對(duì)陰道內(nèi)念珠菌感染情況的檢驗(yàn)效果。方法 "選取2021年1月-2023年1月在我院診治的63例陰道炎患者為研究對(duì)象，以培養(yǎng)鑒定法為金標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)檢測(cè)方法分為顯色法（n=21）、真菌熒光染色法（n=21）、革蘭染色法（n=21），比較不同檢驗(yàn)方法結(jié)果、念珠菌檢出率以及ROC曲線分析念珠菌感染的診斷效能。結(jié)果 "真菌熒光染色法陰道內(nèi)念珠菌感染檢驗(yàn)結(jié)果與顯色法和革蘭染色法陽(yáng)性、陰性檢驗(yàn)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；真菌熒光染色法陰道內(nèi)念珠菌檢出率為90.48%，高于顯色法的66.67%、革蘭染色法的71.43%（P＜0.05）；ROC曲線分析，真菌熒光染色法診斷念珠菌感染敏感性、特異性均高于顯色法、革蘭染色法（P＜0.05）；真菌熒光染色法、革蘭染色法、顯色法ROC曲線下面積分別為0.93、0.73、0.74，真菌熒光染色法臨床診斷價(jià)值更高。結(jié)論 "真菌熒光染色法對(duì)陰道內(nèi)念珠菌感染情況檢驗(yàn)具有顯著效果，可提高陽(yáng)性檢出率，為臨床治療提供可靠的參考依據(jù)，值得臨床應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：不同微生物檢驗(yàn)法；陰道內(nèi)念珠菌；感染；檢驗(yàn)效果

中圖分類號(hào)：R446.5；R711.31 " " " " " " " " " " " " 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A " " " " " " " " " " " " " " DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2023.24.033

文章編號(hào)：1006-1959（2023）24-0144-04

Effect Comparison of Different Microbiological Tests on Candida Infection

in the Vagina

CHEN Xin-lan

（Department of Laboratory，Wannian County People's Hospital，Wannian 335500，Jiangxi，China）

Abstract：Objective "To observe the effect of different microbiological tests on candida infection in vagina.Methods "A total of 63 patients with vaginitis diagnosed and treated in our hospital from January 2021 to January 2023 were selected as the research objects. The culture identification method was used as the gold standard. According to the detection methods， they were divided into chromogenic method （n=21）， fungal fluorescence staining method （n=21）， and Gram staining method （n=21）. The results of different test methods， the detection rate of Candida were compared， and the ROC curve were used to analyze the diagnostic efficacy of Candida infection.Results "The results of Candida infection in vagina by fungal fluorescence staining were significantly different from those of positive and negative test results by chromogenic method and Gram staining method （Plt;0.05）. The detection rate of candida in the vagina by fungal fluorescence staining was 90.48%， which was higher than 66.67% by chromogenic method and 71.43% by Gram staining method （Plt;0.05）. ROC curve analysis showed that the sensitivity and specificity of fungal fluorescence staining in the diagnosis of candida infection were higher than those of chromogenic method and Gram staining method （Plt;0.05）. The area under the ROC curve of fungal fluorescence staining， Gram staining and chromogenic method were 0.93， 0.73， 0.74， respectively. The clinical diagnostic value of fungal fluorescence staining was higher.Conclusion "Fungal fluorescence staining has a significant effect on the detection of candida infection in the vagina， which can improve the positive detection rate and provide a reliable reference for clinical treatment. It is worthy of clinical application.

Key words：Different microbiological methods;Candida in vagina;Infection;Test effect

陰道正常菌群中存在20多種微生物，不同菌群之間相互限制，并互相配合共同建立陰道微生物平衡[1]。念珠菌感染是臨床上常見的感染問(wèn)題，會(huì)發(fā)生于口腔、皮膚等部位。陰道念珠菌感染率近年來(lái)也逐漸升高，同時(shí)發(fā)病年齡趨于年輕化，嚴(yán)重影響女性身心健康[2，3]。念珠菌最常見的是白色念珠菌，以及其他數(shù)量少或者不常見的念珠菌，例如光滑念珠菌、熱帶念珠菌和克柔念珠菌等，其中致病性最高的是白色念珠菌[4]。由于抗菌藥的廣泛應(yīng)用，病原菌存在一定的耐藥性，臨床治療難度較大[5]。對(duì)此，需進(jìn)行微生物檢驗(yàn)，明確陰道內(nèi)念珠菌感染情況，從而給予針對(duì)性的治療[6]。目前陰道內(nèi)念珠菌感染性疾病的診斷主要是依靠顯色法、革蘭染色法、真菌熒光染色法等[7]。但是不同方法檢驗(yàn)結(jié)果存在差異，如何進(jìn)行科學(xué)合理的選擇臨床尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)[8]。本研究結(jié)合2021年1月-2023年1月在我院診治的63例陰道炎患者臨床資料，比較不同微生物檢驗(yàn)法對(duì)陰道內(nèi)念珠菌感染情況的檢驗(yàn)效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 "選取2021年1月-2023年1月在萬(wàn)年縣人民醫(yī)院診治的63例陰道炎患者為研究對(duì)象，依據(jù)檢測(cè)方法分為顯色法（n=21）、真菌熒光染色法（n=21）、革蘭染色法（n=21）。顯色法患者年齡20～63歲，平均年齡（43.20±1.78）歲；病程1～4年，平均病程（2.11±0.45）年。真菌熒光染色法患者年齡22～62歲，平均年齡（42.98±2.01）歲；病程1～5年，平均病程（2.54±0.60）年。革蘭染色法患者年齡21～64歲，平均年齡（43.67±2.15）歲；病程1～5年，平均病程（2.40±0.62）年。三組患者的年齡、病程比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可比較。本研究納入所有患者均知情且自愿參加，簽署知情同意書。

1.2納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn) "①均確診為陰道內(nèi)念珠菌感染[9]；②臨床資料完善；③納入前未進(jìn)行相關(guān)治療。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn) "①合并陰道出血者；②合并嚴(yán)重感染者；③合并惡性腫瘤者。

1.3方法

1.3.1念珠菌培養(yǎng) "選定的標(biāo)準(zhǔn)菌株都是由杭州天和微生物試劑公司提供，其中包含熱帶念珠菌以及白色念珠菌，并含克柔念珠菌與光滑念珠菌。把以上的菌株全部接種至專門的培養(yǎng)基內(nèi)，且均勻地予以涂布，然后在培養(yǎng)箱里面30 ℃環(huán)境下連續(xù)培養(yǎng)48 h[10]。

1.3.2顯色法 "檢測(cè)前使無(wú)菌拭子收集患者的陰道側(cè)壁分泌物。將收集樣本接種到念珠菌顯色培養(yǎng)基內(nèi)，然后依據(jù)顯示顏色趨于進(jìn)行分類。紫色：為光滑念珠菌；綠色：為白色念珠菌；粉色：為克柔念珠菌；藍(lán)灰色：為熱帶念珠菌[11]。

1.3.3真菌熒光染色法 "取有陰道分泌物的拭子頭部放進(jìn)液基細(xì)胞和微生物處理保存試劑中充分振蕩混勻。將拭子上的陰道分泌物充分轉(zhuǎn)移到試劑液中，擰緊蓋子，盡快送檢。將過(guò)濾器（孔徑為3 μm）、載玻片安裝于制片儀中，將采集好的標(biāo)本液倒入細(xì)胞過(guò)濾器中，啟動(dòng)制片程序。真空抽吸15 s，轉(zhuǎn)移5 s，轉(zhuǎn)移壓力15 mmHg，使用移液器及一次性吸嘴吸取50 μl真菌熒光染色液滴在制好樣的載玻片上，染色液覆蓋樣本為準(zhǔn)，持續(xù)染色1 min。蓋上蓋玻片，吸去多余的染色液，置于熒光顯微鏡下觀察。如果發(fā)現(xiàn)10個(gè)及以上強(qiáng)熒光藍(lán)色典型橢圓形白色假絲酵母菌孢子，或1個(gè)及以上強(qiáng)熒光藍(lán)色典型分支狀或鏈狀的白色假絲酵母菌菌體結(jié)構(gòu)，即為陽(yáng)性。未發(fā)現(xiàn)足夠的可定義為陽(yáng)性的典型特異性染色時(shí)即為陰性。發(fā)現(xiàn)不典型的疑似結(jié)果及無(wú)法解釋的結(jié)果時(shí)，則需再次采集樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。真菌熒光染色液由濟(jì)南博萊生物技術(shù)有限公司提供。

1.3.4革蘭染色法 "檢測(cè)前使無(wú)菌拭子收集患者的陰道側(cè)壁分泌物。將采集的分泌物涂片，待涂片干燥以后革蘭染色、鏡檢，鏡下能夠找到卵圓形或者圓形酵母樣細(xì)胞，叢生集聚或者單獨(dú)散在分布，呈革蘭染色陽(yáng)性，同時(shí)染色不均勻，部分能夠看見假菌絲，能夠給予初步判斷。

1.4觀察指標(biāo) "比較不同檢驗(yàn)方法結(jié)果、念珠菌檢出率以及ROC曲線分析念珠菌感染的診斷效能。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 "采用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS 21.0版本對(duì)本研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用（x±s）表示符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，比較采用？字2檢驗(yàn)，P＜0.05說(shuō)明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同檢驗(yàn)方法結(jié)果比較 "真菌熒光染色法陰道內(nèi)念珠菌感染檢驗(yàn)結(jié)果與顯色法和革蘭染色法陽(yáng)性、陰性檢驗(yàn)結(jié)果比較（P＜0.05），見表1。

2.2不同檢驗(yàn)方法念珠菌檢出率比較 "真菌熒光染色法陰道內(nèi)念珠菌檢出率高于顯色法及革蘭染色法（P＜0.05），見表2。

2.3 ROC曲線分析 "真菌熒光染色法診斷念珠菌感染敏感性為94.44%、特異性為66.67%，均高于顯色法的72.22%、33.33%，革蘭染色法的77.78%、33.33%（P＜0.05）；真菌熒光染色法、革蘭染色法、顯色法ROC曲線下面積分別為0.93、0.73、0.74，真菌熒光染色法臨床診斷價(jià)值更高，見圖1。

3討論

機(jī)體在正常情況下，念珠菌的存在會(huì)與機(jī)體內(nèi)其他有益菌保持相對(duì)平衡，不會(huì)對(duì)患者造成危害。但是相關(guān)研究顯示[12，13]，機(jī)體一旦出現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)缺乏或免疫力降低，就會(huì)破壞患者體內(nèi)有益菌平衡，從而引起念珠菌感染。因此，選擇一種合理的檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)患者陰道念珠菌感染具有重要的價(jià)值。研究證實(shí)[14，15]，外界多種因素會(huì)影響女性陰道內(nèi)微生物平衡態(tài)，從而使病原菌大量繁殖，最終發(fā)生念珠菌感染，從而引起陰道炎癥。長(zhǎng)期抗生素治療會(huì)破壞細(xì)菌的平衡，增加臨床治療難度。隨著微生物檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，臨床上可依據(jù)微生物檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行干預(yù)和治療，從而獲得良好的治療效果[16]。顯色法是一種傳統(tǒng)的操作方法，在操作過(guò)程中接種次數(shù)必須要2次，增加了念珠菌的感染概率，增加檢驗(yàn)結(jié)果的假陽(yáng)性風(fēng)險(xiǎn)[17]。而真菌熒光染色是與之相較操作更為簡(jiǎn)單，可以有效降低在操作過(guò)程中造成的不必要感染的概率，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[18]。但是目前關(guān)于以上兩種方法在陰道內(nèi)念珠菌感染情況檢驗(yàn)中的線管研究無(wú)明確定論，具體的優(yōu)劣勢(shì)存在爭(zhēng)議，具體的檢測(cè)價(jià)值還需要進(jìn)一步探究。

本研究結(jié)果顯示，真菌熒光染色法陰道內(nèi)念珠菌感染檢驗(yàn)結(jié)果與顯色法和革蘭染色法檢驗(yàn)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示顯色法和真菌熒光染色法、革蘭染色法對(duì)陰道內(nèi)念珠菌感染情況檢驗(yàn)存在差異，相比較真菌熒光染色法檢測(cè)陽(yáng)性率更高，可一定程度減小假陽(yáng)性。該結(jié)論與胡春麗[19]的研究結(jié)果相似。分析認(rèn)為，真菌熒光染色法實(shí)際操作簡(jiǎn)單，并且可快速得到檢測(cè)結(jié)果，最重要的是陰道分泌物均勻的、薄薄的分布在玻片上，更利于在顯微鏡下觀察，從而可提高陽(yáng)性檢出率[20]。同時(shí)，真菌熒光染色法陰道內(nèi)念珠菌檢出率為90.48%，高于顯色法檢出率的66.67%、革蘭染色法的71.43%（P＜0.05），該結(jié)論進(jìn)一步證實(shí)采用真菌熒光染色法檢驗(yàn)陰道內(nèi)念珠菌可更準(zhǔn)確明確其分布特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)以白色念珠菌為主，其次為熱帶念珠菌。對(duì)此，臨床治療陰道炎可選擇對(duì)白色念珠菌、熱帶念珠菌敏感的藥物，提升對(duì)癥治療的效果[21]。ROC曲線分析，真菌熒光染色法法診斷念珠菌感染敏感性、特異性均高于顯色法、革蘭染色法（P＜0.05）。真菌熒光染色法、革蘭染色法、顯色法ROC曲線下面積分別為0.93、0.73、0.74，真菌熒光染色法臨床診斷價(jià)值更高，可見真菌熒光染色法檢驗(yàn)方式，可得到較為準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果，利于陰道內(nèi)念珠菌感染的診斷。因?yàn)?，真菌熒光染色法改變了傳統(tǒng)顯色檢測(cè)方法的局限性，加之真菌熒光染色液中含有特殊熒光素酶，可以高親和力與真菌細(xì)胞壁上的多糖結(jié)合，從而在熒光顯微鏡下可清楚的觀察到真菌形態(tài)在特定激光下產(chǎn)生的熒光，且真菌熒光染色液能溶解分泌物中的上皮細(xì)胞、白細(xì)胞等成分，有助于更清晰的觀察真菌結(jié)構(gòu)。同時(shí)該檢驗(yàn)方法成本低，所需時(shí)間短，背景清晰，相較革蘭染色法、顯色法，真菌熒光染色法具備顯著的優(yōu)點(diǎn)，且有更高的診斷價(jià)值。

綜上所述，真菌熒光染色法檢驗(yàn)陰道內(nèi)念珠菌感染情況，可為臨床念珠菌感染提供診斷依據(jù)，且其操作簡(jiǎn)單，診斷檢出率高，同時(shí)不需要很昂貴的實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備，較之傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法有較大的優(yōu)勢(shì)。

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收稿日期：2023-08-09；修回日期：2023-08-21

編輯/肖婷婷