術(shù)前DCE-MRI 聯(lián)合miR-34a在乳腺癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移危險度分層中作用研究?

肖 虎 戴帆琦 程 濤 惠 鵬

安康市中心醫(yī)院 (陜西 安康 725000)

乳腺癌發(fā)病率高居我國女性惡性腫瘤首位，具有發(fā)病增速快、年輕化等特點，是女性癌癥死亡的主要原因之一[1]。目前手術(shù)是乳腺癌的主要治療手段，但部分患者治療后仍可能出現(xiàn)復發(fā)轉(zhuǎn)移，影響患者生命周期與生存質(zhì)量，若術(shù)前能以無創(chuàng)性方法，準確預測患者術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的危險度，對指導臨床隨訪管理、治療等均具重要意義[2]。動態(tài)增強磁共振成像(dynamic contrast-enhanced magnetic resonance imaging，DCE-MRI)是乳腺癌篩查常用的一種影像學工具，不僅能顯示病灶形態(tài)學特征，還能通過注射造影劑，反映腫瘤內(nèi)部血流動力學特征，無創(chuàng)評估病灶血管滲透性、血流灌注信息[3]。與既往研究不同的是，本研究充分利用DCE-MRI掃描數(shù)據(jù)，又深度挖掘了每個不同期相腫瘤形態(tài)學特征，采用基于單期的形態(tài)學和基于多期圖像的功能性血流動力學參數(shù)，用以探尋乳腺癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移危險度的預測因子。微小RNA-34a(microRNA-34a，miR-34a)在體外細胞試驗中被證實可影響乳腺癌中的細胞增殖、侵襲和遷移[4]。且在臨床研究中，乳腺癌組織中miR-34a表達量低于配對的癌旁組織，腫瘤分期越高，miR-34a表達量越低[5]。而當前普遍認為，乳腺癌分期與患者病情轉(zhuǎn)歸相關(guān)，所以推測miR-34a可能與復發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)[6]?；诖吮狙芯刻接懶g(shù)前DCE-MRI聯(lián)合miR-34a在乳腺癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移危險度分層中作用，期待為乳腺癌患者術(shù)后管理提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年4月至2021年5月276例乳腺癌患者作為研究對象，均為女性，年齡33～79歲，平均(60.19±9.36)歲。

納入標準：符合乳腺癌診斷標準[7]；首次確診，既往無相關(guān)治療史；診斷時無遠處轉(zhuǎn)移；具有手術(shù)治療指征；簽署知情同意書。排除標準：伴其他原發(fā)性惡性腫瘤者；假體置入等造成的MRI圖像不能滿足診斷要求者；有DCE-MRI檢查禁忌癥者；伴急性感染類疾病者；隨訪依從性較差者。以門診方式隨訪1年，根據(jù)術(shù)后1年是否發(fā)生復發(fā)轉(zhuǎn)移分為高危組(發(fā)生復發(fā)轉(zhuǎn)移)、低危組(未發(fā)生復發(fā)轉(zhuǎn)移)。

1.2 方法1.2.1 DCE-MRI檢測 就診時采用1.5 T磁共振掃描儀(美國GE公司Excite HD)，指導患者俯臥位于檢查床上，8通道乳腺專用相控陣表面線圈，雙乳自然下垂。啟動設(shè)備開始掃描，常規(guī)三平面定位，平掃序列為雙側(cè)乳腺快速自旋回波矢狀面T2WI+脂肪抑制，層間距1mm，視野20×20cm，回波時間81ms，激勵次數(shù)4次，層厚5mm，重復時間4040ms，矩陣320×224。之后做橫軸面乳腺動態(tài)增強容積成像多期相動態(tài)增強磁共振，通過手背靜脈注射美國通用電氣藥業(yè)的釓雙胺對比劑，速率2.5mL/s，注射量0.1mmol/kg，連續(xù)無間隔掃描8次，視野36×36cm，回波時間2.9ms，激勵次數(shù)0.8，層厚3.6mm，重復時間6.1ms，矩陣350×350，每個期相掃描時間58s。

分別由兩名副主任醫(yī)師閱片，根據(jù)乳腺影像報告和數(shù)據(jù)系統(tǒng)進行分析，包括病灶內(nèi)部強化特征、病灶邊緣、背景實質(zhì)強化、全乳血管增加程度、時間信號強度曲線類型、病灶形態(tài)，采用美國GE AW4.3工作站繪制時間信號強度曲線，DCE-MRI特征的判斷取兩名副主任醫(yī)師的一致意見作為最終結(jié)果，若兩者有爭議，可邀請主任醫(yī)師協(xié)助判斷，直至意見一致。并將掃描數(shù)據(jù)輸入Omni-Kinetics軟件，運用Reference region模型，參照選取病灶感興趣區(qū)的對側(cè)胸大肌，手動勾畫感興趣，軟件自動生成DCEMRI血流動力學參數(shù)：血漿容積分數(shù)(Vp)、達峰時間(TTP)、速率常數(shù)(Kep)、對比劑最大濃度值(Max Slope)、時間信號強度曲線下面積(AUC)、時間信號強度曲線最大斜率值(Max Cone)。

1.2.2 miR-34a檢測 就診時采集空腹肘靜脈血5mL，使用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法檢測血清miR-34a表達。取適量血標本，先提取RNA，再進行反轉(zhuǎn)錄，運用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)儀(美國ABI公司，7500型)進行擴增反應(yīng)，miR-34a上下游引物序列分別為5′-CGTCACCTCTTAGGCTTGGA-3′、5′-C AT TG GTGTCGT TGTG C TC T-3′，內(nèi)參G A P D H 上下游引物序列分別為5′-G A A G GTG A A G GTCG G A GTC-3′、5′-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3′，miR-34a表達量以相對內(nèi)參表示。

1.3 統(tǒng)計學方法采用SPSS 24.0軟件，計數(shù)資料用n(%)表示，以χ2檢驗，計量資料以()表示，以t檢驗；采用多因素Logistic回歸分析術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)影響因素，采用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic，ROC)分析術(shù)前DCEMRI、miR-34a及聯(lián)合評估復發(fā)轉(zhuǎn)移危險度的價值。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較高危組年齡、腫瘤直徑、患病側(cè)、臨床分期、體質(zhì)量指數(shù)、術(shù)后輔助治療、手術(shù)方式與低危組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組基線資料比較

2.2 兩組DCE-MRI特征比較高危組病灶內(nèi)部強化特征、病灶邊緣、背景實質(zhì)強化、全乳血管增加程度、時間信號強度曲線類型、病灶形態(tài)與低危組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2、圖1-4。

圖1-圖4 兩組DCE-MRI特征；比較高危組：右乳后方、上方、外側(cè)見多發(fā)結(jié)節(jié)狀強化灶；低危組：左乳后上見不規(guī)則腫塊樣強化信號影呈段樣分布延伸至乳頭

表2 兩組DCE-MRI特征比較[n(%)]

2.3 兩組DCE-MRI血流動力學參數(shù)比較高危組Max Slope、AUC、Max Cone低于低危組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組DCE-MRI血流動力學參數(shù)比較

2.4 兩組miR-34a 表達比較高危組血清miR-34a 為(0.42±0.11)，低危組為(0.92±0.30)。高危組血清miR-34a低于低危組，差異有統(tǒng)計學意義(t=7.933，P<0.001)。

2.5 術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的多因素Logistic回歸分析多因素Logistic回歸分析顯示，Max Slope、AUC、Max Cone、miR-34a與術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移獨立相關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的多因素Logistic回歸分析

2.6 術(shù)前DCE-MRI、miR-34a及聯(lián)合評估復發(fā)轉(zhuǎn)移危險度的價值繪制ROC曲線顯示，Max Slope、AUC、Max Cone、miR-34a預測術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的ROC曲線下面積為0.745、0.792、0.771、0.762，四者聯(lián)合的ROC曲線下面積為0.930，見圖5、表5。

圖5 術(shù)前DCE-MRI、miR-34a及聯(lián)合評估復發(fā)轉(zhuǎn)移危險度的價值

表5 ROC分析結(jié)果

3 討論

乳腺癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移在臨床并不少見，并成為影響手術(shù)患者生存期的一個重要原因，所以對此進行研究是必要的[8]。本研究結(jié)果顯示，高危組病灶內(nèi)部強化特征、病灶邊緣、背景實質(zhì)強化、全乳血管增加程度、時間信號強度曲線類型、病灶形態(tài)與低危組比較，差異無統(tǒng)計學意義，與Lee J等[9]研究結(jié)果相似，提示DCE-MRI形態(tài)學特征與乳腺癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移無關(guān)，不能依賴DCEMRI形態(tài)學特征對乳腺癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移進行預測。

血管生成是乳腺癌細胞生長、增殖、侵襲的必要條件，且腫瘤新生血管情況與乳腺癌預后密切相關(guān)[10]。DCE-MRI能通過定量參數(shù)Vp、Kep反映腫瘤血管滲透性，Vp、Kep越高腫瘤新生血管密度和管壁通透性越高，在乳腺惡性腫瘤中Vp、Kep值高于良性腫瘤[11]。本研究結(jié)果顯示，高危組Vp、Kep、TTP與低危組相似，提示Vp、Kep、TTP與乳腺癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移無關(guān)，其原因可能有：首先本研究采用常規(guī)8期掃描，時間分辨率近似1min，所以選取了以對側(cè)胸大肌作為參照的Reference region模型；其次注射造影前使用的是默認的組織增強前T1值，未行T1 mapping掃描，個體間的差異可能對Vp、Kep數(shù)值造成了影響。TTP為半定量參數(shù)，其獲取是基于時間信號強度曲線，不受T1 mapping影響，可重復性良好。本研究高危組與低危組TTP亦相似，提示TTP與術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移亦無關(guān)。

Max Slope可反映毛細血管通透性與組織血流灌注程度，其值越高，提示血供越豐富[12]。AUC代表的是不同組織在動態(tài)增強過程一定時間內(nèi)的血流灌注量，Max Cone越高，說明病灶內(nèi)對比劑濃度越高，血供越豐富[13]。本研究結(jié)果顯示，高危組Max Slope、AUC、Max Cone低于低危組，且經(jīng)多因素Logistic回歸分析顯示，Max Slope、AUC、Max Cone與術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移獨立相關(guān)。根據(jù)既往資料[14]，乳腺癌侵及淋巴管與引流靜脈是術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的一個獨立相關(guān)危險因素。而淋巴管與引流靜脈受乳腺癌侵犯，可導致淋巴管與引流靜脈阻塞，引起對比劑流入與回流受阻，使Max Slope、AUC、Max Cone降低，因此復發(fā)轉(zhuǎn)移高?；颊進ax Slope、AUC、Max Cone低于低危患者。牛微等[15]報道，乳腺癌晚期復發(fā)患者Max Slope、AUC、Max Cone大于早期復發(fā)患者，說明Max Slope、AUC、Max Cone與復發(fā)時間呈負相關(guān)關(guān)系，本研究結(jié)論與之存在相似之處。ROC分析顯示，Max Slope、AUC、Max Cone預測術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的ROC曲線下面積為0.745、0.792、0.771，能為臨床早期預測復發(fā)轉(zhuǎn)移提供一定參考。

miR-34a上調(diào)可降低三陰性乳腺癌細胞活力、增殖和遷移，而下調(diào)miR-34a則可削弱對促癌物質(zhì)的抑制作用，增加乳腺癌細胞的增殖與遷移率[16-17]。本研究結(jié)果顯示，高危組血清miR-34a低于低危組，是術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)獨立影響因素。李琰等[18]報道納入了96例女性乳腺癌患者，發(fā)現(xiàn)發(fā)生復發(fā)轉(zhuǎn)移患者血清miR-34a低氧未發(fā)生復發(fā)轉(zhuǎn)移患者，本研究結(jié)論與之一致，佐證了miR-34a與乳腺癌復發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)。分析其原因，miR-34a降低患者，抑癌作用減弱，促癌物質(zhì)大量表達，阻礙細胞凋亡，并加速細胞周期進程，使乳腺癌增殖侵襲性增強，從而增大患者復發(fā)轉(zhuǎn)移的危險度[19-20]。ROC分析顯示，miR-34a預測復發(fā)轉(zhuǎn)移的ROC曲線下面積為0.762，呈現(xiàn)出一定預測價值。同時聯(lián)合ROC分析顯示，Max Slope、AUC、Max Cone聯(lián)合miR-34a的ROC曲線下面積為0.930，提示四者聯(lián)合能提高預測價值，所以建議聯(lián)合應(yīng)用。值得注意的是，本研究高危組病例數(shù)較少，可能會因復發(fā)部位、藥物動力學模型等因素，影響術(shù)前DCE-MRI參數(shù)與乳腺癌復發(fā)關(guān)系的判斷，下一步仍需積累更多患者，進行深入的探討。

綜上，Max Slope、AUC、Max Cone、miR-34a均與乳腺癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)，術(shù)前聯(lián)合進行DCE-MRI和miR-34a檢測，可早期無創(chuàng)、準確地預測患者術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的風險，從而指導臨床后續(xù)的管理，提高患者生存期。