基于功能模型的痹祺膠囊藥效研究

李 新 ，韓彥琪 ，卜睿臻，王春芳 , ，王 磊，姚鵬飛 , ，徐 旭 ，許 浚 ，趙專友 ，張鐵軍 *，劉昌孝 *

1.天津藥物研究院 天津市中藥質(zhì)量標(biāo)志物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300462

2.天津藥物研究院 中藥現(xiàn)代制劑與質(zhì)量控制技術(shù)國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室，天津 300462

3.天津藥物研究院 藥物成藥性評(píng)價(jià)與系統(tǒng)轉(zhuǎn)化全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300462

4.天津達(dá)仁堂京萬(wàn)紅藥業(yè)有限公司，天津 300112

5.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617

6.津藥達(dá)仁堂集團(tuán)股份有限公司，天津 300193

中藥配伍是中醫(yī)藥理論體系中的獨(dú)特領(lǐng)域，是中醫(yī)藥的優(yōu)勢(shì)與特色，其配伍理論并不是任意2 種或2 種以上同類藥物的機(jī)械拼湊，而是根據(jù)疾病的病位、病性、病勢(shì)、病程并結(jié)合藥物的性味、歸經(jīng)、功能，有選擇地通過(guò)一定的配伍相互促進(jìn)，取長(zhǎng)補(bǔ)短，從而使所組方劑“主次分明、兼顧全面、揚(yáng)長(zhǎng)避短、療效確切”[1]。方劑配伍理論與方法歸納來(lái)看基本可劃分為2 大類，分別為藥性配伍和功效配伍（效應(yīng)配伍），其中功效配伍是現(xiàn)代臨床最基本和最重要的配伍理論，根據(jù)辨證論治結(jié)果，選擇合適的藥物組成方劑，調(diào)整人體功能的偏盛偏衰[2]。痹證的發(fā)生，與體質(zhì)強(qiáng)弱、氣候條件、生活環(huán)境有密切關(guān)系。素體本虛、正氣不足是發(fā)病的內(nèi)在因素，脾胃失健、肝血虧虛、腎氣不足為病本，邪氣痹阻經(jīng)絡(luò)、筋骨，留著關(guān)節(jié)，營(yíng)衛(wèi)不通，氣血運(yùn)行受阻為病機(jī)[3]，臨床表現(xiàn)為關(guān)節(jié)的腫脹、疼痛。痹祺膠囊由馬錢(qián)子、黨參、茯苓、丹參、川芎、地龍等10 味藥配伍而成，具有益氣養(yǎng)血、祛風(fēng)除濕、活血止痛的功效，用于治療痹證之經(jīng)絡(luò)氣血痹阻之癥。全方藥效及臨床作用方面對(duì)痹祺膠囊的研究已有大量文獻(xiàn)報(bào)道，通過(guò)對(duì)136 例肝腎虧虛型膝關(guān)節(jié)炎患者的治療發(fā)現(xiàn)，玻璃酸鈉關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射聯(lián)用痹祺膠囊可正向調(diào)節(jié)機(jī)體紅細(xì)胞免疫功能，改善患者膝關(guān)節(jié)功能[4]。通過(guò)對(duì)59 例類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎伴有高血壓患者的治療發(fā)現(xiàn)，甲氨蝶呤合并痹祺膠囊后患者全血黏度、血漿黏度等血液流變學(xué)顯著改善[5]。痹祺膠囊還具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用[6]，還可通過(guò)減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)而減輕關(guān)節(jié)軟骨、滑膜細(xì)胞損傷，進(jìn)而緩解膝關(guān)節(jié)疼痛[7]。由此可觀，痹祺膠囊的功效在臨床治療中均有體現(xiàn)，而目前并無(wú)對(duì)痹祺膠囊的功效配伍有系統(tǒng)性研究。本研究通過(guò)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的大鼠氣血兩虛模型、高分子右旋糖苷誘導(dǎo)的微循環(huán)障礙模型、巴豆油致小鼠耳腫模型、醋酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)和小鼠熱板致痛實(shí)驗(yàn)分別考察痹祺膠囊益氣養(yǎng)血、活血通絡(luò)、抗炎及鎮(zhèn)痛功效。

1 材料

1.1 藥品與試劑

痹祺膠囊（0.3 g/粒，批號(hào)408700）購(gòu)自天津達(dá)仁堂京萬(wàn)紅藥業(yè)有限公司；利可君片（20 mg/片，批號(hào)211006）購(gòu)自江蘇吉貝爾藥業(yè)股份有限公司；復(fù)方丹參片（0.32 g/片，批號(hào)20200910）購(gòu)自湖南時(shí)代陽(yáng)光藥業(yè)有限公司；阿司匹林腸溶片（25 mg/片，批號(hào)018200837）購(gòu)自石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司；醋酸地塞米松由天津藥物研究院自制；羅通定片（30 mg/片，批號(hào)201102）購(gòu)自四川迪菲特藥業(yè)有限公司；注射用環(huán)磷酰胺（0.2 g/瓶，批號(hào)1B453A）購(gòu)自Baxter Oncology GmbH；高分子右旋糖苷（葡聚糖T500，批號(hào)H20M10B88790）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；巴豆油由天津天誠(chéng)新藥評(píng)價(jià)有限公司自制；冰醋酸（批號(hào)210312）購(gòu)自天津市康科德科技有限公司；大鼠促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）ELISA 試劑盒（批號(hào)B354857）購(gòu)自Biolegend公司；紅細(xì)胞裂解液（批號(hào)20211202）購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；FITC CD3 抗體（批號(hào)213048）、PE CD4 抗體（批號(hào)1921506）、PerCPeFluor CD8a 抗體（批號(hào)2290323）均購(gòu)自Elabscience公司；凝血酶時(shí)間（thrombin time，TT）測(cè)定試劑盒（批號(hào)032106A）購(gòu)自美德太平洋（天津）生物科技股份有限公司。

1.2 儀器

BC-2800Vet 型全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；SpectraMax M5 型酶標(biāo)儀（美國(guó)Molecular Devices 公司）；BDLSR fortessa 流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD 公司）；BI-2000A＋型醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（成都泰盟軟件有限公司）；LG-R-80F 型全自動(dòng)血液黏度分析儀、LG-Paker 1 型凝血因子分析儀（北京普利生儀器有限公司）；STX123ZH 型電子天平[奧豪斯儀器（常州）有限公司]；YLS-6B 型智能熱板儀（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司）。

1.3 動(dòng)物

SD 大鼠由北京斯貝福生物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)SCXK（京）2019-0010。ICR 小鼠由北京斯貝福生物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)SCXK（京）2019-0010。飼養(yǎng)在天津天誠(chéng)新藥評(píng)價(jià)有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障系統(tǒng)［合格證SYXK（津）2021-0008］，溫度、濕度、換氣次數(shù)由中央系統(tǒng)自動(dòng)控制，溫度20～26 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，通風(fēng)次數(shù)為10～15 次/h 全新風(fēng)，光照為12 h 明、12 h 暗。自由攝食飲水。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用經(jīng)天津藥物研究院新藥評(píng)價(jià)有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（ IACUC ： No.2021120101、2021121701、2022030301、2022041301）。

2 方法

2.1 不同給藥濃度受試藥液

以0.5%羧甲基纖維素鈉（sodium carboxymethyl cellulose，CMC-Na）溶液均勻分散痹祺膠囊，使其給藥濃度分別為低濃度（相當(dāng)于臨床劑量）、中濃度（相當(dāng)于臨床劑量2 倍）、高濃度（相當(dāng)于臨床劑量的4 倍）。

2.2 對(duì)環(huán)磷酰胺氣血兩虛大鼠模型的影響

雄性SD 大鼠40 只，體質(zhì)量200～220 g，除空白組6 只外，其余各組大鼠分別以環(huán)磷酰胺40、40、30 mg/kg 劑量連續(xù)3 d ip 誘導(dǎo)氣血兩虛模型，于第5 天眼眶采血檢測(cè)外周血細(xì)胞數(shù)量判斷模型建立情況。篩選成功建模大鼠并將其分為5 組，分別為模型組、利可君（0.4 g/kg）組和痹祺膠囊（0.4、0.8、1.6 g/kg）組，各組分別ig 給藥，連續(xù)給藥7 d。末次給藥1 h 后采集外周血檢測(cè)血細(xì)胞數(shù)目，其上清采用ELISA 法檢測(cè)EPO 含量；摘取脾臟計(jì)算脾臟指數(shù)，并采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定其免疫細(xì)胞分型。

2.3 對(duì)高分子右旋糖苷誘導(dǎo)血瘀大鼠模型的影響

雄性SD 大鼠36 只，體質(zhì)量200～220 g，隨機(jī)分為6 組，每組6 只，分別為空白組、模型組、復(fù)方丹參片（0.3 g/kg）組和痹祺膠囊（0.4、0.8、1.6 g/kg）組。各組ig 給藥，1 次/d，連續(xù)給藥7 d?？瞻捉M和模型組給予等體積的動(dòng)物專用飲用水。末次給藥30 min 后，每組ip 異戊巴比妥鈉麻醉后，除空白組外，其余各組均iv 10%高分子右旋糖苷（3 mL/kg）。30 min 后，首先采集大鼠腹腔腸系膜微循環(huán)圖像及視頻用于觀察各組腸系膜血液循環(huán)及血液流速的測(cè)定，然后腹主動(dòng)脈采血，部分用于全血血液流變學(xué)指標(biāo)，包括全血不同切速（200、30、3、1 s?1）下的全血黏度；另一部分全血經(jīng)離心后取上清用于TT 檢測(cè)。

2.4 對(duì)巴豆油誘導(dǎo)小鼠耳腫模型的影響

雄性ICR 小鼠60 只，體質(zhì)量18～20 g，隨機(jī)分為6 組，每組10 只，分別為模型組、阿司匹林（0.3 g/kg）組、地塞米松（3 mg/kg）組和痹祺膠囊（0.6、1.2、2.4 g/kg）組。痹祺膠囊各劑量組ig 給藥，1 次/d，連續(xù)給藥7 d；陽(yáng)性對(duì)照組ig 給藥，1次/d，連續(xù)給藥3 d；模型組給予等體積的0.5%CMC-Na 溶液。末次給藥30 min 后，各組以巴豆油50 μL 均勻涂抹于小鼠右耳廓內(nèi)外兩面，誘導(dǎo)耳腫脹模型，致炎4 h 后將小鼠左、右耳沿耳廓線剪下，用手動(dòng)耳腫打孔器（6 mm）沿耳緣相同部位打下左右耳片，稱定質(zhì)量，計(jì)算藥物對(duì)小鼠耳腫脹及耳腫脹抑制率。

腫脹度＝右耳質(zhì)量－左耳質(zhì)量

腫脹抑制率＝(模型組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)/模型組平均腫脹度

2.5 對(duì)小鼠熱板性疼痛反應(yīng)的影響

2.5.1 動(dòng)物篩選 首先將ICR 小鼠置于（55.0±0.5）℃的熱板儀上，記錄小鼠首次舔后足所需的時(shí)間為小鼠的正常痛閾值。選擇正常痛閾值在5～30 s內(nèi)的小鼠（將喜跳躍小鼠剔除）。

2.5.2 動(dòng)物分組及給藥 按照閾值將小鼠分為5組，分別為空白組、羅通定（50 mg/kg）組和痹祺膠囊（0.6、1.2、2.4 g/kg）組，每組8 只。痹祺膠囊各組連續(xù)給藥7 d，陽(yáng)性藥在測(cè)定前單次給藥。

2.5.3 指標(biāo)檢測(cè) 末次給藥結(jié)束后30、60、90、120 min 分別測(cè)定小鼠的舔足反應(yīng)時(shí)間，若小鼠在40 s內(nèi)仍未出現(xiàn)舔后足的情況，為防止多次測(cè)量下小鼠足爪燙傷，停止計(jì)時(shí)，時(shí)間按40 s 計(jì)。

2.6 對(duì)醋酸誘導(dǎo)小鼠扭體反應(yīng)的影響

將ICR 小鼠隨機(jī)分為5 組，空白組、阿司匹林（0.12 g/kg）組和痹祺膠囊（0.6、1.2、2.4 g/kg）組，每組8 只。痹祺膠囊各劑量組ig 給藥，1 次/d，連續(xù)給藥7 d；陽(yáng)性對(duì)照組ig 給藥，1 次/d，連續(xù)給藥3 d；模型組給予等體積的0.5% CMC-Na 溶液。末次給藥1 h 后小鼠ip 0.6%醋酸溶液（0.2 mL/只），注射5 min 后觀察15 min 內(nèi)發(fā)生扭體反應(yīng)的次數(shù)，以腹部凹陷、臀部歪扭、身體扭曲、或抽胯為扭體1 次的標(biāo)準(zhǔn)。記錄扭體次數(shù)，統(tǒng)計(jì)分析各組差異。

扭體抑制率＝(空白組扭體次數(shù)－給藥組扭體次數(shù))/空白組扭體次數(shù)

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 對(duì)環(huán)磷酰胺氣血兩虛大鼠模型的影響

3.1.1 痹祺膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)氣血兩虛模型大鼠外周血細(xì)胞的影響 如表1 所示，環(huán)磷酰胺連續(xù)注射后大鼠外周血細(xì)胞數(shù)量（白細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)量及血紅蛋白）顯著減少（P＜0.01）。痹祺膠囊連續(xù)給藥7 d 后外周血細(xì)胞數(shù)量（白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白）顯著增加，其中1.6 g/kg 痹祺膠囊改善環(huán)磷酰胺氣血兩虛模型中血細(xì)胞數(shù)量效果最好（P＜0.05、0.01）。

表1 痹祺膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的大鼠氣血兩虛模型外周血細(xì)胞數(shù)量的影響 (±s , n = 6)Table 1 Effect of Biqi Capsule on number of peripheral blood cells in cyclophosphamide induced rat model (±s , n = 6)

表1 痹祺膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的大鼠氣血兩虛模型外周血細(xì)胞數(shù)量的影響 (±s , n = 6)Table 1 Effect of Biqi Capsule on number of peripheral blood cells in cyclophosphamide induced rat model (±s , n = 6)

與空白組比較：&P＜0.05 &&P＜0.01；與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01，下表同&P < 0.05 &&P < 0.01 vs blank group; *P < 0.05 **P < 0.01 vs model group, same as below tables

組別 劑量/(g·kg?1) 白細(xì)胞/(×109 個(gè)·L?1) 紅細(xì)胞/(×1012 個(gè)·L?1) 血紅蛋白/(g·L?1)空白 — 18.64±1.53 6.78±0.04 146.60±2.50模型 — 10.46±1.80&& 5.74±0.07&& 133.40±2.93&&利可君 0.4 18.04±1.61* 6.10±0.11* 138.80±2.60痹祺膠囊 0.4 16.84±1.68* 6.06±0.11* 141.40±3.23 0.8 13.78±1.60 6.06±0.18 140.20±1.83 1.6 18.32±2.19* 6.33±0.16** 145.40±2.01**

3.1.2 痹祺膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)氣血兩虛模型大鼠血清EPO 含量的影響 EPO 是一種主要由腎臟產(chǎn)生的糖蛋白激素，是參與紅系造血的主要調(diào)控因子，組織缺血缺氧可刺激腎臟合成及釋放EPO。通過(guò)ELISA 法考察痹祺膠囊對(duì)血清中EPO 含量的影響，如表2 所示，與空白組比較，模型組和各給藥組均可顯著增加血清中EPO 含量（P＜0.05、0.01），提示環(huán)磷酰胺通過(guò)抑制骨髓造血干細(xì)胞，破壞細(xì)胞DNA 結(jié)構(gòu)和功能，影響骨髓造血干細(xì)胞的增殖、分化并抑制骨髓造血功能，從而影響外周血象，外周血細(xì)胞的減少刺激腎臟合成并釋放大量EPO。與模型組比較，1.6 g/kg 痹祺膠囊給藥后，血清中EPO 含量進(jìn)一步增加（P＜0.05），推測(cè)痹祺膠囊通過(guò)進(jìn)一步調(diào)動(dòng)腎臟中EPO 的合成及釋放改善紅系造血系統(tǒng)。

表2 痹祺膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)氣血兩虛模型大鼠血清EPO 含量的影響 (±s , n = 6)Table 2 Effect of Biqi Capsule on EPO content in serum of cyclophosphamide induced deficiency of both qi and blood rat model (±s , n = 6)

表2 痹祺膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)氣血兩虛模型大鼠血清EPO 含量的影響 (±s , n = 6)Table 2 Effect of Biqi Capsule on EPO content in serum of cyclophosphamide induced deficiency of both qi and blood rat model (±s , n = 6)

組別 劑量/(g·kg?1) EPO/(pg·mL?1)空白 — 75.81±5.42模型 — 117.98±14.01&利可君 0.4 123.39±8.86&痹祺膠囊 0.4 141.15±10.30&0.8 119.24±11.07&1.6 175.58±22.74&&*

3.1.3 痹祺膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)氣血兩虛模型大鼠脾臟指數(shù)的影響 脾臟為人體最常見(jiàn)的免疫造血器官之一，臟器指數(shù)可在一定程度上反映機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱和臟器損傷。如表3 所示，環(huán)磷酰胺可導(dǎo)致大鼠脾臟指數(shù)顯著增加（P＜0.01），痹祺膠囊各劑量組均降低脾臟指數(shù)，其中1.6 g/kg 痹祺膠囊和陽(yáng)性藥利可君具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 痹祺膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)氣血兩虛模型大鼠脾臟指數(shù)的影響 (±s , n = 6)Table 3 Effect of Biqi Capsule on spleen index of cyclophosphamide induced deficiency of both qi and blood rat model (±s , n = 6)

表3 痹祺膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)氣血兩虛模型大鼠脾臟指數(shù)的影響 (±s , n = 6)Table 3 Effect of Biqi Capsule on spleen index of cyclophosphamide induced deficiency of both qi and blood rat model (±s , n = 6)

組別 劑量/(g·kg?1) 脾臟指數(shù)/%空白 — 0.30±0.01模型 — 0.47±0.03&&利可君 0.4 0.38±0.03*痹祺膠囊 0.4 0.44±0.03 0.8 0.41±0.03 1.6 0.38±0.02*

3.1.4 痹祺膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)氣血兩虛模型大鼠脾臟CD4+/CD8+細(xì)胞比例的影響 脾臟組織結(jié)構(gòu)受損會(huì)導(dǎo)致T 淋巴細(xì)胞的數(shù)量減少和細(xì)胞因子分泌水平的下降，T 淋巴細(xì)胞一直是細(xì)胞介導(dǎo)的免疫中最重要的調(diào)節(jié)成分，參與免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)失血性休克后，T 淋巴細(xì)胞的功能受到明顯抑制。采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)大鼠脾臟T 淋巴細(xì)胞分型的研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的氣血兩虛模型表現(xiàn)出免疫抑制，即與空白組比較，CD4+/CD8+細(xì)胞比例顯著下降（P＜0.05），而連續(xù)給予痹祺膠囊7 d 可顯著提高CD4+/CD8+細(xì)胞比例（P＜0.05、0.01），改善環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫抑制（圖1）。

圖1 痹祺膠囊對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)氣血兩虛模型大鼠脾臟CD4+/CD8+細(xì)胞比例的影響Fig.1 Effect of Biqi Capsule on spleen CD4+/CD8+ ratio of cyclophosphamide induced deficiency of both qi and blood rat model

3.2 對(duì)高分子右旋糖苷誘導(dǎo)血瘀大鼠模型的影響

3.2.1 痹祺膠囊對(duì)大鼠腸系膜微循環(huán)的影響 如圖2 所示，高分子右旋糖苷造模30 min 后出現(xiàn)血液微循環(huán)障礙，模型組大鼠腸系膜毛細(xì)血管血液流速明顯減慢（P＜0.01），可見(jiàn)紅細(xì)胞微小團(tuán)塊聚集；注射高分子右旋糖苷后，與模型組比較，各給藥組血液微循環(huán)障礙程度明顯減輕（P＜0.05、0.01）。

圖2 痹祺膠囊對(duì)高分子右旋糖苷誘導(dǎo)大鼠毛細(xì)血管流速的影響 (±s , n = 6)Fig.2 Effects of Biqi Capsule on capillary flow rate in rats exposed high molecular dextran (±s , n = 6)

3.2.2 痹祺膠囊對(duì)大鼠全血黏度的影響 如表4 所示，與空白組比較，模型組全血黏度在4 個(gè)切速下均顯著升高（P＜0.05、0.01）；與模型組比較，痹祺膠囊可降低高分子右旋糖苷誘導(dǎo)的全血黏度升高，其中以1.6 g/kg 痹祺膠囊組改善全血黏度效果最好（P＜0.05、0.01）。

表4 痹祺膠囊對(duì)高分子右旋糖苷誘導(dǎo)大鼠全血黏度的影響 (±s , n = 6)Table 4 Effects of Biqi Capsule on whole blood viscosity in rats exposed high molecular dextran (±s , n = 6)

表4 痹祺膠囊對(duì)高分子右旋糖苷誘導(dǎo)大鼠全血黏度的影響 (±s , n = 6)Table 4 Effects of Biqi Capsule on whole blood viscosity in rats exposed high molecular dextran (±s , n = 6)

組別 劑量/(g·kg?1) 全血黏度高切（200 s?1） 中切（30 s?1） 低切（3 s?1） 低切（1 s?1）空白 — 3.93±0.10 6.29±0.16 19.79±0.59 25.36±0.75模型 — 4.55±0.09&& 7.20±0.24& 22.95±1.00& 30.37±1.32&&復(fù)方丹參片 0.3 4.28±0.11 7.06±0.17 22.04±0.85 30.46±1.14痹祺膠囊 0.4 4.09±0.18 6.59±0.17 21.40±0.65 28.32±0.86 0.8 4.13±0.15 6.67±0.21 21.38±1.17 28.28±1.54 1.6 3.76±0.19** 5.99±0.25** 19.14±0.94* 25.32±1.24*

3.2.3 痹祺膠囊對(duì)大鼠血漿TT 的影響 如表5 所示，與空白組比較，高分子右旋糖苷建立微循環(huán)障礙模型顯示血漿TT 顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，1.6 g/kg 痹祺膠囊可顯著延長(zhǎng)血漿TT（P＜0.05），表明痹祺膠囊具有抗凝的作用。

表5 痹祺膠囊對(duì)高分子右旋糖苷誘導(dǎo)大鼠血漿TT 的影響(±s, n = 6)Table 5 Effects of Biqi Capsule on TT in serum of rats exposed high molecular dextran (±s , n = 6)

表5 痹祺膠囊對(duì)高分子右旋糖苷誘導(dǎo)大鼠血漿TT 的影響(±s, n = 6)Table 5 Effects of Biqi Capsule on TT in serum of rats exposed high molecular dextran (±s , n = 6)

組別 劑量/(g·kg?1) TT/s空白 — 34.67±0.90模型 — 31.05±1.22&復(fù)方丹參片 0.3 34.51±2.02*痹祺膠囊 0.4 34.65±1.27 0.8 34.59±2.47 1.6 35.27±1.30*

3.3 對(duì)巴豆油誘導(dǎo)大鼠耳腫的影響

如表6 所示，與模型組比較，痹祺膠囊各劑量組均可顯著改善巴豆油誘導(dǎo)的小鼠耳腫（P＜0.05、0.01），0.6、2.4 g/kg 痹祺膠囊對(duì)巴豆油誘導(dǎo)的耳腫脹抑制率分別為62.22%和84.44%。

表6 痹祺膠囊對(duì)巴豆油耳腫的抑制作用 (±s , n = 10)Table 6 Inhibitory effects of Biqi Capsule on ear edema induced by croton oil in mice (±s , n = 10)

表6 痹祺膠囊對(duì)巴豆油耳腫的抑制作用 (±s , n = 10)Table 6 Inhibitory effects of Biqi Capsule on ear edema induced by croton oil in mice (±s , n = 10)

組別 劑量/(g·kg?1) 腫脹度/mg 腫脹抑制率/%模型 — 4.50±0.58 0.00阿司匹林 0.3 1.50±0.45** 66.67地塞米松 0.003 1.00±0.33** 77.78痹祺膠囊 0.6 1.70±0.30** 62.22 1.2 2.70±0.60* 40.00 2.4 0.70±0.47** 84.44

3.4 對(duì)熱板所致疼痛反應(yīng)的影響

如表7 所示，末次給予低、中劑量痹祺膠囊30 min 后小鼠舔足反應(yīng)時(shí)間較空白組有明顯延長(zhǎng)（P＜0.05），60～90 min 時(shí)痹祺膠囊表現(xiàn)出較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用（P＜0.05、0.01），給藥120 min 時(shí)各劑量組鎮(zhèn)痛作用減弱，而在給藥120 min 內(nèi)，1.2 g/kg 痹祺膠囊效果最好。

表7 痹祺膠囊對(duì)小鼠熱板所致疼痛的影響 (±s , n = 8)Table 7 Effects of Biqi Capsule on hot plate induced aching in mice (±s , n = 8)

表7 痹祺膠囊對(duì)小鼠熱板所致疼痛的影響 (±s , n = 8)Table 7 Effects of Biqi Capsule on hot plate induced aching in mice (±s , n = 8)

組別 劑量/(g·kg?1) 舔足反應(yīng)時(shí)間/s 30 min 60 min 90 min 120 min空白 — 13.59±0.73 13.88±1.16 13.36±1.63 10.32±0.74羅通定 0.050 21.30±3.47& 25.13±3.85& 34.72±3.32&& 35.80±2.27&&痹祺膠囊 0.6 18.10±1.69& 21.24±3.22& 20.19±1.83& 13.95±1.12&1.2 18.61±1.67& 22.47±3.52& 22.22±1.78&& 18.32±2.98&2.4 18.60±3.23 16.79±2.52 18.79±3.12 16.15±2.61&

3.5 痹祺膠囊對(duì)醋酸所致小鼠扭體的鎮(zhèn)痛作用

如表8 所示，痹祺膠囊各劑量組均可顯著降低醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)，抑制率超過(guò)50%，其中1.2 g/kg 痹祺膠囊作用最強(qiáng)。

表8 痹祺膠囊對(duì)醋酸所致小鼠扭體次數(shù)的影響 (±s ,n = 8)Table 8 Effects of Biqi Capsule on writhing frequency induced by acetic acid in mice (±s , n = 8)

表8 痹祺膠囊對(duì)醋酸所致小鼠扭體次數(shù)的影響 (±s ,n = 8)Table 8 Effects of Biqi Capsule on writhing frequency induced by acetic acid in mice (±s , n = 8)

組別 劑量/(g·kg?1) 扭體次數(shù) 抑制率/%模型 — 37.25±4.82 0.00阿司匹林 0.12 10.00±2.65** 73.15痹祺膠囊 0.6 16.00±4.38** 57.05 1.2 14.87±3.07** 60.07 2.4 18.13±7.36* 51.34

4 討論

中醫(yī)認(rèn)為痹證的發(fā)生，“皆因體虛，腠理空疏，受風(fēng)寒濕氣而成”，正氣虧虛，邪氣乘虛而入，閉阻經(jīng)絡(luò)，血行不暢而致瘀，留滯于關(guān)節(jié)而致痹。故臨床以益氣養(yǎng)血、活血化瘀、通絡(luò)止痛為主要治則，痹祺膠囊正是遵循以上原則組方，因此也被稱為“治療痹證的中藥組合物”[6,8]。在臨床實(shí)踐中，痹祺膠囊多用于治療風(fēng)濕、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)增生、肩周炎、頸椎病、腰肌間盤(pán)突出、腰肌勞損、髕骨軟骨病等，其療效確切，是治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的代表藥方[9]。

痹祺膠囊由黨參、白術(shù)、丹參、馬錢(qián)子等10 味藥組成，其中黨參能補(bǔ)脾益肺、養(yǎng)血生津，為補(bǔ)中益氣的良藥，常與補(bǔ)氣健脾除濕的白術(shù)、茯苓同用以治療脾虛氣弱、氣虛乏力等癥，本方中恰以黨參、白術(shù)、茯苓共用，發(fā)揮益氣健脾、益氣養(yǎng)血的功效。此外黨參具有與人參類似的補(bǔ)脾肺之氣的作用而藥力較弱，人參、白術(shù)、茯苓、炙甘草4 藥即為中醫(yī)補(bǔ)益經(jīng)典處方——四君子湯，臨床上若非大補(bǔ)元?dú)猓螯h參益氣健脾不弱人參，故臨床常以黨參代人參，清代鮑相璈《驗(yàn)方新編》中加味四君子湯即以黨參代人參，《中國(guó)藥典》2020 年版四君子丸及四君子顆粒也均以黨參代人參。本方中的黨參、白術(shù)、茯苓3 味藥為四君子湯的主要成分，黨參甘溫益氣、健脾益肺；輔以白術(shù)、茯苓健脾燥濕，加強(qiáng)益氣助運(yùn)之力，共奏補(bǔ)脾益氣、生化氣血之功。三七、川芎、丹參、牛膝4 藥均可活血化瘀，三七活血消腫、止痛力強(qiáng)，川芎活血行氣力強(qiáng)，為氣滯血瘀諸痛癥之要藥，丹參則善活血化瘀、祛瘀生新，牛膝則長(zhǎng)于行經(jīng)活血，加之地龍、馬錢(qián)子性善走竄，可引經(jīng)通絡(luò)、透達(dá)關(guān)節(jié)，多藥配伍既可化體表肌膚血瘀，又能解關(guān)節(jié)經(jīng)絡(luò)阻滯，消腫止痛。甘草可補(bǔ)益脾氣、緩急止痛兼調(diào)和諸藥，同時(shí)減弱馬錢(qián)子毒性。全方10 味藥科學(xué)配伍，益氣養(yǎng)血藥補(bǔ)先天之虛而治本，活血祛瘀藥以祛邪，合用通絡(luò)止痛藥而治標(biāo)，如此可標(biāo)本兼治[10]。

臨床研究證實(shí)，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者存在明顯免疫功能紊亂[11]，劉素芳等[12]臨床研究發(fā)現(xiàn)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎氣虛血瘀型患者治療前T 淋巴細(xì)胞亞群分布紊亂，CD4+T 細(xì)胞與CD4+/CD8+比例增加。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，痹祺膠囊具有調(diào)節(jié)免疫功能、改善動(dòng)脈血流、抗炎鎮(zhèn)痛、對(duì)關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)等作用。臨床研究發(fā)現(xiàn)，痹祺膠囊與來(lái)氟米特聯(lián)合治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎氣虛血瘀型，可下調(diào)血清C 反應(yīng)蛋白、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（interleukin-1，IL-1）、IL-6、IL-22 含量，改善CD4+、CD8+水平與CD4+/CD8+比例，能明顯減輕患者炎癥反應(yīng)及疼痛，進(jìn)一步改善機(jī)體免疫功能，療效顯著，安全性良好[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，痹祺膠囊可提高脾臟CD4+T 淋巴細(xì)胞比例，降低CD8+T 淋巴細(xì)胞比例，提高CD4+/CD8+比例，即通過(guò)改善T 淋巴細(xì)胞亞群紊亂調(diào)控外周血中EPO 含量，提高血細(xì)胞數(shù)量發(fā)揮益氣養(yǎng)血作用。

痹證的病機(jī)是邪氣痹阻經(jīng)絡(luò)、筋骨，留著關(guān)節(jié)，營(yíng)衛(wèi)不通，氣血運(yùn)行受阻[5]。同時(shí)，久病使正氣受損，氣血耗傷，因而呈現(xiàn)不同程度的氣血虧虛和氣虛血瘀等證候。氣可行血，血能載氣，血瘀則氣阻，進(jìn)而加重氣血瘀阻。針對(duì)痹證血瘀阻絡(luò)之癥，中醫(yī)治法以活血通絡(luò)，改善血瘀導(dǎo)致的肌肉關(guān)節(jié)腫脹疼痛，促進(jìn)氣血運(yùn)行以及全身營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的正常輸送，以解除痹證?；钛ńj(luò)法是中醫(yī)治療瘀滯之癥的常用治法，祛瘀生新，調(diào)理阻絡(luò)，疏通氣血循環(huán)，促進(jìn)本體功能恢復(fù)?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)活血化瘀類中藥可通過(guò)改善血液循環(huán)、抑制血栓形成及血小板的聚集，增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，減輕機(jī)體的炎癥反應(yīng)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)，清除炎癥組織中的自由基來(lái)緩解血瘀癥狀[13]。吳啟富等[5]觀察了痹祺膠囊對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血壓計(jì)血液流變學(xué)的影響，選取確診為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎并伴有高血壓患者59 例，經(jīng)治療12 周后，加用痹祺膠囊治療組血液流變學(xué)全血高切黏度、低切黏度、血漿黏度、血沉指標(biāo)均明顯降低，與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果表明痹祺膠囊可改善類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者全血黏度、血漿黏度等血液流變學(xué)高黏狀態(tài)作用，具有活血化瘀的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，痹祺膠囊可降低全血黏度，增加腸系膜微循環(huán)血液流速，延長(zhǎng)TT，發(fā)揮活血化瘀的作用。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病過(guò)程中有多種免疫細(xì)胞參與并介導(dǎo)了自身免疫性炎癥，主要包括T 細(xì)胞、B細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞、粒細(xì)胞等。同時(shí)大量炎癥因子如TNF-α、IL-1、IL-6 等分泌促進(jìn)滑膜細(xì)胞增生、軟骨細(xì)胞凋亡等，導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨的進(jìn)一步破壞[14]。因此調(diào)節(jié)炎性因子水平，減輕炎癥反應(yīng)在治療痹證過(guò)程中具有重要意義。馮其帥等[15]通過(guò)考察痹祺膠囊水提取物及其6 種單體成分甘草苷、甘草酸、丹酚酸B、隱丹參酮、馬錢(qián)子堿、士的寧對(duì)脂多糖誘導(dǎo)小鼠單核/巨噬細(xì)胞株RAW264.7 炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)痹祺膠囊水提取物與隱丹參酮均能抑制一氧化氮和IL-6 分泌，馬錢(qián)子堿、士的寧可抑制RAW264.7 細(xì)胞一氧化氮分泌，表明痹褀膠囊水提取物可抑制炎癥因子分泌，其中主要抗炎成分是隱丹參酮、馬錢(qián)子堿、士的寧。此外研究發(fā)現(xiàn)痹祺膠囊能提高神經(jīng)病理性疼痛大鼠的熱痛閾，具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，其作用機(jī)制可能與調(diào)控電壓門(mén)控鈉通道有關(guān)[16]。Wang 等[17]通過(guò)研究痹祺膠囊對(duì)膠原誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)炎模型的作用發(fā)現(xiàn)痹祺膠囊提取物能夠有效地緩解膠原誘導(dǎo)的炎癥、滑膜增生和軟骨破壞。本研究發(fā)現(xiàn)，痹祺膠囊可抑制巴豆油誘導(dǎo)的耳腫脹和醋酸誘導(dǎo)的扭體反應(yīng)，延長(zhǎng)熱板致痛的舔足反應(yīng)時(shí)間，具有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛作用，且其鎮(zhèn)痛作用具有可探索的中樞鎮(zhèn)痛機(jī)制，同時(shí)痹祺膠囊的抗炎鎮(zhèn)痛作用可緩解炎癥對(duì)軟骨的進(jìn)一步破壞。

綜上，痹祺膠囊調(diào)節(jié)血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)、促進(jìn)血液循環(huán)等作用可能與中醫(yī)活血通絡(luò)功能相應(yīng)，改善細(xì)胞免疫功能可能與益氣健脾功能相關(guān)，調(diào)節(jié)相關(guān)炎癥因子，抑制炎癥惡化等作用可能與其抗炎鎮(zhèn)痛功能相符，如此多靶點(diǎn)、多途徑綜合作用，以此系統(tǒng)性改善相關(guān)疾病狀態(tài)。另外痹祺膠囊高劑量（相當(dāng)于4 倍臨床劑量）在氣血兩虛大鼠、微循環(huán)障礙大鼠及巴豆油耳腫小鼠改善作用最優(yōu)，中劑量組（相當(dāng)于2 倍臨床劑量）在熱板反應(yīng)及醋酸扭體小鼠改善作用最優(yōu)，為后續(xù)進(jìn)一步研究痹祺膠囊的配伍規(guī)律奠定了基礎(chǔ)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突