禾谷鐮刀菌拮抗菌21-1的發(fā)酵條件及穩(wěn)定性分析

張強　張艷茹　霍云鳳　石紅利

摘要：禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）作為一種重要的植物病原真菌，能夠侵染小麥引起的赤霉病等病害的發(fā)生。為探究黃三素鏈霉菌（Streptomycetaceae flavotricini）21-1對禾谷鐮刀菌的生防活性，采用單因素試驗對菌株 21-1 的發(fā)酵條件進行分析，并對無菌發(fā)酵液的穩(wěn)定性進行評價。結(jié)果表明，菌株21-1在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)后可以產(chǎn)生較好的抑菌效果，并且發(fā)酵時間為5 d、起始pH值為中性及堿性、發(fā)酵溫度為28～30 ℃、裝液量為75～100 mL、轉(zhuǎn)速為160～180 r/min的條件下抑菌活性最強。菌株21-1無菌發(fā)酵液對80 ℃以上的高溫敏感，不受紫外線照射時間、酸堿度、胃蛋白酶、胰蛋白酶及蛋白酶K的影響。PCR檢測發(fā)現(xiàn)，菌株21-1具有聚酮合酶pks-Ⅰ和pks-Ⅱ基因。此外，菌株21-1發(fā)酵液能夠抑制禾谷鐮刀菌對小麥胚芽鞘的侵染過程。綜上所述，菌株21-1具有一定的應(yīng)用和開發(fā)潛力。

關(guān)鍵詞：禾谷鐮刀菌；黃三素鏈霉菌；發(fā)酵條件；穩(wěn)定性；赤霉病

中圖分類號：S435.121.4+5文獻標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2023）20-0122-06

小麥赤霉病是我國小麥生產(chǎn)中的重要病害之一，主要由禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）侵染所致，該病害發(fā)生后不僅對小麥產(chǎn)量具有嚴(yán)重威脅，而且還能導(dǎo)致籽粒中毒素超標(biāo)，進而又影響到人畜健康［1-3］。由于缺少高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的抗病品種，生產(chǎn)上主要采用化學(xué)藥劑作為小麥赤霉病的主要防控措施，常用藥劑包括多菌靈、氰烯菌酯等［3-4］?；瘜W(xué)藥劑的長期不合理使用，又加劇了生態(tài)環(huán)境污染以及農(nóng)殘超標(biāo)問題。所以，為了滿足我國小麥產(chǎn)業(yè)的綠色安全發(fā)展，對環(huán)境友好的生物防治措施日益受到人們的重視［5］。

目前，已有多種對禾谷鐮刀菌具有良好生防活性的菌株被發(fā)現(xiàn)，如芽孢桿菌（Bacillus spp.）、假單胞菌（Pseudomonas spp.）及鏈霉菌（Streptomyces spp.）等多個類群［6-7］。劉悅等研究發(fā)現(xiàn)，解淀粉芽孢桿菌（B. amylolyticus）EA19發(fā)酵液可以抑制小麥赤霉病病菌的菌落生長和分生孢子萌發(fā)，而且對小麥赤霉病具有較好的防效［5］。解淀粉芽孢桿菌hzq1601不僅單獨對小麥赤霉病具有防效，而且可以與50%多菌靈可濕性粉劑進行復(fù)配，從而實現(xiàn)減藥增效作用［4］。雖然小麥赤霉病的生物防治研究已廣泛開展，但依然缺少商業(yè)化產(chǎn)品的出現(xiàn)，我國只有枯草芽孢桿菌等少數(shù)產(chǎn)品登記用于小麥赤霉病的防治［8］。所以，篩選高效的生防菌株，并開展相關(guān)的應(yīng)用研究對小麥赤霉病生防菌劑開發(fā)和利用具有重要作用［4］。

黃三素鏈霉菌（S. flavotricini）21-1是筆者所在實驗室從蔬菜大棚土壤中分離獲得的1株對禾谷鐮刀菌具有良好拮抗能力的鏈霉菌菌株，但關(guān)于該菌株的發(fā)酵條件等內(nèi)容未進行研究。因此，本研究主要圍繞菌株21-1發(fā)酵條件和無菌發(fā)酵液穩(wěn)定性等方面開展工作，以明確該菌株的應(yīng)用潛力，為后期生防菌劑的開發(fā)和應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株

禾谷鐮刀菌、黃三素鏈霉菌21-1，由河南科技學(xué)院資源與環(huán)境學(xué)院植物病理學(xué)實驗室分離和保存。

1.2 培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯200.0 g、葡萄糖20.0 g、瓊脂15.0 g、蒸餾水1 L，不加瓊脂的為PDB培養(yǎng)基；高氏一號培養(yǎng)基：可溶性淀粉20.0 g、K2HPO4 0.5 g、NaCl 0.5 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、KNO3 1.0 g、FeSO4·7H2O 0.01 g、瓊脂15.0 g、蒸餾水1 L，不加瓊脂的為高氏一號液體培養(yǎng)基；YG培養(yǎng)基：葡萄糖10.0 g、酵母提取物 10.0 g、蒸餾水1 L，pH值7.0；KMB培養(yǎng)基：蛋白胨20.0 g、甘油10 .0 g、K2HPO4 1.5 g、MgSO4·7H2O 1.5 g、蒸餾水1 L，pH值7.2；發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖25.0 g、蛋白胨25.0 g、酵母提取物5.0 g、MgSO4·7H2O 2.0 g、K2HPO4·3H2O 2.0 g、KH2PO4 2.0 g、CaCO3 5.0 g、蒸餾水1 L，pH值7.2。

1.3 不同發(fā)酵條件對菌株21-1無菌發(fā)酵液抑菌活性的影響

1.3.1 初始培養(yǎng)基 2022年3月于河南科技學(xué)院資源與環(huán)境學(xué)院植物病理學(xué)實驗室開展相關(guān)試驗，將2個1.0 cm大小的菌株21-1菌餅，分別置于 50 mL YG、高氏一號液體、PDB、KMB及發(fā)酵培養(yǎng)基中，28 ℃、180 r/min條件下培養(yǎng)5 d，得到菌株21-1的發(fā)酵液。將發(fā)酵液于12 000 r/min離心20 min，吸取上清液后，用0.22 μm微孔濾膜進行過濾，從而獲得菌株21-1的無菌發(fā)酵液。將不同培養(yǎng)條件下獲得的無菌發(fā)酵液，按照10%體積比與PDA培養(yǎng)基混合倒板，然后在平板中心接入0.5 cm禾谷鐮刀菌菌餅。以加入無菌水的PDA培養(yǎng)基為對照，每個處理重復(fù)3次。25 ℃培養(yǎng)3 d，計算抑菌率，以確定最佳發(fā)酵初始培養(yǎng)基。抑菌率＝（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-0.5 cm）×100%。

1.3.2 發(fā)酵時間 用發(fā)酵培養(yǎng)基對菌株21-1進行發(fā)酵培養(yǎng)，28 ℃、180 r/min條件下分別培養(yǎng)2、3、4、5、6、7 d，參考“1.3.1”節(jié)中的方法分析不同無菌發(fā)酵液對禾谷鐮刀菌的抑制效果，以確定最佳發(fā)酵時間。

1.3.3 發(fā)酵初始pH值 利用1 mol/L HCl和 1 mol/L NaOH分別將發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值調(diào)整為3、5、7、9、11，然后用不同pH值的發(fā)酵培養(yǎng)基對菌株21-1進行培養(yǎng)，28 ℃、180 r/min條件下培養(yǎng) 5 d，參考“1.3.1”節(jié)中的方法分析不同無菌發(fā)酵液對禾谷鐮刀菌的抑制效果，以確定最佳發(fā)酵pH值。

1.3.4 發(fā)酵溫度 用發(fā)酵培養(yǎng)基對菌株21-1進行發(fā)酵培養(yǎng)，分別在24、26、28、30、32 ℃，180 r/min條件下培養(yǎng)5 d，參考“1.3.1”節(jié)中的方法分析不同無菌發(fā)酵液對禾谷鐮刀菌的抑制效果，以確定最佳發(fā)酵溫度。

1.3.5 裝液量 在250 mL三角瓶中分別裝入50、75、100、125、150 mL的發(fā)酵培養(yǎng)基，對菌株21-1進行發(fā)酵培養(yǎng)，28 ℃、180 r/min條件下培養(yǎng)5 d，參考“1.3.1”節(jié)中的方法分析不同無菌發(fā)酵液對禾谷鐮刀菌的抑制效果，以確定最佳裝液量。

1.3.6 轉(zhuǎn)速 用發(fā)酵培養(yǎng)基對菌株21-1進行發(fā)酵培養(yǎng)，分別在140、160、180、200、220 r/min，28 ℃條件下培養(yǎng)5 d，參考“1.3.1”節(jié)中的方法分析不同無菌發(fā)酵液對禾谷鐮刀菌的抑制效果，以確定最佳轉(zhuǎn)速。

1.4 菌株21-1無菌發(fā)酵液的穩(wěn)定性分析

1.4.1 熱穩(wěn)定性 將菌株21-1的無菌發(fā)酵液分別置于40、60、80、100 ℃條件下水浴30 min，冷卻到室溫后，參考“1.3.1”節(jié)中的方法分析不同無菌發(fā)酵液對禾谷鐮刀菌的抑制效果。以未處理的無菌發(fā)酵液為對照，以不加無菌發(fā)酵液的PDA培養(yǎng)基為空白對照，計算不同無菌發(fā)酵液的相對抑菌率。相對抑菌率=（空白對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（空白對照菌落直徑-未處理菌落直徑）×100%。

1.4.2 紫外線穩(wěn)定性 將菌株21-1的無菌發(fā)酵液置于紫外燈下照射（功率40 W，距離30 cm），照射時間分別為30、60、120、240 min。以未處理的無菌發(fā)酵液為對照，以不加無菌發(fā)酵液的PDA培養(yǎng)基為空白對照，對相對抑菌率進行計算。

1.4.3 酸堿穩(wěn)定性 將菌株21-1的無菌發(fā)酵液分別用1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH調(diào)整pH值為3、5、7、9、11，室溫靜置4 h后，再將pH值調(diào)回7。以未處理的無菌發(fā)酵液為對照，以不加無菌發(fā)酵液的PDA培養(yǎng)基為空白對照，對相對抑菌率進行計算。

1.4.4 蛋白酶穩(wěn)定性 在菌株21-1的無菌發(fā)酵液中分別加入1 mg/mL終濃度的胃蛋白酶、胰蛋白酶及蛋白酶K，37 ℃水浴2 h。以未處理的無菌發(fā)酵液為對照，以不加無菌發(fā)酵液的PDA培養(yǎng)基為空白對照，對相對抑菌率進行計算。

1.5 菌株21-1抗菌活性物質(zhì)的PCR擴增

收集菌株21-1菌絲體，利用細菌基因組 DNA 提取試劑盒［天根生化科技（北京）有限公司］對基因組DNA進行提取，以基因組 DNA 為模板，利用通用引物K1（5′-TSAAGTCSAACATCGGBCA-3′）和M6R（5′-CGCAGGTTSCSGTACCAGTA-3′）、A（5′-TSGCSTGCTTGGAYGCSATC-3′）和B（5′-TGGAANCCGCCGAABCCGCT-3′）、A3F（5′-GCSTACSYSATSTACACSTCSGG-3′）和A7R（5′-SASGTCVCCSGTSCGGTAS-3′）分別對pks-Ⅰ、pks-Ⅱ及nrps基因進行擴增［9-10］。PCR反應(yīng)體系為2×Taq PCR Mix 12.5 μL，上游引物和下游引物各 1.0 μL，DNA模板1.0 μL，ddH2O 9.5 μL。PCR反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性30 s，57 ℃退火30 s，72 ℃ 延伸2 min，30個循環(huán)；72 ℃終延伸5 min。擴增產(chǎn)物利用1%濃度的瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。

1.6 菌株21-1的防病效果分析

將小麥種子（百農(nóng)307）無菌水清洗干凈后置于鋪有濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，25 ℃條件下保濕培養(yǎng)進行催芽，將出芽后的種子分別置于菌株21-1發(fā)酵液10倍、50倍及100倍稀釋液中浸泡 12 h。處理后的種子用無菌刀片將小麥胚芽鞘尖端切除，再用脫脂棉蘸取1×106個/mL濃度的禾谷鐮刀菌孢子懸浮液覆蓋在芽鞘切口處。以無菌水浸種為對照，每個處理重復(fù)3次。25 ℃光暗交替（12 h—12 h）條件下培養(yǎng)，每天加入適量無菌水以使濾紙保持濕潤，7 d后對胚芽鞘的發(fā)病情況進行觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同發(fā)酵條件對菌株21-1無菌發(fā)酵液抑菌活性的影響

2.1.1 初始培養(yǎng)基對菌株21-1無菌發(fā)酵液抑菌活性的影響

菌株21-1在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)后獲得的無菌發(fā)酵液抑制作用最強，禾谷鐮刀菌僅在菌餅上有少量菌絲生長，抑菌率達到100%；其次為PDB和KMB培養(yǎng)基，抑菌率分別為71.2%和70.3%；而高氏一號液體和YG所獲無菌發(fā)酵液抑菌活性很低，抑菌率分別為10.9%和1.7%（圖1）。從而說明，菌株21-1抑菌物質(zhì)的產(chǎn)生與培養(yǎng)基組分有關(guān)，其中的發(fā)酵培養(yǎng)基可以更好地誘導(dǎo)該菌株產(chǎn)生抑菌物質(zhì)。

進一步對發(fā)酵培養(yǎng)基所獲得的無菌發(fā)酵液的抑菌效果進行分析，結(jié)果表明，無菌發(fā)酵液的體積比在1%時對禾谷鐮刀菌的生長就具有明顯的抑菌作用，抑菌率為57.0%；無菌發(fā)酵液體積比提高到2%時，抑菌率上升到72.1%；10%及20%體積比條件下，禾谷鐮刀菌的菌絲生長完全受到抑制（圖2）。

2.1.2 發(fā)酵時間對菌株21-1無菌發(fā)酵液抑菌活性的影響

菌株21-1在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)2 d時，無菌發(fā)酵液對禾谷鐮刀菌的抑菌效果較差，抑菌率僅為16.9%； 隨著培養(yǎng)時間的延長 無菌發(fā)酵液的抑菌效果明顯提高，5 d時達到最大；然后又出現(xiàn)下降，7 d時的抑菌率下降到64.5%（圖3-A）。

2.1.3 發(fā)酵初始pH值對菌株21-1無菌發(fā)酵液抑菌活性的影響

在pH值為3、5的酸性條件下，菌株21-1在發(fā)酵培養(yǎng)基中的生長受到明顯影響，并且無菌發(fā)酵液的抑菌率都不足2%；在中性及堿性條件下，無菌發(fā)酵液的抑菌效果不受影響，抑菌率都保持在100%左右（圖3-B）。

2.1.4 發(fā)酵溫度對菌株21-1無菌發(fā)酵液抑菌活性的影響

菌株21-1在24 ℃條件下培養(yǎng)時，無菌發(fā)酵液的抑菌率最低，為86.2%；隨著培養(yǎng)溫度的提高，無菌發(fā)酵液的抑菌率也有所上升，在28 ℃和30 ℃時，抑菌率都在98%以上；但溫度為32 ℃時，抑菌率下降到91.2%（圖3-C）。

2.1.5 裝液量對菌株21-1無菌發(fā)酵液抑菌活性的影響

在裝液量為50 mL時，菌株21-1無菌發(fā)酵液的抑菌率為96.0%；裝液量提高到75、100 mL時，無菌發(fā)酵液的抑菌率最高，都在99%以上；但隨著裝液量的繼續(xù)增多，抑菌率出現(xiàn)下降，150 mL 時的抑菌率只有91.3%（圖3-D）。

2.1.6 轉(zhuǎn)速對菌株21-1無菌發(fā)酵液抑菌活性的影響

在轉(zhuǎn)速為140 r/min條件下，菌株21-1無菌發(fā)酵液的抑菌率為97.1%；轉(zhuǎn)速提高到160、180 r/min 時，無菌發(fā)酵液的抑菌率都保持在99%以上；但隨著轉(zhuǎn)速的提高，抑菌率有所下降，220 r/min 時的抑菌率為94.8%（圖3-E）。以上結(jié)果說明，菌株21-1發(fā)揮其抑菌活性的適合發(fā)酵時間為5 d，pH值為中性及堿性，溫度為28～30 ℃，裝液量為75～100 mL/250 mL，轉(zhuǎn)速為160～180 r/min。

2.2 菌株21-1無菌發(fā)酵液的穩(wěn)定性分析

菌株21-1無菌發(fā)酵液經(jīng)40 ℃處理后，抑菌效果不受影響，但隨著溫度升高，相對抑菌率逐漸下降；100 ℃處理后，相對抑菌率下降到33.5%（圖4-A）。利用紫外線對菌株21-1無菌發(fā)酵液進行照射，在30～240 min時間內(nèi)，相對抑菌率都保持在90%左右（圖4-B）。在pH值為3～9的條件下，菌株21-1無菌發(fā)酵液的抑菌效果不受影響，相對抑菌率保持在100%左右；但在pH值為11的強堿條件下，相對抑菌率有所下降，為95.1%（圖 4-C）。菌株21-1無菌發(fā)酵液分別用胃蛋白酶、胰蛋白酶及蛋白酶K處理后，相對抑菌率都保持在98%左右（圖4-D）。以上結(jié)果表明，菌株21-1無菌發(fā)酵液中的活性物質(zhì)具有良好的穩(wěn)定性。

2.3 菌株21-1抗菌活性物質(zhì)的PCR檢測

聚酮合成酶（polyketide synthase，簡稱PKS）和非核糖體多肽合成酶（non-ribosomal peptide synthetase 簡稱NRPS）是調(diào)控聚酮類物質(zhì)和非核糖體多肽合成的關(guān)鍵酶［11］。PCR擴增后的電泳結(jié)果顯示，菌株21-1中擴增到pks-Ⅰ和pks-Ⅱ基因，而nrps基因沒有被擴增成功（圖5），由此說明，菌株21-1具有聚酮合酶相關(guān)基因，并可能產(chǎn)生相應(yīng)的抗菌活性物質(zhì)。

2.4 菌株21-1的防病效果分析

小麥胚芽鞘接種結(jié)果表明，對照組的胚芽鞘出現(xiàn)明顯的褐色病斑。而分別用菌株21-1發(fā)酵液10倍、50倍及100倍稀釋液處理后的胚芽鞘僅在切口處出現(xiàn)變色，未見病斑的擴展（圖6）。由此說明，菌株21-1對禾谷鐮刀菌侵染小麥胚芽鞘的過程具有一定的抑制作用。

3 討論與結(jié)論

由于放線菌活性物質(zhì)數(shù)量和開發(fā)程度較高，從而被廣泛用于植物病害的生物防治。生防菌活性物質(zhì)產(chǎn)業(yè)化的基礎(chǔ)為發(fā)酵，對發(fā)酵條件進行優(yōu)化是提高生防菌抑菌效果的重要方式［12］。本研究以黃三素鏈霉菌21-1對禾谷鐮刀菌的抑菌活性為指標(biāo)，通過發(fā)酵初始培養(yǎng)基類型的篩選，明確了菌株21-1的最適培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基。由于發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得的菌株21-1無菌發(fā)酵液具有較好的抑菌能力，1%體積比條件下的抑菌率仍然可以達到57.0%，所以本試驗未涉及碳源、氮源及無機鹽的優(yōu)化。由于培養(yǎng)基不同組分之間存在復(fù)雜的相互作用，而且也決定了發(fā)酵水平和經(jīng)濟成本［13］。所以后續(xù)還應(yīng)開展相關(guān)物質(zhì)種類及組成的優(yōu)化試驗。

研究表明，適合的發(fā)酵條件對菌體代謝物的產(chǎn)生具有重要作用，而且影響不同鏈霉菌抑菌活性物質(zhì)產(chǎn)生的發(fā)酵條件各有不同［12，14］。例如直絲紫鏈霉菌（S. rectiviolaceus）A8最適發(fā)酵溫度為28～31 ℃，發(fā)酵時間為8 d，初始pH值為7～8，裝液量為100～200 mL［15。小串鏈霉菌（S. catenulae）XG40最佳發(fā)酵溫度為28 ℃，發(fā)酵時間為6 d，起始pH值為7.0，裝液量為100 mL［16］。本研究采用單因素試驗發(fā)現(xiàn)，菌株21-1發(fā)揮最佳抑菌活性的適宜發(fā)酵時間為5 d，pH值為中性及堿性，溫度為 28～30 ℃，裝液量為75～100 mL，轉(zhuǎn)速為160～180 r/min。其中，發(fā)酵時間及pH值對菌株21-1抑菌活性的影響較大，而溫度、裝液量及轉(zhuǎn)速等發(fā)酵條件對抑菌活性的影響不大。牛倩云等發(fā)現(xiàn)，黃三素鏈霉菌A26發(fā)酵7 d時的無菌發(fā)酵液對谷瘟病菌抑菌效果最好［17］。同一種類的不同菌株在發(fā)酵條件方面存在差異，推測可能與菌株遺傳特征和病原靶標(biāo)抑菌活性評價不同有關(guān)。

抑菌活性物質(zhì)是否具有穩(wěn)定性對菌劑生產(chǎn)和制備十分重要，菌劑在田間使用時會受到光照、溫濕度等多種環(huán)境因素的影響［18］。呂昂等研究發(fā)現(xiàn)，鏈霉菌3-10的發(fā)酵液和提取物對80 ℃以上的高溫敏感，耐酸但不耐堿，也不耐受紫外線的長時間照射［18］。張雨陽等指出，黃三素鏈霉菌15-6發(fā)酵液經(jīng)80 ℃以上的高溫、酸性或堿性以及紫外光照射處理后，對芒果膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）的抑菌效果會出現(xiàn)降低，但耐受蛋白酶及金屬離子的處理［19］。在本研究中，菌株21-1無菌發(fā)酵液經(jīng)80 ℃水浴處理后相對抑菌率下降到81.0%，但在pH值為3～11、紫外線照射時間及3種蛋白酶處理條件下的相對抑菌率幾乎不受影響。推測穩(wěn)定性存在差異可能與菌株來源、培養(yǎng)條件或處理方式不同有關(guān)。

研究表明，鏈霉菌能夠通過聚酮合酶和非核糖體多肽合成酶途徑合成抗菌活性物質(zhì)［20］。歐洲瘡痂鏈霉菌（S. europaeiscabiei）F5基因組中含有 pks-Ⅰ和NRPS基因，說明該菌株可能通過合成聚酮類和非核糖體肽類抗生素發(fā)揮其抑菌作用［11］。本研究通過PCR檢測發(fā)現(xiàn)菌株21-1具有pks-Ⅰ和pks-Ⅱ基因，從而推測除該菌株具有合成相應(yīng)物質(zhì)的能力。但是菌株21-1也可能利用其他途徑或抑菌機制實現(xiàn)其抑菌效果，所以，對于菌株21-1的活性物質(zhì)及抑菌機制還有待于進一步分析。

參考文獻：

［1］程順和，張 勇，別同德，等. 中國小麥赤霉病的危害及抗性遺傳改良［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，2012，28（5）：938-942.

［2］廖 森，方正武，張春梅，等. 小麥抗赤霉病遺傳與機理研究現(xiàn)狀與展望［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2021，49（19）：51-56.

［3］陳 云，王建強，楊榮明，等. 小麥赤霉病發(fā)生危害形勢及防控對策［J］. 植物保護，2017，43（5）：11-17.

［4］張 震，邱海萍，柴榮耀，等. 一株小麥赤霉病生防菌的鑒定及其生防機制初探［J］. 中國生物防治學(xué)報，2022，38（3）：673-680.

［5］劉 悅，曾凡松，龔雙軍，等. 解淀粉芽孢桿菌EA19菌株對小麥赤霉病的防治效果［J］. 植物保護學(xué)報，2020，47（6）：1270-1276.

［6］Dweba C C，F(xiàn)iglan S，Shimelis H A，et al. Fusarium head blight of wheat：pathogenesis and control strategies［J］. Crop Protection，2017，91：114-122.

［7］陳文華，殷憲超，武德亮，等. 小麥赤霉病生物防治研究進展［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，48（4）：12-18.

［8］王 蘋，吳佳文，張海波，等. 我國防治小麥赤霉病的藥劑種類評析［J］. 中國植保導(dǎo)刊，2021，41（1）：56，71-76.

［9］Ayuso-Sacido A，Genilloud O. New PCR primers for the screening of NRPS and PKS-I systems in actinomycetes：detection and distribution of these biosynthetic gene sequences in major taxonomic groups［J］. Microbial Ecology，2005，49（1）：10-24.

［10］關(guān)統(tǒng)偉，滕 蕓，任 丹，等. 羅布泊鹽湖可培養(yǎng)放線菌多樣性及PKSⅡ功能基因篩選［J］. 生物技術(shù)，2014，24（5）：67-71.

［11］鄭文藝，韓海燕，崔海超，等. 歐洲瘡痂鏈霉菌F5的鑒定及其抗菌活性［J］. 微生物學(xué)通報，2022，49（6）：2111-2123.

［12］瞿 佳，孫曉宇，陳 銳，等. 核桃黑斑病拮抗放線菌WMF106發(fā)酵條件優(yōu)化和抑菌物質(zhì)穩(wěn)定性［J］. 微生物學(xué)通報，2022，49（1）：88-100.

［13］楊李玲，黃綿佳，張錫炎，等. 香蕉枯萎病生防鏈霉菌DJ15發(fā)酵條件的優(yōu)化［J］. 熱帶生物學(xué)報，2016，7（3）：343-347.

［14］Yang Y C，Guan Z B，Ding Y R，et al. Fermentation optimization，cloning and sequence analysis of the laccase gene from Shiraia sp. SUPER-H168［J］. Annals of Microbiology，2015，65（1）：575-583.

［15］王明環(huán)，孫愛麗，趙聯(lián)晶，等. 直絲紫鏈霉菌A8發(fā)酵條件優(yōu)化、活性成分初步分析及對水稻紋枯病的防效研究［J］. 中國生物防治學(xué)報，2021，37（4）：804-816.

［16］賴寶春，戴瑞卿，曾天寶，等. 小串鏈霉菌XG40菌株發(fā)酵條件優(yōu)化及其次生代謝產(chǎn)物性質(zhì)研究［J］. 中國生物防治學(xué)報，2022，38（5）：1242-1251.

［17］牛倩云，劉麗青，孫 碩，等. 谷瘟病菌拮抗放線菌的篩選、鑒定及抑菌活性［J］. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（9）：1525-1529.

［18］呂 昂，吳明德，張 靜，等. 鏈霉菌3-10發(fā)酵液及提取物的穩(wěn)定性研究［J］. 中國生物防治學(xué)報，2022，38（1）：250-257.

［19］張雨陽，魏有海，郭良芝，等. 黃三素鏈霉菌15-6發(fā)酵液的抑菌活性研究［J］. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2021（9）：25-28，41.

［20］王 浩，劉 寧，黃 英. 放線菌模塊型聚酮合酶的系統(tǒng)發(fā)育組學(xué)分析及其在聚酮類化合物篩選中的應(yīng)用［J］. 微生物學(xué)報，2010，50（10）：1293-1304.

收稿日期：2022-12-13

基金項目：河南省科技攻關(guān)項目（編號：222102110066）。

作者簡介：張 強（1986—），男，甘肅隴西人，博士，講師，主要從事植物病害生物防治研究。E-mail：zhangqiang4503@163.com。