基于“質(zhì)-量”雙標(biāo)的側(cè)柏葉質(zhì)量分析方法研究

于 浩，李天嬌, 2, 3，包永睿, 2, 3，王 帥, 2, 3，孟憲生, 2, 3*

基于“質(zhì)-量”雙標(biāo)的側(cè)柏葉質(zhì)量分析方法研究

于 浩1，李天嬌1, 2, 3，包永睿1, 2, 3，王 帥1, 2, 3，孟憲生1, 2, 3*

1. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116600 2. 遼寧省中藥多維分析專業(yè)技術(shù)創(chuàng)新中心，遼寧 大連 116600 3. 遼寧省現(xiàn)代中藥研究工程實(shí)驗(yàn)室，遼寧 大連 116600

建立以對(duì)照藥材為基準(zhǔn)物質(zhì)的定性和不依賴多種對(duì)照品定量的側(cè)柏葉藥材“質(zhì)-量”雙標(biāo)控制方法。采用HPLC技術(shù)，以對(duì)照藥材為基準(zhǔn)物質(zhì)建立側(cè)柏葉特征圖譜，通過Q-TOF-MS技術(shù)，鑒定共有峰的化學(xué)成分，以對(duì)照藥材和供試藥材特征峰的相似度，明確藥材真?zhèn)?，即“質(zhì)”；對(duì)內(nèi)標(biāo)成分“柚皮苷”進(jìn)行準(zhǔn)確定量，以內(nèi)標(biāo)成分計(jì)，計(jì)算不同批次供試品中各特征峰的相對(duì)含量，取“平均數(shù)－標(biāo)準(zhǔn)差”作為特征峰化學(xué)成分相對(duì)于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)化學(xué)成分的相對(duì)含量下限，依據(jù)特征峰相對(duì)含量下限明確側(cè)柏葉藥材優(yōu)劣，即“量”。建立的特征圖譜及含量測(cè)定方法符合方法學(xué)考察要求；確定了11個(gè)共有色譜峰，鑒定出了4個(gè)化學(xué)成分，分別為楊梅苷、槲皮苷、穗花杉雙黃酮、扁柏雙黃酮，各側(cè)柏葉供試藥材與側(cè)柏葉對(duì)照藥材的相似度均大于0.90；規(guī)定了側(cè)柏葉藥材特征峰化學(xué)成分相對(duì)含量下限。該方法不依賴多種對(duì)照品，能清晰、快速地判斷藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣，為側(cè)柏葉的質(zhì)量控制方法提供參考。

側(cè)柏葉；對(duì)照藥材；質(zhì)量控制；特征圖譜；楊梅苷；槲皮苷；穗花杉雙黃酮；扁柏雙黃酮

側(cè)柏葉始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為柏科植物側(cè)柏(L.) Franco的干燥枝梢和葉，氣味清香，味道苦澀，歸肺、肝、脾經(jīng)，具有涼血止血、止咳化痰和生發(fā)烏發(fā)等功效，常用于吐血、衄血、咯血、便血及崩漏下血、肺熱咳嗽、血熱脫發(fā)、須發(fā)早白等癥[1-2]。側(cè)柏葉作為一種重要的中藥資源，在我國(guó)除青海、新疆外大部分地區(qū)均有分布[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明，側(cè)柏葉含有楊梅苷、槲皮苷、異槲皮苷、穗花杉雙黃酮以及扁柏雙黃酮，它們是側(cè)柏葉中活性成分，具有抗炎、抗氧化、抗病菌以及止血的藥效作用[4-10]。

目前，側(cè)柏葉藥材質(zhì)量控制方法主要包括單指標(biāo)含量測(cè)定法、多指標(biāo)含量測(cè)定法和指紋圖譜與含量測(cè)定結(jié)合法[11-12]，以上方法具有靈敏度高、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，能夠?yàn)榭刂苽?cè)柏葉藥材提供量化數(shù)據(jù)，但存在著單一指標(biāo)不能反映藥材整體特征、多指標(biāo)含量測(cè)定依賴于多種對(duì)照品且某些指標(biāo)成分不能反映藥效、指紋圖譜只能模糊地評(píng)價(jià)藥材相似性不能清晰地判斷供試品真?zhèn)蝺?yōu)劣的不足，且中藥復(fù)雜體系質(zhì)量評(píng)控技術(shù)難度和高額成本給中藥企業(yè)帶來了巨大的壓力，因而對(duì)中藥臨床合理用藥和臨床療效提升的指導(dǎo)和支持作用一直難以體現(xiàn)。針對(duì)上述問題，本實(shí)驗(yàn)提出了基于“質(zhì)-量”雙標(biāo)的側(cè)柏葉質(zhì)量分析方法研究，緊扣中藥多成分、多功效和整合作用的質(zhì)量?jī)?nèi)涵和特點(diǎn)，以能夠反映其藥效的化學(xué)成分為指標(biāo)；采用一種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)對(duì)特征峰化學(xué)成分進(jìn)行相對(duì)定量，盡可能控制供試藥材有效化學(xué)成分含量同時(shí)，不需要大量購買對(duì)照品，在滿足中藥化學(xué)成分“整體性”與“清晰性”的同時(shí)減輕了中藥復(fù)雜體系質(zhì)量評(píng)控成本。本方法以對(duì)照藥材為基準(zhǔn)物質(zhì)構(gòu)建特征圖譜，并以可代表側(cè)柏葉藥效的有限個(gè)代表性成分作為特征峰，評(píng)價(jià)對(duì)照藥材和供試藥材特征峰的相似度，可以用于判斷側(cè)柏葉的真?zhèn)?；選用保留時(shí)間穩(wěn)定且價(jià)格低廉易獲得的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)作為定量評(píng)價(jià)指標(biāo)，開展基于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的特征峰化學(xué)成分相對(duì)定量研究，通過內(nèi)標(biāo)物質(zhì)化學(xué)成分準(zhǔn)確定量，計(jì)算供試藥材特征峰化學(xué)成分的相對(duì)含量?；凇百|(zhì)-量”雙標(biāo)的側(cè)柏葉質(zhì)量分析方法可有效解決側(cè)柏葉有效成分同時(shí)快速測(cè)定和中藥復(fù)雜體系質(zhì)量評(píng)控成本高的問題。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent-1260 II高效液相色譜儀；Agilent 6550 Q-TOF-MS質(zhì)譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）。

1.2 材料

側(cè)柏葉供試藥材由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)張慧教授鑒定為側(cè)柏(L.) Franco的干燥枝梢和葉，具體信息見表1。側(cè)柏葉對(duì)照藥材（批號(hào)120906-202003，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；對(duì)照品楊梅苷（批號(hào)111860-201703）、槲皮苷（批號(hào)111538-202007）、穗花杉雙黃酮（批號(hào)111902-201603），質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%，均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；扁柏雙黃酮（批號(hào)WKQ-0001065），質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，由四川省維克奇生物科技有限公司提供；乙腈（質(zhì)譜級(jí)，德國(guó)Merck公司），水（純凈水，杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。

表1 側(cè)柏葉來源及批號(hào)信息

2 方法與結(jié)果

2.1 基于側(cè)柏葉對(duì)照藥材的特征圖譜建立

2.1.1 溶液的制備 取側(cè)柏葉對(duì)照藥材粉末0.50 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲30 min，放冷，補(bǔ)足失重，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為參照物溶液；取供試藥材粉末（過4號(hào)篩）0.50 g，按上述方法制成供試品溶液。取適量楊梅苷、槲皮苷、穗花杉雙黃酮、扁柏雙黃酮對(duì)照品精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液。

2.1.2 色譜條件 色譜柱：Agilent Poroshell 120 SB-C18（100 mm×4.6 mm，2.7 μm）；流動(dòng)相為0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脫：0～2 min，5～15% B；2～6 min，15～18% B；6～18 min，18～38% B；18～21 min，38～54% B；21～27 min，54～64% B；27～30 min，64～85% B；體積流量0.8 mL/min；柱溫30 ℃；DAD檢測(cè)器波長(zhǎng)254 nm；進(jìn)樣量5 μL。

2.1.3 特征圖譜的建立 將參照物溶液和供試品溶液，每份樣品平行2次，按色譜條件依次進(jìn)樣檢測(cè)，將254 nm波長(zhǎng)下的圖譜數(shù)據(jù)由分析檢測(cè)儀器中導(dǎo)入中國(guó)藥典委員會(huì)“中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件”（2012.130727版本），獲得側(cè)柏葉藥材的HPLC特征圖譜，見圖1。以側(cè)柏葉對(duì)照藥材的圖譜為參照譜圖，使用中位數(shù)進(jìn)行自動(dòng)匹配，加以多點(diǎn)校正，共標(biāo)定11個(gè)共有峰，共有峰面積占特征圖譜的75%以上，其中7號(hào)峰穩(wěn)定性、重復(fù)性、分離度好、位置居中，故以其為參照峰（S）；將共有模式與對(duì)照藥材特征圖譜進(jìn)行比對(duì)，見圖2。供試品色譜中應(yīng)呈現(xiàn)11個(gè)特征峰，并應(yīng)與對(duì)照藥材色譜圖中的11個(gè)特征峰保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)，見表2。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 專屬性試驗(yàn) 分別取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，各主峰與雜質(zhì)峰分離度良好，專屬性強(qiáng)，見圖3。

圖1 10批供試藥材的HPLC疊加圖譜

圖2 對(duì)照藥材特征圖譜及供試藥材共有模式圖

5-楊梅苷 7-槲皮苷 9-穗花杉雙黃酮 10-扁柏雙黃酮

2.2.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液5 μL，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積，計(jì)算RSD值。各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積RSD值均小于1.0%，表明儀器精密度良好。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液5 μL，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣6次檢測(cè)，測(cè)定各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積，計(jì)算RSD值。各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積RSD值均小于2.6%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 按供試品溶液制備方法制備6份供試樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)定各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積，計(jì)算RSD值。各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積RSD值均小于2.0%，表明方法重復(fù)性良好。

2.3 相似度評(píng)價(jià)

采用中國(guó)藥典委員會(huì)“中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件”（2012.130727版本）進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，該軟件利用夾角余弦法計(jì)算每個(gè)色譜圖與對(duì)照藥材圖譜相比較的相似度。以側(cè)柏葉對(duì)照藥材和供試藥材特征峰的相似度明確側(cè)柏葉藥材真?zhèn)?，按中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)計(jì)算供試品與對(duì)照藥材特征圖譜的相似度應(yīng)不得低于0.90。側(cè)柏葉供試藥材與對(duì)照藥材的相似度均大于0.90，說明所收集的側(cè)柏葉供試藥材的特征峰化學(xué)成分基本一致，質(zhì)量相對(duì)穩(wěn)定，相似度計(jì)算結(jié)果見表3。

表3 供試藥材相似度評(píng)價(jià)結(jié)果

2.4 特征峰化學(xué)成分解析

在初步采用Agilent-1260II高效液相色譜儀利用相對(duì)保留時(shí)間與對(duì)照品比對(duì)的基礎(chǔ)上，采用Agilent 6550 Q-TOF-MS質(zhì)譜儀，進(jìn)行質(zhì)譜分析，運(yùn)用Agilent MassHunter Qualitative Analysis軟件，通過對(duì)照品比對(duì)的方法對(duì)負(fù)離子模式進(jìn)行化學(xué)成分解析，進(jìn)一步明確特征峰的準(zhǔn)確化學(xué)成分。

2.4.1 色譜分析條件 色譜柱：Agilent poroshell 120 SB-C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，2.7 μm）；流動(dòng)相為0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脫程序：0～3 min，5%～15% B；3～6 min，15%～20% B；6～15 min，20%～45% B；15～27 min，45%～85% B；27～32 min，85%～100% B；體積流量0.4 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量1 μL。

2.4.2 質(zhì)譜分析條件 電噴霧離子源（Dual AJS ESI），負(fù)離子模式，毛細(xì)管電壓（Vcap）為3 500 V，干燥氣體體積流量（drying gas flow）為11 L/min，干燥氣體溫度（drying gas temp）為150 ℃，霧化器壓力（neulizer pressure）為172.4 kPa，鞘氣溫度（sheath gas temp）為350 ℃，鞘氣體積流量（sheath gas flow）為10 L/min，質(zhì)量掃描范圍（mass range）為/100～1000。

采用auto MS/MS模式，利用對(duì)照品比對(duì)及數(shù)據(jù)庫查詢等方法對(duì)特征峰化學(xué)成分進(jìn)行解析。負(fù)離子模式鑒定出了11個(gè)特征峰中的4個(gè)化學(xué)成分。其中，5號(hào)峰為楊梅苷、7號(hào)峰為槲皮苷、9號(hào)峰為穗花杉雙黃酮、10號(hào)峰為扁柏雙黃酮，總離子流圖見圖4，鑒定結(jié)果見表4。

2.5 基于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的特征峰化學(xué)成分相對(duì)定量研究

2.5.1 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密稱取槲皮苷對(duì)照品，用甲醇制成配制質(zhì)量濃度分別為0.013 4、0.026 8、0.053 6、0.107 2、0.214 4、0.428 8 mg/mL的溶液，按色譜條件，分別進(jìn)樣檢測(cè)，以質(zhì)量為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸，得到線性回歸方程（＝2461＋4.05）、＝0.999 9。結(jié)果表明內(nèi)標(biāo)物質(zhì)在線性范圍（0.067～2.144 μg）內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖4 側(cè)柏葉負(fù)離子模式總離子流圖

表4 正、負(fù)離子模式特征峰化學(xué)成分解析結(jié)果

S該化合物是由對(duì)照品進(jìn)行指認(rèn)

SThis compound was identified using reference standards

2.5.2 精密度試驗(yàn) 同“2.2.2”項(xiàng)下方法，計(jì)算槲皮苷相對(duì)峰面積RSD不高于1.50%，表明儀器精密度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 同“2.2.3”項(xiàng)下方法，計(jì)算槲皮苷相對(duì)峰面積RSD不高于1.66%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 同“2.2.4”項(xiàng)下方法，計(jì)算槲皮苷相對(duì)峰面積RSD值不高于1.9%，表明方法重復(fù)性良好。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱定側(cè)柏葉藥材粉末6份，分別精密加入槲皮苷對(duì)照品適量，按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算得到柚皮苷的平均加樣回收率為99.67%，RSD為1.06%。

2.5.6 耐用性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，考察不同規(guī)格的色譜柱（Agilent poroshell 120 SB-C18、Agilent poroshell 120 EC-C18）、不同的高效液相色譜儀（Agilent-1260Ⅱ高效液相色譜儀、Agilent-1290型高效液相色譜儀）、不同柱溫（25、30、35 ℃）及不同流速（0.6、0.8、1.0 mL/min）對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。結(jié)果顯示，指認(rèn)出的4個(gè)化學(xué)成分的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.92%，相對(duì)峰面積的RSD均小于1.07%，表明該方法的耐用性良好。

2.5.7 含量測(cè)定 根據(jù)《中國(guó)藥典》2020版?zhèn)劝厝~“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法檢測(cè)，所有供試品均能符合藥典規(guī)定（槲皮苷不得少于0.10%）。7號(hào)峰“槲皮苷”為《中國(guó)藥典》2020版中側(cè)柏葉“含量測(cè)定”項(xiàng)下的指標(biāo)之一，該峰分離效果好、保留時(shí)間穩(wěn)定居中、標(biāo)準(zhǔn)品價(jià)格低廉，故以其作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，開展基于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的特征峰化學(xué)成分相對(duì)定量研究。取供試品藥材，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件分析測(cè)定槲皮苷含量，每個(gè)供試品平行3份，結(jié)果見表5。每個(gè)供試品中特征峰化學(xué)成分的相對(duì)含量計(jì)算公式如下：

特征峰相對(duì)含量＝特征峰峰面積×(槲皮苷含量/槲皮苷峰面積)

取“平均數(shù)－標(biāo)準(zhǔn)差”作為特征峰化學(xué)成分相對(duì)于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)化學(xué)成分的相對(duì)含量下限，供試藥材根據(jù)此方法測(cè)得的特征峰相對(duì)含量不低于該含量下限[13]，結(jié)果見表6。

表5 內(nèi)標(biāo)物質(zhì)槲皮苷的準(zhǔn)確定量結(jié)果(n＝2)

表6 基于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的特征峰相對(duì)定量結(jié)果(, n = 3)

3 討論

中藥在我國(guó)已有數(shù)千年發(fā)展歷史，是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥的重要組成部分。中藥質(zhì)量是保證中藥臨床應(yīng)用安全、有效的前提，但在對(duì)中藥進(jìn)行質(zhì)量控制的過程中存在基原復(fù)雜、不同批次樣品中成分差異大等問題，使中藥質(zhì)量難以保證均一穩(wěn)定。目前，《中國(guó)藥典》2020年版中質(zhì)量控制項(xiàng)對(duì)多成分指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定的中藥品種已有上百種，且有些對(duì)照品價(jià)格昂貴，加大了企業(yè)生產(chǎn)和民眾的用藥成本。

為解決以上問題，本研究創(chuàng)新研究思路，不依賴多種對(duì)照品，以價(jià)格低廉易獲得的對(duì)照藥材為基準(zhǔn)物質(zhì)的定性和不依賴多種對(duì)照品定量的側(cè)柏葉藥材“質(zhì)-量”雙標(biāo)控制方法。通過構(gòu)建側(cè)柏葉對(duì)照藥材及10個(gè)不同產(chǎn)地側(cè)柏葉供試藥材的特征圖譜，以對(duì)照藥材為基準(zhǔn)物質(zhì)，評(píng)價(jià)對(duì)照藥材和供試藥材特征峰的相似度，可以用于判斷側(cè)柏葉藥材的真?zhèn)?，即“質(zhì)”；同時(shí)準(zhǔn)確定量1種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)化學(xué)成分，計(jì)算側(cè)柏葉藥材其余各特征峰的相對(duì)含量，確定的各特征峰相對(duì)含量的下限能夠區(qū)分側(cè)柏葉藥材優(yōu)劣，即“量”。本研究所提出的側(cè)柏葉藥材的“質(zhì)-量”控制方法能夠有效判斷藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣，形成一個(gè)科學(xué)、可控的中藥質(zhì)量控制體系，旨在為中藥質(zhì)量控制和中藥產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展提供探索性解決方案。

本研究將與對(duì)照藥材分離度和相似度良好、信噪比大于10作為特征峰的選取依據(jù)，共確定了11個(gè)特征峰。采用質(zhì)譜技術(shù)指認(rèn)出的側(cè)柏葉特征峰化學(xué)成分的基本母核為2-苯基色原酮[14-15]。扁柏雙黃酮對(duì)腫瘤細(xì)胞具有抑制作用[16]；穗花杉雙黃酮具有抗金葡萄球菌作用[17]；槲皮苷、楊梅苷與側(cè)柏葉的止血效果息息相關(guān)[18]。上述化學(xué)成分被認(rèn)為是側(cè)柏葉中的主要活性成分，能全面科學(xué)地反映中藥側(cè)柏葉的內(nèi)在質(zhì)量[19]。

本實(shí)驗(yàn)所收集的市面所售不同產(chǎn)地供試品，旨在建立基于“質(zhì)-量”雙標(biāo)的側(cè)柏葉質(zhì)量分析方法，所收集的側(cè)柏葉供試藥材與側(cè)柏葉對(duì)照藥材的相似度均大于0.90[20]，說明所收集的側(cè)柏葉供試藥材的特征峰化學(xué)成分基本一致，但僅采用10批不同產(chǎn)地的藥材規(guī)定特征峰相對(duì)含量下限，缺乏全面性，因此，需要更進(jìn)一步大量收集不同產(chǎn)地、不同批次的藥材，完善該套方法，以期有效判斷藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣，形成一個(gè)科學(xué)、可控的中藥質(zhì)量控制體系，在滿足藥材多項(xiàng)質(zhì)量控制項(xiàng)的同時(shí)減輕企業(yè)需大量購買對(duì)照品的經(jīng)濟(jì)壓力，推動(dòng)中醫(yī)藥事業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Research on quality analysis method ofbased on “quality-quantity” double standard

YU Hao1, LI Tian-jiao1, 2, 3, BAO Yong-rui1, 2, 3, WANG Shuai1, 2, 3, MENG Xian-sheng1, 2, 3

1. College of Pharmacy, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600, China 2. Liaoning Multi-dimensional Analysis of Traditional Chinese Medicine Technical Innovation Center, Dalian 116600, China 3. Liaoning Modern Traditional Chinese Medicine Research and Engineering Laboratory, Dalian 116600, China

To establish a “quality-quantity” double standard control method for Cebaiye(), which is qualitative based on the reference traditional Chinese medicinal materials (TCMM) as standard substances and quantitative without relying on multiple reference substances.HPLC technology was used to establish the characteristic chromatogram ofbased on the reference TCMM as standard substances. The chemical constituents of common peaks were identified by Q-TOF-MS technology, and the authenticity ofwas determined by the similarity of characteristic peaks of the reference TCMM and the tested TCMM. The above statement is “quality”. The relative content of each characteristic peak in different batches of the tested TCMM was calculated by accurate quantition of internal standard component naringin. The “average value－standard deviation” was taken as the lower limit of the relative content of characteristic peak chemical components relative to chemical composition of internal standard substance, and the quality ofwas determined according to the lower limit of the relative content of characteristic peak. The above statement is “quantity”.The characteristic chromatogram and content determination method met the requirements of methodology investigation. A total of 11 common chromatographic peaks were determined, and four chemical components were identified, which were myricetin, quercitrin, amentoflavone, hinokiflavone. The similarity between the tested TCMM and reference TCMM was greater than 0.90. The lower limit of relative content of chemical components ofcharacteristic peak was defined.The method can judge the authenticity of medicinal materials clearly and quickly without many reference substances, and provide reference for quality control of.

(L.) Franco; reference traditional Chinese medicinal materials; quality control; characteristic chromatogram; myricetin; quercitrin; amentoflavone; hinokiflavone

R286.2

A

0253 - 2670(2023)22 - 7319 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.22.007

2023-05-06

遼寧省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2020JH2/10300088）：基于中醫(yī)典籍的經(jīng)典名方槐花散藥學(xué)研究

于 浩，男，碩士研究生，主要從事藥物分析研究。Tel: 18742572751 E-mail: y18742572751@163.com

通信作者：孟憲生，男，博士生導(dǎo)師，主要從事藥效物質(zhì)組學(xué)和作用機(jī)制整合研究。E-mail: mxsvvv@126.com

[責(zé)任編輯 時(shí)圣明]